影响神经元特异性烯醇化酶测定因素的分析及验证

卢志芳，杨先凯*

（1．徐州民政医院，江苏 徐州 221003；2．徐州市云龙区天桥社区卫生服务中心，江苏 徐州 221009）

・基础研究・

影响神经元特异性烯醇化酶测定因素的分析及验证

卢志芳1，杨先凯2*

（1．徐州民政医院，江苏 徐州 221003；2．徐州市云龙区天桥社区卫生服务中心，江苏 徐州 221009）

目的本文旨在探讨影响神经元特异性烯醇化酶（NSE） 测定结果的因素。方法根据受试者样本放置时间，溶血程度，黄疸程度的不同，采用化学发光免疫法测定各组NSE水平，通过统计学方法进行数据分析。结果正常人和3例小细胞肺癌患者血液标本分别放置0.5 h、1 h、3 h 和5 h，NSE检测结果差异有统计学意义（P＜0.05）；溶血对NSE的测定影响很大，且溶血的标本中每增加1 g血红蛋白（Hb）就可测定出32.45 ng/mL的的NSE；不同浓度的黄疸样本检测结果与对照组结果差异无统计学意义（P＞0.05）。结论NSE的测定受外界因素影响，会出现假阳性，并影响到临床诊疗。在实际工作中，应避免溶血，且及时送检并分离血清从而提高结果的准确性。

神经元特异性烯醇化酶（NSE）；化学发光免疫检测；标本；影响因素；

作为烯醇化酶的同工酶，神经元特异性烯醇化酶（NSE）被公认是监测小细胞肺癌的首选标志物。另一方面NSE同神经损伤所致的许多神经性疾病关系密切[1-2]。由于红细胞和血小板中同时存在着NSE，血细胞的异常代谢活动， 会导致血清中NSE的成分发生变化。因此在测定中，应避免外界因素干扰血清中NSE的原有水平，从而影响实验结果[3]。本研究旨在探讨影响NSE检测的影响因素，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

标本：健康体检者30例，男性20例，女性10例，年龄20～40岁，均无抽烟史，无基础病；小细胞肺癌患者3例，为2016年4～10月确诊的我院男性住院患者，年龄45～60岁。自制溶血标本：取无溶血的正常人混合血清标本，人工使其溶血后高速离心，取上清备用。自制黄疸标本：取无溶血的正常人混合血清标本，人工加入特定含量胆红素备用。

1.2 试剂与仪器

NSE试剂盒为化学发光免疫法，深圳市新产业生物医学工程股份有限公司提供；化学发光免疫测定仪器，深圳新产业生物医学工程股份有限公司提供的MAGLUMI 2000。Mek7222k血液分析仪，日本光电公司生产。

1.3 方法

（1）早晨分别采集健康体检者和肺癌患者空腹静脉血10 mL，同一标本按放置时间不同分装四份。按深圳市新产业生物医学工程股份有限公司试剂盒说明书进行操作（试剂盒为化学发光免疫法）。健康体检人群与3例小细胞肺癌患者血清标本收集后，分别在放置0.5 h、1 h、3 h 和5 h后进行离心，检测。每次、每份标本重复测定5次，计算其均值、标准差及进行差异显著性检验。

（2）将自制的溶血标本，再次离心，取上清液用光电Mek-7222k血细胞分析仪重复测定数次，调整血红蛋白含量使其均值为4.0 mg/mL，将其倍比稀释成1.0，0.25，0.063的4个梯度。每个浓度梯度重复进行5次测定，算出其NSE均值（ng/mL）。再分别计算出每克Hb的NSE含量（ng/mL），最后以NSE和Hb总量，计算出总平均每克Hb的NSE含量（ng/mL）。

（3）自制黄疸标本，取无溶血的正常人混合血清标本，分成6组，分别加入不同浓度的胆红素制备成梯度浓度的黄疸血清样本，40～60 μmol/L组、60～100 μmol/L 组、100～200 μmol/L组、200～300 μmol/L组、300～400μmol/L组、＞400 μmol/L组各20份，进行NSE检测。

2 结 果

（1）正常人血清标本放置0.5 h，1 h，3 h，5 h后， 检测NSE含量。NSE水平最高为放置5 h的样本，随着放置时间的减少NSE明显降低，其中与0.5 hNSE结果相比，3 h和5 h差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 正常人血清标本放置不同时间NSE检测水平对比（± s）

表1 正常人血清标本放置不同时间NSE检测水平对比（± s）

放置时间（h）nNSE（± s，ng/mL）P 0.5307.90±0.59-1 308.15±0.64＞0.05 3 309.74±0.91＜0.05 5 3011.46±1.86＜0.05

（2）小细胞肺癌患者NSE放置0.5 h，1 h，3 h，5 h测定结果及差异显著性。见表2。

表2 肺癌患者血清标本不同放置时间对NSE检测水平对比（± s）

表2 肺癌患者血清标本不同放置时间对NSE检测水平对比（± s）

注：※为与0.5 h组比较差异有统计学意义，P＜0.05

放置时间（h）患者1患者2患者3 0.520.12±0.9935.09±1.6551.60±2.11 123.23±1.43※38.84±1.18※54.21±3.32※328.76±2.26※43.36±2.23※62.23±3.93※532.53±3.17※49.43±3.77※75.65±4.46※

（3）自制溶血标本NSE测定结果。见表3。

（4）不同浓度黄疸样本的NSE检测水平对比 ，结果差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表4。

表3 自制溶血标本NSE测定结果

表4 不同浓度黄疸的神经元特异性烯醇化酶检测水平对比（± s）

表4 不同浓度黄疸的神经元特异性烯醇化酶检测水平对比（± s）

浓度（μmol /L）检测水平（ ng /ml）混合血清原液7.90±0.59 40～607.87±0.57 60～1007.93±0.61 100～2007.79±0.53 200～3007.83±0.54 300～4007.99±0.51＞4007.89±0.51 P＞0.05

3 讨 论

血清NSE是糖酵解通路中的一种肝糖分解酶，是烯醇化酶的一种同工酶，分子量为78 KD。正常存在于神经元、周围神经组织和神经内分泌组织如APUD细胞系统中[4-7]，在细胞被破坏时释放出来，可作为APUD肿瘤的特异性肿瘤标志物[7]。NSE在神经元和神经内分泌肿瘤组织中呈异常高表达。小细胞肺癌也是能够分泌NSE的APUD肿瘤之一。目前NSE被认为是小细胞肺癌、神经母细胞瘤最特异、最敏感的肿瘤标志物。同时研究证实NSE不但存在于APUD细胞系中，还存在于APUD瘤细胞系中，对NSE进行测定既可以辅助诊断小细胞肺癌、神经母细胞瘤，还可为其疗效观察和预后评价提供依据，同时还可对嗜铬细胞瘤、胰岛细胞瘤、黑色素瘤、甲状腺髓样癌等提供诊断信息。

正常红细胞中也存在较多量的NSE，溶血标本会对结果的正常判断造成干扰[8-9]；由于红细胞破裂会释放出较多的NSE，因此溶血可引起结果偏高；同样血小板中也可释放NSE，因此，未充分离心的样本NSE的结果也会偏高等[10]。但是红细胞内含有NSE的量以及溶血会对血清NSE测定结果造成多大的影响，已经达成共识[11-12]。研究显示，每溶解红细胞释放1 g血红蛋白的量，就可以平均测定出32.45 ng/mL的NSE，属假阳性结果。可见NSE实验结果受溶血的影响很大；同时正常人和小细胞肺癌患者血清标本放置一定时间后再测定，均会导致NSE结果产生差异。而黄疸对NSE的检测结果不产生影响。

综上所述，标本溶血和标本放置过长时间对测定结果有显著影响，实践中NSE检测一定要避免标本溶血，静脉采血尽量一次成功，避免在同一部位反复穿刺，在采取标本后应尽量快速送检并分离血清且应立即进行测定。假如不能即刻测定，也应该立即分离血清，置入冰箱冷冻保存备查。目的就是尽可能避免因标本溶血和标本久置使红细胞中NSE释放进入血清，影响测定结果。

[1] DeGiorgio CM.Neuron-specif i c enolase,marker of acuteneuronal injury,is increased in complex partial status epi-lepticus[J]. Epilepsia,1996,37(7):606-609.

[2] Rabinowicz AL,Correale JD,Bracht KA,et al.Neuron-specific enolase in increased after nonconvulsive status epileticus[J]. Epilepsia,1995,36:457.

[3] 仇彩霞,江崇才,王盛楠,等.影响神经元特异性烯醇化酶检测的新因素.青岛医药卫生,2013,45(1):19-21.

[4] 张小红,王 静,王红民.血清NSE TSGF CA125 CYFRA-21-1 联合检测对肺癌的诊断价值[J].肿瘤基础与临床,2006,(1):16-18.

[5] Andos S,Suzuki M,Yamamoto N,et al.The prognosticvalue of both neuron-specific enolase (NSE)and Cyfra21-1 in small cell cancer[J].Anticancer Res.2004.24(3b):1941-1946.

[6] Karnak D,Beder S,Kayacan O,et al.Neuron-specificenolase and lung cancer [J].Am J Clin Oncol,2005,28(6):586-590.

[7] Tapia FJ,Polak JM,Barbosa AJ,et al.Neuron-specificenolase is produced by neuroeudocrine tumours [J].Lancet,1981,1(8224): 808-811.

[8] 隋靖喆,李 山,秦 雪,等.标本不同处理因素对神经元特异性烯醇化酶测定的影响[J].国际检验医学杂志,2014,35(14):1950-1951.

[9] 辛丽君,顾建英,高云朝,等.标本因素对血清神经元特异性烯醇化酶检测的影响[J].检验医学,2007,22(3):303-307.

[10] 宋现让,刘美琴,朱传金,等.神经元特异性烯醇化酶检测的标本因素探讨[J].医学检验与临床,2006,17(4):69-70.

[11] 张家华,黄 平,主编.现代临床实验诊断手册[M].第1版.北京:人民军医出版社,1994:322 -325.

[12] 周 新,涂植光.临床生物化学和生物化学检验[M].北京:人民卫生出版社,2004.

本文编辑：李 豆

R446.6

B

ISSN.2095-6681.2016.34.111.02

杨先凯