芒毛苣苔醇提取物体外抗氧化活性研究

何小英　郭惠兰　黄艳萍

1.广东省翁源县人民医院，广东　翁源　512600；2.广东食品药品职业学院，广东　广州　510520



芒毛苣苔醇提取物体外抗氧化活性研究

何小英1郭惠兰1黄艳萍2

1.广东省翁源县人民医院，广东翁源512600；2.广东食品药品职业学院，广东广州510520

【摘要】目的：测定芒毛苣苔醇提物的体外抗氧化活性。方法：采用DPPH、ABTS和羟基(·OH)氧化自由基清除试验对芒毛苣苔乙醇提取物的体外抗氧化活性进行研究。结果：芒毛苣苔乙醇提取物具有较强的清除DPPH、ABTS和·OH氧化自由基能力。结论：芒毛苣苔具有较好的抗氧化活性。

【关键词】芒毛苣苔；抗氧化；活性

芒毛苣苔是苦苣苔科植物芒毛苣苔AeschynanthusbracteatusWall ex A DC.的地上部分，又名石榕、大叶榕藤、石壁风、牛奶树。主要分布于西藏、云南、广西、广东、台湾、四川等地，生于山谷林中或溪边石上，海拔300～1300米。芒毛苣苔性平，味甘、淡[1-2]，广东、广西民间用于治疗用于风湿骨痛、跌打损伤、肾虚、慢性肝炎等症[3]。但目前尚未芒毛苣苔的药理活性的报道。研究采用体外试验法对芒毛苣苔的抗氧化活性进行研究，为探索芒毛苣苔的生理活性机制及进一步开发其药用价值提供实验基础。

1仪器与材料

1.1仪器FA2204B电子天平(上海精科天美科学仪器有限公司)；DG5033A型酶标仪(上海精密仪器仪表有限公司)；Finnpipette精密单通道加样器(赛默飞世尔科技公司)。

1.2试剂1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH，上海源叶生物科技有限公司)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)、过硫酸钾、无水乙醇、二甲亚砜(DMSO)、维生素C等试剂均为分析纯。

1.3材料芒毛苣苔药材2013年采集于广东省翁源县，经中国科学院华南植物园叶华谷研究员鉴定为苦苣苔科植物芒毛苣苔Aeschynanthus bracteatus Wall ex A DC的地上部分。常温阴干，60℃干燥后，粉碎过60目筛备用。

2方法

2.1样品制备称取芒毛苣苔粗粉100g，用80%乙醇加热回流提取2次，每次2h。合并2次提取液，60℃减压浓缩干燥，得芒毛苣苔药材提取物14g。

2.2清除DPPH自由基试验[4]用无水乙醇作为溶剂，配制DPPH溶液，浓度为0.45mg/ml的溶液，置于棕色瓶中备用。用DMSO作为溶剂配制芒毛苣苔提取物浓度为1mg/ml的贮备液，使用前用DMSO稀释。将不同浓度的样品溶液0.1ml置于96孔板中，然后再加入0.1ml无水乙醇，再加入0.1ml DPPH溶液，震荡混匀。于25℃下反应30min，于517nm处测定得样品溶液吸光度(A1)；用无水乙醇代替样品，依次加入与样品溶液测定相同量的DPPH溶液，其他试剂量不变，测定得空白对照吸光度(A0)；用0.1mL无水乙醇代替DPPH溶液加入样品溶液中，测得样品本底吸光度(A2)，每个样品3个重复，取平均值，以维生素C作阳性对照，按下面公式计算芒毛苣苔醇提物的清除率，并计算IC50值。

清除率(%)=[A0-(A1-A2)]/A0×100%

2.3清除ABTS自由基试验[4]将7mmol/L的ABTS溶液5ml和140mmol/L的过硫酸钾溶液88ml混合，在室温、避光条件下静置12h，制成ABTS贮备液，使用前再用无水乙醇稀释成工作液，使用期间要求其在734nm处的吸光度为(0.5±0.02)。

用DMSO作为溶剂，配制成芒毛苣苔提取物为1mg/ml样品贮备液。使用前用DMSO稀释成一系列稀释成不同浓度的样品溶液。向96孔板中分别加入10μl上述样品溶液，然后再加入90μl无水乙醇，再加入100μl的ABTS工作液，至振荡器上震荡混匀，在30℃下反应6min，于734nm处测定样品溶液吸光度(A1)，用无水乙醇替代样品溶液改为加入其他试剂量不变，测定得空白对照吸光度(A0)；用100μl无水乙醇代替ABTS工作液，测得样品本底吸光度(A2)，每个样品3个重复，取平均值，以维生素C作阳性对照，按上述公式计算芒毛苣苔提取物的清除率，并计算IC50值。

2.4清除羟基自由基(·OH)试验[5]精密量取芒毛苣苔醇提取物溶液0.1ml置于96孔板中，依次加入8.8mmol/L H2O20.1ml、9mmol/L FeSO40.1ml、9mol/L水杨酸-乙醇溶液0.1ml，于37℃震荡反应30min，用无水乙醇替代样品溶液改为加入其他试剂量不变，测定得空白对照吸光度(A0)；用0.1ml无水乙醇代替水杨酸-乙醇溶液，测得样品本底吸光度(A2)，每个样品3个重复，取平均值，以维生素C作阳性对照，按上述公式计算芒毛苣苔提取物的清除率，并计算IC50值。

2.5数据处理数据采用SPSS 17.0软件进行数据分析，所有数据均以均数加减标准差表示，用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

3结果

3.1芒毛苣苔提取物清除DPPH自由基能力由表1、图1可知，芒毛苣苔提取物在0.625～20μg/ml范围内抗氧化活性随浓度升高而升高，在1.25～10μg/ml范围内上升趋势非常明显。芒毛苣苔提取物清除DPPH自由基IC50值明显小于对照维生素C，说明芒毛苣苔提取物具有良好的清除DPPH自由基能力。

表1　芒毛苣苔提取物对自由基清除活性 ±s，n=3)

样品DPPH清除能力IC50/μg/mlABTS清除能力IC50/μg/ml羟基自由基(·OH)清除能力IC50/μg/ml芒毛苣苔提取物4.05±0.13*3.65±0.14*75.43*维生素C11.45±0.2914.76±0.09117.65

注：与维生素C组比较，*P<0.05。

3.2芒毛苣苔提取物清除ABTS自由基能力由表1、图2可知，在0.625～20μg/ml内芒毛苣苔提取物清除ABTS自由基活性能力随浓度升高而升高;在2.5～5μg/ml范围内上升趋势非常明显。在5～20μg/ml范围内芒毛苣苔提取物清除ABTS自由基活性明显高于阳性对照药维生素C的活性。芒毛苣苔提取物清除ABTS自由基IC50值明显小于对照维生素C，说明芒毛苣苔提取物具有良好的清除ABTS自由基能力。

3.3芒毛苣苔提取物清除羟基自由基(·OH)能力由表1、图3可知，芒毛苣苔醇提取物在较低浓度下表现出较强的清除·OH的能力。其IC50约为75.43μg/ml，当浓度达到126.87μg/ml时，对·OH的清除能力达到最大值。芒毛苣苔提取物清除·OH自由基IC50值明显小于对照维生素C，说明芒毛苣苔提取物具有良好的清除·OH自由基能力。

4讨论

苦苣苔科Gesneriaceae全世界有150属3700多种，我国有58属(其中27属为中国特产)，约463种。芒毛苣苔在我国主要分布在西藏、贵州、云南、广西、四川及广东省区的热带及亚热带丘陵地带，云南等省区少数民族间广泛用于治疗各种炎症、咳喘、疮疖、风湿、骨折、烫伤、蛇虫咬伤及妇科等疾病，疗效显著[6-7]。

正常机体内会应用抗氧化酶体系与代谢合成的非酶体系化合物来清除与修复自由基，使自由基处于一种动态的平衡[6]。当防御体系出现故障或者自由基增多时，自由基产生和清除的平衡就会被破坏，进而导致细胞器的生物学特征改变，使细胞衰老，引发各种炎症、恶性肿瘤等疾病[8-9]。因此，寻找有效、毒副作用小的自由基清除剂和抗氧化剂十分必要。研究采用DPPH自由基、清除ABTS自由基的和清除羟基自由基(·OH)三种体系对芒毛苣苔醇提取物进行体外抗氧化试验，结果显示，芒毛苣苔药材对 DPPH，ABTS，·OH均具有一定的清除能力，其中对 DPPH，ABTS，·OH的IC50分别为4.05、3.65、75.43 μg/ml，表明在一定浓度范围内，随着芒毛苣苔醇提物浓度的增加抗氧化活性增加。

参考文献

[1]叶华谷,曾飞燕,叶育石,等.华南药用植物[M]. 武汉：华中科技大学出版社,2013:357.

[2]谢宗万.全国中草药汇编[M].北京：人民卫生出版社,2000:180-181.

[3]白贞芳,王晓琴,肖培根,等.广西苦苣苔科植物传统药物学调查[J].中药材,2012,(1):20-23.

[4]李福明,汪洋,韦敏. 刺梨叶醇提物体外抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性研究[J].中国现代应用药学,2015,(6):685-688.

[5]王有琼,马李一,张重权,等.微波辅助提取印楝叶多酚及其体外抗氧化活性研究[J].中国现代应用药学,2015,(11):1319-1323.

[6]李振宇,王印政.中国苦苣苔科植物[M].郑州:河南科学技术出版社,2004

[7]韦毅刚,钟树华,文和群.广西苦苣苔科植物区系和生态特点研究[J].云南植物研究,2004,26(2):173

[8]李兴泰,陈瑞,高明波.连翘叶水提物保护线粒体及抗衰老研究[J].食品与生物技术学报,2009,28(6):840-844.

[9]Wickens A P.Ageing and the free radical theory[J].Respir Physiol,2001,128:379-391.

Study on in Vitro Antioxidant Activities of Ethanol Extract fromAeschynanthusbracteatusWall ex A DC

HE Xiaoying1GUO Huilan1HUANG Yanping2

1.Wengyuan People’s Hospital,Guangdong ,Wengyuan 512600 China;2.Guangdong Food and Drug vocational college,Guangzhou 510520,China

Abstract:Objective To study in vitro antioxidant activity of ethanol extract from Aeschynanthus bracteatus Wall ex A DC. MethodsAntioxidant and ree radical scavenging activities of ethanol extract of Aeschynanthus bracteatus Wall ex A DC. were determined by DPPH and ABTS and ·OH radical scavenging assay. Results The ethanol extract of Aeschynanthus bracteatus Wall ex A DC. showed significant DPPH and ABTS radical scavenging activities.Conclusion Aeschynanthus bracteatus Wall ex A DC.show significant antioxidant

Key words:Aeschynanthus bracteatus Wall ex A DC.; antioxidant；activity

基金项目：韶关市科技计划项目(2014CX/K288)；广东省科技计划项目(2013B020311013)。

作者简介：何小英，主管药师，从事医院药学工作。E-mail：hexiaoying1007@163.com

【中图分类号】R285.5

【文献标志码】A

【文章编号】1007-8517(2016)09-0033-02

(收稿日期：2016.03.09)