冠心平对麻醉犬冠脉结扎所致急性心肌缺血的影响*

李芳　杨成流　李卓琼　周军　毕宇安　王振中　萧伟△（1.江苏康缘药业股份有限公司，江苏　连云港　222001；2.中药制药过程新技术国家重点实验室，江苏　连云港　222001）



冠心平对麻醉犬冠脉结扎所致急性心肌缺血的影响*

李芳1，2杨成流1，2李卓琼1，2周军1，2毕宇安1，2王振中1，2萧伟1，2△
（1.江苏康缘药业股份有限公司，江苏连云港222001；2.中药制药过程新技术国家重点实验室，江苏连云港222001）

【摘要】目的观察冠心平对麻醉犬冠脉结扎所致心肌缺血的影响。方法采用麻醉犬冠状动脉左前降支结扎造成急性心肌缺血模型，将36只Beagle犬随机分为假手术组、模型组、心可舒组及冠心平高、中、低剂量组，观察心外膜电图、检测血氧及进行组织病理学检查。结果冠状动脉结扎后，各组心肌缺血犬的∑-ST显著增加，与假手术组比较有明显差异（P＜0.01）。模型组给予生理盐水后，∑-ST无明显影响，与假手术组比较仍有显著性差异（P＜0.01）。给予冠心平后，冠心平高、低剂量组与模型对照组比较，在给药60、120、180 min时∑-ST有显著降低（P＜0.05或P＜0.01），冠心平中剂量在给药120、180 min时∑-ST有显著降低（P＜0.01）。冠状动脉结扎后，各组心肌缺血犬的N-ST较假手术组明显增加（P＜0.01）。模型组给予生理盐水后，N-ST无明显影响，与假手术组比较仍具有显著性差异（P＜0.01）。给予冠心平后，冠心平高、中、低剂量组在给药60、120、180 min时较模型组N-ST明显降低（P＜0.05或P＜0.01）。冠状动脉结扎后，各组心肌氧利用率呈下降趋势，但与假手术组比较无显著差异（P＞0.05）。给药3 h与给药前比较，心肌氧利用率呈上升趋势，冠心平高、中剂量组给药后3 h与给药前比较有显著差异（P＜0.01）。假手术组心肌细胞横纹清晰，核居中，未见变性坏死；间质未见血管扩张及炎细胞浸润及纤维组织增生。模型组主要表现心肌部分区域见心肌细胞小片状或小灶性坏死，表现为细胞轮廓尚可见，但胞浆红染、心肌纤维水肿溶解断裂、胞核固缩碎裂或消失；心肌间质水肿、内有多量炎细胞浸润（中性粒细胞、淋巴细胞和浆细胞），个别坏死区附近可见肉芽组织以及增生的纤维结缔组织。各给药组心肌细胞未见坏死、部分区域可见心肌纤维水肿，溶解断裂；间质水肿，有少许炎细胞浸润和纤维组织增生。冠心平各剂量组较模型组病变均有改善，但以高剂量组最为明显、其次是中剂量组、低剂量组。结论冠心平对犬急性心肌缺血具有明显的保护作用。

【关键词】冠状动脉结扎心肌缺血冠心平麻醉犬

冠心病作为心血管常见病、多发病，其发病率居高不下。冠心平处方是江苏省名中医李七一教授的临床经验方，用于治疗气阴两伤、痰血瘀阻型冠心病，由黄精、当归、三七、瓜萎皮、甘松5味药组成，该药源自古方化裁和经验积累。本文对冠心平治疗麻醉犬急性心肌缺血的药效学进行了研究。

1　材料与方法

1.1药物与试剂冠心平，江苏康缘药业股份有限公司，批号:100326，规格10 g/袋；心可舒片，山东沃华医药科技股份有限公司，批号:091273，规格0.3 g/片；肝素钠注射液，江苏常州千红生化制药股份有限公司，批号:091022；戊巴比妥钠，上海化学试剂采购供应站分装厂，批号:860122；生理盐水，山东鲁抗辰欣药业有限公司提供，批号:1001044102；葡萄糖氯化钠注射液，华裕制药有限公司，批号:10032901。

1.2实验动物健康Beagle犬（普通级）:由扬州四方实验动物科技有限公司提供，雌雄兼用，体质量8～12 kg，合格证号为SCXK（苏）2008-0006。采用邢台华兴饲料有限公司提供全价营养犬粮，批号:20100522，饲养于普通级环境中，24 h昼夜交替环境，膨化饲料，每天2次，自由饮水。

1.3仪器MP150型多导生理记录仪，美国Biopac公司；ALV-V10动物呼吸机，上海奥尔科特生物科技有限公司，GEM3000血气分析仪:美国Instrumentation Laboratory公司，FA1004型电子分析天平:上海精科天平厂。

1.4模型制备［1-7］健康Beagle犬36只，雌雄兼用，随机分为假手术组、模型组、心可舒组、冠心平高、中、低剂量组，每组6只。称质量后以30 mg/kg戊巴比妥钠麻醉，背位固定，监测肢体Ⅱ导联心电图。切开颈部皮肤后进行气管插管并连接动物呼吸机，维持正常通气。分离股动脉和股静脉。股动脉插管并与压力换能器相连监测平均动脉血压、心率变化，股静脉滴注5%葡萄糖氯化钠注射液。右侧卧位固定，于左侧第4肋间开胸，将心脏暴露后剪开心包，直接将每个电极分散地固定于心外膜表面，记录心外膜电图。分离冠状动脉左前降支第二分支处穿线以备结扎用，通过冠状动脉两步结扎法建立Beagle犬急性心肌缺血模型。冠心平各剂量组和心可舒组的操作方法与模型组相同，但假手术组只穿线不结扎。

1.5给药方法心可舒组予心可舒0.36 g/kg；冠心平高剂量组予6.7 g生药/kg；冠心平中剂量组予3.35 g生药/kg；冠心平低剂量组予1.675 g生药/kg；假手术组和模型组给予等剂量的生理盐水（2 mL/kg），造模当日给药1次。待完全结扎15 min后进行记录，作为给药前对照，然后经十二指肠给予各组药物，于给药后30、60、120、180 min记录心外膜电图。

1.6观察指标1）心外膜电图观察:以ST段抬高≥2 mV为判断标准，计算心肌缺血的范围（ST段抬高总点数N-ST）及心肌缺血的程度（ST段抬高的总毫伏数∑-ST）。2）血氧检测:取给药前以及给药后180 min的股动脉血和股静脉血，采血后立即将注射器针头插入橡皮塞，以隔绝空气。应用血气自动分析仪测定血氧含量。3）组织病理学检查:取冠脉结扎部位下1 cm处的少量心室肌组织，用10%甲醛固定后，分别进行病理组织切片检查。观察组织的病理学变化，具体观察心肌细胞的水肿、变性坏死、心肌间质的充血水肿和炎细胞浸润及纤维组织的增生，并对主要病变按轻重程度分别记作无病变（0分）、轻度病变（1分）、中度病变（2分）和重度病变（3分）。

1.7统计学处理采用SPSS19.0统计学软件。计量资料均以表示，两组间的均数检验采用t检验，两两比较采用LSD-t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1各组犬∑-ST、N-ST比较见表1，表2。冠状动脉结扎后，各组心肌缺血犬的∑-ST显著增加，与假手术组比较有显著性差异（P＜0.01）。模型组给予生理盐水后，∑-ST无明显影响，与假手术组比较仍有显著性差异（P＜0.01）。冠心平高、低剂量组在给药60、120、180 min时∑-ST有显著降低，与模型组比较有显著差异（P＜0.05或P＜0.01），冠心平中剂量组在给药120、180 min时∑-ST有显著降低，与模型组比较有明显差异（P＜0.01）。冠状动脉结扎后，各组心肌缺血犬的NST明显增加，与假手术组比较有显著差异（P＜0.01）。模型组给予生理盐水后，N-ST无明显影响，与假手术组比较仍具有显著差异（P＜0.01）。冠心平高、中、低剂量组在给药60、120、180 min时N-ST明显降低，与模型组比较有显著差异（P＜0.05或P＜0.01）。

表1　各组犬∑-ST比较

表1　各组犬∑-ST比较

与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与假手术组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

组别　n模型组　6心可舒组　6结扎前　结扎后15 min给药后7.29±2.44 124.03±22.20△△116.4±21.00△△7.61±2.97 126.26±50.63△△91.61±35.57 100.2±20.31△△71.59±26.40 89.77±11.51△△83.44±11.50△△55.56±24.05*43.04±12.16**30 min　60 min　120 min　180 min假手术组　6　7.86±1.33 13.08±1.91　11.03±1.74　11.49±2.31 11.47±1.97　10.69±2.52冠心平高剂量组　6 10.12±3.88 122.54±11.66△△96.61±20.17　68.91±16.46*49.47±18.92**31.74±12.11**冠心平中剂量组　6　7.85±0.31 136.23±27.13△△124.08±22.72　83.97±14.67 59.71±18.63**48.26±19.95**冠心平低剂量组　6　7.86±2.18 143.53±37.47△△93.95±51.42　52.62±15.25**38.80±15.47**33.33±16.80**

表2　各组犬N-ST比较

表2　各组犬N-ST比较

组别　n模型组　6心可舒组　6结扎前　结扎后15 min给药后0.17±0.41 12.00±0.00△△　12.00±0.00△△0.00±0.00 12.00±0.00△△　11.83±0.41 12.00±0.00△△11.33±1.03 12.00±0.00△△11.83±0.41△△8.67±1.97**　8.17±1.17**30 min　60 min　120 min　180 min假手术组　6　0.00±0.00 1.33±1.03　0.83±0.75　0.33±0.52　0.83±0.75　0.33±0.52冠心平高剂量组　6　0.17±0.41 12.00±0.00△△　11.67±0.82　10.33±1.37*　8.33±2.42**　5.50±2.17**冠心平中剂量组　6　0.00±0.00 12.00±0.00△△　12.00±0.00　10.00±1.26**　8.17±2.23**　6.00±2.68**冠心平低剂量组　6　0.00±0.00 12.00±0.00△△　11.83±0.41　9.50±1.22**　7.33±1.63**　5.67±2.42**

2.2各组犬心肌氧利用率比较见表3。冠状动脉结扎后，各组心肌氧利用率呈下降趋势，但与假手术组比较无显著性差异（P＞0.05）。给药3 h与给药前比较，心肌氧利用率呈上升趋势，冠心平高、中剂量组给药后3 h与给药前比较有显著差异（P＜0.01）。

表3　各组犬心肌氧利用率的影响

表3　各组犬心肌氧利用率的影响

与本组0 h比较，▲P＜0.01。

组别　n模型组　6心可舒组　6氧差（A-V）20.33±23.95 37.17±13.33 28.50±23.86 51.67±15.72心肌氧利用率（AO2-VO2）/AO20.27±0.32　0.49±0.13 0.29±0.26　0.58±0.13 0 h　3 h　0 h　3 h假手术组　6 44.83±21.93 50.67±18.07　0.49±0.12　0.58±0.09冠心平高剂量组　6 29.00±14.48 50.50±11.26　0.38±0.15　0.61±0.07▲冠心平中剂量组　6 29.17±12.42 57.50±25.41　0.35±0.14　0.64±0.17▲冠心平低剂量组　6 29.17±9.33 47.67±29.60　0.41±0.12　0.53±0.25

2.3各组犬心室肌组织比较见表4，图1。假手术组心肌细胞横纹清晰，核居中，未见变性坏死；间质未见血管扩张及炎细胞浸润及纤维组织增生。模型组主要表现心肌部分区域见心肌细胞小片状或小灶性坏死，表现为细胞轮廓尚可见，但胞浆红染、心肌纤维水肿溶解断裂、胞核固缩碎裂或消失；心肌间质水肿、内有多量炎细胞浸润（中性粒细胞、淋巴细胞和浆细胞），个别坏死区附近可见肉芽组织以及增生的纤维结缔组织。各给药组心肌细胞未见坏死、部分区域可见心肌纤维水肿，溶解断裂；间质水肿，有少许炎细胞浸润和纤维组织增生。冠心平各剂量组较模型组病变均有改善，但以高剂量组最为明显，其次是中剂量组、低剂量组。

表4　各组心肌病理组织学检查结果

表4　各组心肌病理组织学检查结果

组别　n模型组　6心可舒组　6心肌细胞2.50±0.55△△1.67±0.82△1.17±0.75*　0**间质2.50±0.84△△　1.17±0.75△1.50±1.05*　0**水肿　坏死　充血水肿　炎细胞假手术组　6　0　0　0　0冠心平高剂量组　6　1.17±0.41**　0**　1.33±1.03*　0**冠心平中剂量组　6　2.00±0.89*　0.50±0.84*　1.33±0.82*　0.50±0.84*冠心平低剂量组　6　2.83±0.41　0.33±0.52*　2.00±0.89*　0.50±1.22*

3　讨论

冠心病是临床常见病，其中医证候动物模型包括冠心病心阳虚证大鼠模型、心血瘀阻证大鼠模型、气虚痰浊证兔模型等，但上述模型研制较少，方法学有待进一步深入［8］。由于犬的心脏生理结构与人比较接近，结扎犬心脏冠状动脉前降支造成急性心肌缺血模型，具有梗死发生快、梗死范围固定等特点［9］，是研究抗心肌缺血药物药效的经典模型。

冠心平针对冠心病的常见病机“气阴两虚、痰瘀痹阻”组方，治疗气阴两伤、痰血瘀阻型冠心病。心可舒具活血化瘀，行气止痛的功效，处方中山楂可以消积化痰、活血化瘀；葛根具有养阴生津的功效。心可舒同时还具有滋阴化痰的作用，与冠心平功效基本相似。因为冠心平颗粒在功效上也是一种创新，所以就选择了最为接近其功效的阳性药心可舒。

冠心病主要病理基础是冠状动脉痉挛或梗塞以及心肌对氧需求量的增加，造成心肌缺血缺氧进而发生心肌变性坏死［10］。心电图是早期诊断心肌梗死最敏感的方法［11］。心肌缺血是冠心病基本的病理生理过程，其根本防治措施是改善血供、降低氧耗及清除或对抗有害物质对心肌的不良影响［12］。因此，本实验选取了心外膜电图、心肌氧利用率和心肌组织病理学检查作为检测指标。本研究表明冠心平可降低心外膜电图上∑-ST、N-ST，能够改善心肌缺血犬心肌缺血程度和范围，增加心肌氧利用率，减轻心肌组织病变程度，改善异常心肌活动、保护心肌细胞，这为其临床应用提供进一步的理论依据。

图1　各组犬心室肌组织比较（HE染色，200倍）

参考文献

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·研究报告·

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Effect of Guanxinping on Anesthetic Dog with Acute Myocardial Ischemia Caused by Coronary Artery Ligation

LI Fang，YANG Chengliu，LI Zhuoqiong，et al.Jiangsu Kanion Parmaceutical Co.，Ltd.，Jiangsu，Lianyungang 222001，China.

【Abstract】Objective: To study the effect of Guanxinping on anesthetic dog with myocardial ischemia caused by coronary artery ligation.Methods: The acute myocardial ischemic canine models were established by left anterior descending artery ligature after opening thoracic cavity under anesthesia.36 Beagle dogs were randomly assigned to six groups，which were the sham operation group，the model group，Xinkeshu group，and Guanxinping groups with high，median，and low doses of the drugs.The epicardial electrical diagram and blood oxygen were observed，and histopathological examination was evaluated.Results: The range and the degree of myocardial ischemia，as well as the pathogenic change of myocardium in the Guanxinping groups were significantly lower than that of the model group.Moreover，myocardial oxygen utilization rate of 3 h after the treatment rised obviously.Conclusion: Guanxinping has obvious protective effect on acute myocardial ischemiain dogs.

【Key words】Coronary artery ligation；Myocardial ischemia；Guanxinping；Anesthetic dog

中图分类号:R285.5

文献标志码:A

文章编号:1004-745X（2016）01-0014-04

doi:10.3969/j.issn.1004-745X.2016.01.005

*基金项目：科学技术部国家重大新药创制项目（2013ZX090402203）

通信作者△（电子邮箱：kanionlunwen@163.com）

收稿日期（2015-08-16）