参苓白术颗粒质量标准研究

邵维在，段治尚，万德生，刘必辞，阙玉玲（云南腾药制药股份有限公司研发部，云南腾冲　679100）



参苓白术颗粒质量标准研究

邵维在，段治尚，万德生，刘必辞，阙玉玲
（云南腾药制药股份有限公司研发部，云南腾冲679100）

［摘要］目的：修订提高参苓白术颗粒的质量标准。方法：采用TLC法对制剂中的甘草、人参、白术进行定性鉴别；采用HPLC法对其人参中的人参皂苷Rg1、Re进行定量分析。结果：用HPLC法测定人参皂苷Rg1、Re的含量，Rg1在0.353～1.764 μg范围内、Re在0.244～1.220 μg范围内，峰面积与进样量有良好的线性关系，r=0.999 8和r=0.999 9；平均加样回收率分别为98.61%和97.41%，RSD%=1.82%（n=6）和RSD%=1.02%（n=6）。结论：所建立的方法重现性好、专属性强，可控制该制剂的质量。

［关键词］参苓白术颗粒；薄层；高效液相色；甘草；白术；人参皂苷

［DOI］10. 3969/j. issn. 1672-2345. 2016. 02. 002

参苓白术颗粒为云南腾药制药股份有限公司的普药品种，处方源于宋代《太平惠民和剂局方》，由人参、茯苓、白术、山药、白扁豆、莲子、薏苡仁、砂仁、桔梗和甘草共10味药组成，具有益气健脾之功效。现行版标准载于《部颁标准》第二十册〔1〕，但质量标准偏低。为了控制其产品质量，笔者采用薄层鉴别对方中甘草、人参、白术进行定性鉴别〔2〕；采用高效液相色谱（HPLC）法对人参所含成分人参皂苷Rg1和Re进行定量测定。现报告如下。

1　仪器与试药

1.1仪器三用紫外仪ZF-2型（上海市安亭电子仪器厂）；美国Agilent-1100液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；UV1700紫外分光光度计（岛津苏州有限公司）；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂Agi⁃lent TC-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；SK5200H型超声仪（上海科导超声仪器有限公司）；电子分析天平AE240（梅特勒托利多仪器上海有限公司）；数显恒温水浴锅DRHH-S4（上海双捷实验设备有限公司）。

1.2试药甘草对照药材（批号：120904-201016）；白术对照药材（批号：120925-201109）；人参皂苷Rg1对照品（批号：110703-201128）；人参皂苷Re对照品（批号：110754-201324）；人参皂苷Rb1对照品（批号：110704-201223）；人参对照药材（批号：120917-200608）。上述对照品均购于中国食品药品检定研究院。参苓白术颗粒（批号：130130、130131、130132）由云南腾药制药股份有限公司生产；HPLC用乙腈为色谱纯，水为娃哈哈饮用纯净水（大理娃哈哈食品有限公司生产），其他试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1甘草的薄层鉴别取本品适量于乳钵中研细，称取12 g置150 mL平底烧瓶中，加乙醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液置蒸发皿中蒸干，残渣加水10 mL使溶解，转移至分液漏斗中用二氯甲烷提取3次，每次10 mL，收集水层，再用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次10 mL，合并正丁醇液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取不含甘草的阴性对照品，同法制备阴性对照品溶液。再取甘草对照药材0.5 g，加乙醇20 mL，加热回流1 h，滤过，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一2%氢氧化钠硅胶G板薄层板上，以二氯甲烷－甲醇－甲酸（20∶1∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热5 min，置紫外光灯（365 nm）下检视〔3-4〕。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点。阴性对照品无干扰，具有专属性，见图1。

图1　甘草紫外光灯（365 nm）TLC

2.2人参的薄层鉴别取本品适量于乳钵中研细，称取4 g置250 mL三角烧瓶中，加三氯甲烷40 mL，加热回流1 h，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水2 mL搅拌使充分湿润，加水饱和正丁醇20 mL，超声处理30 min，吸取上清液加氨试液60 mL，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取不含人参阴性对照品，同法制备阴性对照品溶液。再取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1 mL各含1 mg的混合溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G板薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－水（13∶7∶2）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，分别显相同颜色的斑点。阴性对照品无干扰，具有专属性〔3，5〕。见图2。

2.3白术的薄层鉴别取本品适量于乳钵中研细，称取20 g置250 mL平底烧瓶中，加水饱和的正丁醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液用水洗涤2次，每次20 mL，正丁醇液蒸干，残渣加丙酮1 mL使溶解，作为供试品溶液〔3，6〕。另取不含白术对照品，同法制备阴性对照品溶液。再取白术对照药材1.0 g，加水饱和的正丁醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液用水洗涤2次，每次20 mL，弃除水液，正丁醇液蒸干，残渣加丙酮1 mL使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－丙酮（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，现相同的蓝色斑点。阴性对照品无干扰，具有专属性。见图3。

图2　人参TLC

图3　白术紫外光灯（365 nm）TLC

2.4人参皂苷Rg1、Re的含量测定方法与结果

2.4.1色谱条件及系统适应性色谱柱：Agilent TC-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈－0.05%磷酸溶液（19∶81）为流动相，流速：1.0 mL/min；检测波长：203 nm；柱温：30℃。进样量：10 μL；理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于3 000〔7〕。

色谱条件选择：取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品溶液，在190～350 nm范围内做紫外扫描，从紫外光谱图可以看出，在203 nm处人参皂苷Rg1和人参皂苷Re有较大吸收值（见图4A、4B），参照中国药典“人参”项下的条件，故选择检测波长为203 nm。

图4　人参皂苷Rg1对照品紫外光谱图

2.4.2对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品适量，加甲醇制成每1 mL中人参皂苷Rg1含90 μg、人参皂苷Re含60 μg的混合溶液，摇匀，即得。

2.4.3供试品溶液的制备取本品15 g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 mL，密塞，称定重量，加热回流提取3 h，放置至室温，再精密称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液50 mL，蒸干，残渣加10%氢氧化钠溶液5 mL使溶解，加水25 mL，并转移至分液漏斗中，用水饱和正丁醇提取4次，每次30 mL，合并正丁醇提取液，用水洗涤2次，每次50 mL，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加水2 mL使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径1.5 cm，长10 cm）上。先以水100 mL洗脱，弃去水液，再以70%乙醇100 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得。同法制备人参药材溶液。

2.4.4缺人参阴性样品的制备按处方比例，称取除人参外的其余药材，制备缺人参阴性对照品，按“2.4.3”项下方法制成缺人参的阴性对照溶液。在与人参皂苷Rg1、Re对照品色谱图中相同的保留时间处无吸收峰，表明阴性对照品无干扰，见图5。

2.4.5标准曲线的制备及线性关系考察取人参皂苷Rg1对照品贮备液（每1 mL中人参皂苷Rg1含量0.441 mg）、人参皂苷Re对照品贮备液（每1 mL中人参皂苷Re含量0.305 mg），精密量取上述两种溶液各0.4、0.8、1.2、1.6与2.0 mL，分别置5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。分别精密吸取10 μL，测定，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程：人参皂苷Rg1的回归方程为Y=1 306 952.098X+13 653.700，r=0.999 8，结果表明人参皂苷Rg1在0.353～1.764 μg范围内线性关系良好；人参皂苷Re的回归方程为Y=1 092 065.164X-5 264.700，r=0.999 9；结果表明人参皂苷Re在0.244～1.220 μg范围内线性关系良好。

2.4.6精密度试验取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品混合溶液，连续重复进样6次，每次10 μL，按“2.4.1”项下色谱条件进样，分别测得人参皂苷Rg1、Re的峰面积，考察其精密度。结果：人参皂苷Rg1峰面积的RSD%=0.377%（n=6），人参皂苷Re峰面积的RSD%=0.525%（n=6），表明进样精密度良好。

图5　高效液相色谱图

2.4.7稳定性试验取同一供试品溶液（批号130130），分别于0、1、5、8、24 h按“2.4.1”项下色谱条件进样1次，测定峰面积。结果：人参皂苷Rg1峰面积的RSD%=0.315%；人参皂苷Re峰面积的RSD%=0.466%，表明供试品溶液在24 h内峰面积基本稳定。

2.4.8重复性试验取同一批样品（批号130130）适量，研细，取6份，每份约15 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，按“2.4.3”项下方法制成供试品溶液，并按“2.4.1”项下色谱条件进样，测定其人参皂苷Rg1、Re的含量。结果，人参皂苷Rg1含量的RSD%= 1.23%（n=6）；人参皂苷Re含量的RSD%=0.742% （n=6）；结果表明本方法重复性较好。

2.4.9加样回收率试验取已测定含量的同一批样品（批号130130，已测定含人参皂苷Rg1的含量为0.102 0 mg/g、人参皂苷Re的含量为0.090 7 mg/g） 9份，每份约7.5 g，精密称定，精密加入人参皂苷Rg1对照品溶液1.9 mL（每1mL中人参皂苷Rg1含量0.441 mg）、人参皂苷Re对照品溶液2.0 mL（每1 mL中人参皂Re含量0.327 mg），按“2.4.3”项下方法制成供试品溶液，并按“2.4.1”项下色谱条件进行测定，计算加样回收率，见表1、2。

表1　人参皂苷Rg1回收率试验结果

表2　人参皂苷Re回收率试验结果

2.4.10样品含量测定取参苓白术颗粒三批样品（规格：6 g/袋），按“2.4.3”项下方法制成供试品溶液，并按“2.4.1”项下色谱条件，依法测定，见表3。

表3　样品测定结果

3　讨论

参苓白术颗粒是我企业常年生产的品种，原质量标准较低，仅有一个甘草定性鉴别项，没有其他定性或定量项。方中人参、白术、茯苓为君药，人参益气，白术健脾，茯苓渗湿；配伍山药、莲子、白扁豆、薏苡仁健脾益气渗湿止泻，内助君药增强药效，均为臣药；砂仁芳香渗湿、醒脾和胃，行气化滞，是为佐药；桔梗宣肺利气，通调水道，炙甘草健脾和胃，调和诸药为使药〔8〕。结合该药品组方的君臣佐使，全面的控制其质量，我们保留原标准中甘草的定性鉴别，并进行优化；增加人参、白术两味君药定性鉴别；在含量测定方面，对君药人参的成分Rg1、Re进行定量控制。经过严格的方法学考察实验，定性、定量质控方法成熟，专属性强，纳入标准。

［参考文献］

〔1〕中华人民共和国卫生部.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂：第二十册〔S〕. 1998：3864.

〔2〕曲婷丽，邓亚宁，郝丽宏，等.参苓白术颗粒的薄层色谱鉴别方法研究〔J〕.中成药，2008（12）：1001-1528.

〔3〕国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部〔S〕.北京：中国医药科技出版社，2010：8-96.

〔4〕刘敬，赵斌，王琼，等.克刻胶囊中甘草薄层鉴别方法的改进〔J〕.中国民族民间医药，2012，21（8）：39-40.

〔5〕肖霞，曹俊凯.人参当归颗粒的薄层鉴别〔J〕.中国实用医药，2012，7（9）：249-250.

〔6〕付丽芳，付丽萍.健脾口服液中党参白术的薄层鉴别〔J〕.时针国医国药，2000，11（3）：231.

〔7〕周芳. HPLC法测定参苓白术颗粒中人参皂苷的含量〔J〕.中国试验方剂学杂志，2006，12（2）：16-17.

〔8〕黄道金，李瑞云.参苓白术散临床运用拾遗〔J〕.海南医药，1990（2）：52-53.

（责任编辑毛本勇）

Study on the Quality Standards of Shenglingbaizhu Granule

Shao Weizai, Duan Zhishang, Wan Desheng, Liu Bici, Que Yuling （Research and Development Department of Tengyao Pharmaceutical Company, Tengchong, Yunnan 679100, China）

〔Abstract〕Objective: To develop a method for revising and improving the quality standards of Shenlingbaizhu Granule. Methods: Glycyrrhiza, ginseng and atractylodes were identified by Thin-layer chromatography（TLC）method, Ginsenoside Rg1 and Re in ginseng were quantitatively analyzed by high performance liquid chromatography（HPLC）methed. Results: HPLC assay results showed good linear relationships of range 0.353～1.764 μg（r=0.999 8）for Rg1 and range 0.244～1.22 μg（r=0.999 9）for Re, respectively. The average recoveries（n=6）was 98.61%（RSD:1.82%）for Rg1 and 97.41%（RSD:1.02%）for Re. Conclusion: The established method has good reproducibility and specificity, which could be used as the quality control strandard of Shenlingbaizhu Granule.

〔Key words〕Shenlingbaizhu Granule; thin-layer; HPLC; glycyrrhiza; atractylodes; ginsenoside

［中图分类号］R284.1

［文献标志码］A

［文章编号］1672-2345（2016）02-0005-05

［收稿日期］2015-06-16［修回日期］2015-10-10

［作者简介］邵维在，工程师，主要从事新产品研发、产品工艺优化及中药质量标准研究.