HPLC法测定药食两用植物刺梨中刺梨苷的含量

李齐激　南　莹　杨　艳　王道平　杨小生

贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室，贵州　贵阳　550002



HPLC法测定药食两用植物刺梨中刺梨苷的含量

李齐激南莹杨艳王道平杨小生

贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室，贵州贵阳550002

【摘要】目的：建立药食两用植物刺梨中刺梨苷的含量测定方法。方法：刺梨以75%乙醇水浴回流提取，采用Pntulips TM BP-C18(4.6 mm×250mm，5 μm)色谱柱，乙腈-0.05 %三氟醋酸溶液(27∶73)为流动相，流速1 ml/min，检测波长208 nm，柱温30℃，进样量为10μl。结果：刺梨苷在0.23～2.3μg范围内具有良好的线性关系，平均回收率为97.82 %，RSD为2.44 %(n=6)。结论：利用HPLC建立了药食两用植物刺梨中刺梨苷的含量测定方法，经方法学验证，该法简便、准确、稳定，为药食两用植物刺梨的合理开发利用提供质量评价依据。

【关键词】刺梨；刺梨苷；HPLC

刺梨为蔷薇科植物缫丝花RoseroxburghiiTratt的果实，广泛分布于暖温带及亚热带地区，在我国主要分布在四川、云南和贵州三省，其中又以贵州野生与栽培资源最为丰富[1-2]。刺梨具有消食健脾，收敛止泻的功效，主要用于治疗积食腹胀，泄泻等疾病[3]。研究表明，三萜和黄酮类成分为刺梨的主要活性物质，并在增强免疫力、延缓衰老、抗动脉粥样硬化、健胃消食等方面均具有较好的活性[4-6]。作为药食两用植物，1994版、2003版《贵州省中药材、民族药材质量标准》和2004年卫生部食品新资源品种17号公告先后收录该品种，目前在食品、保健用品、医药领域广泛应用。但其质量控制方法仍处于空白，尤其是在医药、保健用品应用领域。课题组结合前期研究发现的活性三萜类成分[7]，选择其中较具有代表性的活性三萜—刺梨苷进行含量测定，旨在建立药食两用植物刺梨的质量控制方法，为该植物药材及其产品开发提供品质评价与检测方法参考。

1仪器与材料

1.1仪器Agilent 1100高效液相色谱(含柱温箱、可见-紫外检测器、四元泵、在线脱气机和自动进样器，美国安捷伦科技有限公司)；电子天平(Mettler Toledo，26115102-0)；旋转蒸发仪(瑞士BUCHI公司)；ZK-82A 型真空干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司)。

1.2材料刺梨苷对照品为实验室自制，经NMR、MS等光谱数据确定其化学结构，通过HPLC纯度检测为98.91%；乙腈为色谱纯(天津市科密欧化学试剂有限公司)，三氟醋酸为分析纯(天津市光复精细化工研究所)，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

1.3药材刺梨药材于2014年8月采自贵州龙里县，经贵州大学安华明教授教授鉴定为蔷薇科植物缫丝花Rosa roxburghii Tratt的果实(刺梨)，标本凭证(201408003)保存于贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室。

2方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱：Pntulips TM BP-C18(4.6 mm×250mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.05 %三氟醋酸溶液(27∶73)；柱温：25 ℃；流速：1 ml/min；检测波长：208 nm；进样量：10μl。在此色谱条件下，理论板数按刺梨苷峰计算≥3 000，与其他峰分离度>1.5。色谱图详见图1。

2.2对照品溶液的配置取刺梨苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含0.23 mg的溶液，即得。

2.3供试品溶液的配置取刺梨粗粉(过三号筛)约5 g，精密称定，置于圆底烧瓶中，加75 %乙醇100 ml，水浴回流提取3次，每次2 h，滤过，合并滤液，减压浓缩近干，加适量蒸馏水溶解，再用乙酸乙酯萃取至无色，合并乙酸乙酯萃取层，减压浓缩近干，立即加甲醇使溶解，转移至至100 ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4线性关系考察精密吸取2.2项下对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 μl，分别注入高效液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积(Y)为纵坐标，进样量(X，mg)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为Y=270.71X+9.7049，R2=0.9998。结果表明，刺梨苷在0.23～2.3μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.5精密度考察精密吸取“2.2”项下对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件重复进样6次，记录峰面积。结果峰面积RSD为1.38 % (n=6)，表明仪器精密度良好。

2.6重复性试验称取同一批次(20150801)刺梨样品6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别进样，记录峰面积。结果峰面积RSD为1.91 %(n=6)，表明该方法重复性良好。

2.7稳定性考察取同一批次(20150801)刺梨供试品溶液，分别于0、2、4、8、10、12 h时按“2.1”项下色谱条件分别进样测定。结果峰面积RSD为2.61 %(n=6)，表明供试品在12 h内稳定性良好。

2.8加样回收率试验称取已知含量的刺梨样品(20150801)6份，每份约2.5 g，分别加入刺梨苷4.4 mg，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件分别进样测定，计算回收率，测定结果见表1。

表1　回收率试验结果(n=6)

2.9样品测定取不同批次刺梨样品约5g，按“2.3”项下方法平行制备供试品溶液各2份，再按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积，计算样品中刺梨苷的含量，结果3批样品(20150801、20150802、2015080)中刺梨苷的含量分别为0.176、0.180、0.183 mg/g。

3讨论

3.1检测指标的选择刺梨总三萜为该植物的主要活性成分，在恶性肿瘤、糖尿病方面效果较好，具有较高的应用价值和良好的应用前景[7-9]。试验综合考察了其中3种活性三萜刺梨苷、野蔷薇苷、arjunetin的色谱条件、含量高低和代表性，最终选择了分离度较好，含量较高，且尤具代表性的刺梨苷作为质量控制的检测指标。

3.2提取条件的考察通过比较超声、索氏回流、冷浸及水浴回流提取，结果刺梨苷含量高低依次为水浴回流>索氏回流>冷浸>超声。其次，还比较了甲醇、乙醇、水作为溶剂的提取效果，结果三者提取含量变化较小，水提取含量稍高但杂质峰较多，且分离度较差，考虑到经济、环保，确定选择以乙醇为溶剂，最终通过单因素考察最终确定以75%乙醇进行提取。最后，还比较了乙酸乙酯萃取次数对含量的影响，发现以水-乙酸乙酯体积比为1∶2时重复萃取3次可萃取完全。

参考文献

[1]中国植物志编辑委员会.中国植物志(37卷)[M].北京:科学出版社,1998:452.

[2]贵州植物志编辑委员会.贵州植物志(7卷)[M].贵阳:贵州人民出版社,1982:223.

[3]贵州省药品监督管理局.贵州省中药材、民族药材质量标准[M].贵阳:贵州科学技术出版社,2003：230

[4]戴支凯,余丽梅,杨小生,等.刺梨三萜化合物CL1体外抗人子宫内膜腺癌作用[J].时珍国医国药,2011,22(7):1656-1658.

[5]秦晶晶,李齐激,薛琰,等.刺梨总三萜提取方法及其α-葡萄糖苷酶抑制活性研究[J].食品工业科技,2014,10(33):186-189.

[6]赵转地,张爱华,洪峰.刺梨及其产品的营养及保健药用价值研究进展[J].环境与职业医学,2007,24(1):82-84.

[7]杨小生,马琳,梁冰,等.刺梨果活性提取物及其制备方法、检测方法和应用[P].中国专利:ZL201110080922,2013-03-20.

[8]南莹,李齐激,马琳,等.紫外分光光度法测定刺梨总三萜与总黄酮含量[J].遵义医学院学报,2012,35(6):473-476.

[9]秦晶晶,李齐激,薛琰,等.刺梨总三萜提取方法及其α-葡萄糖苷酶抑制活性研究[J].食品工业科技,2014,10(33):186-189.

Determination of kaiiichigeside F1 from the medical and edible plants of Rose roxburghii by HPLC

LI QijiNAN YinYANG YanWANG DaopinYANG Xiaosheng

Key Laboratory of Chemistry for Natural Products of Guizhou Province and Chinese Academy of Sciences, Guiyang 550002, China

Abstract:Objective To establish a HPLC method for determining kaiiichigeside F1 in the medical and edible plants of Rose roxburghii by HPLC. Methods The assay of 75% ethanol extract of Rose roxburghii was detected on PntulipsTM BP-C18 (4.6 mm×250mm, 5 μm) column with acetonitrile-0.05% Trifluoroacetic acid as mobile phase at flow rate of 1 ml·min-1. The detection wavelength was set at 208 nm, the volume was 10 μl and the column temperature was 30℃. Results The linear ranges of kaiiichigeside F1 was 0.23～2.3μg. Their average recovery was 97.82 % (RSD=2.44 %, n=6). Conclusion The determination of kaiiichigeside F1 from the medical and edible plants of Rose roxburghii was firstly established by HPLC. The method was convenient, accurate, and stable, and can be used to evaluate the quality of Rose roxburghii.

Key words:Rose roxburghii; kaiiichigeside F1; HPLC

基金项目：贵州省科技重大专项([2013]6006-4)；贵州省科技农业攻关项目(NY[2015]3005-1)；贵州省科技创新人才团队建设项目(2013-4006)；贵州省高层次创新型人才培养计划(2015-4027)。

作者简介：李齐激，助理研究员，主要从事民族药质量标准及创新药物研究。E-mail:leeqiji@163.com

【中图分类号】R284.1

【文献标志码】A

【文章编号】1007-8517(2016)09-0022-03

(收稿日期：2016.03.21)