斜脉暗罗叶甾体类成分研究*

刘冰晶，熊　跃，曾　靖

(1.赣南医学院药学院；2.江西省脑血管药理重点实验室，江西　赣州　341000；3.南昌市中西医结合医院药剂科，江西　南昌　330003)



斜脉暗罗叶甾体类成分研究*

刘冰晶1,2，熊跃3，曾靖1,2

(1.赣南医学院药学院；2.江西省脑血管药理重点实验室，江西赣州341000；3.南昌市中西医结合医院药剂科，江西南昌330003)

摘要：目的：研究斜脉暗罗叶的化学成分。方法：95%乙醇提取斜脉暗罗叶，制备总浸膏，硅胶柱色谱分离其成分，理化性质和波谱法鉴定其结构。结果：分离得到3种甾体化合物，分别为β-谷甾醇(1)、β-胡萝卜甙(2)、豆甾-4-烯-3-酮(3)。结论：所有化合物均首次从斜脉暗罗叶中分离得到。

关键词：斜脉暗罗；化学成分；甾体

斜脉暗罗(P.plagioneura)是我国特有药用植物，分布于广东、广西、海南[1]。暗罗属植物全球约有200多种，我国有17种[2]。斜脉暗罗在民间广泛用作治疗。本课题组在筛选海南一系列药用植物抗肿瘤活性中发现，斜脉暗罗的乙醇提取物在200 μg·mL-1时对人类肺腺癌细胞(SPCA-1)有较好的抑制作用。国内外学者对暗罗属植物进行过化学成分研究，得到倍半萜类[3]、二萜类[4-5]、生物碱类[6-10]等化合物。本文为了进一步研究斜脉暗罗叶部活性成分，我们对斜脉暗罗叶化学成分进行了系统研究。通过部位分离、反复柱色谱(硅胶、C18反相硅胶、Sephadex LH-20)等手段,从斜脉暗罗叶二氯甲烷部位分离得到3种单体化合物，根据理化性质和波谱数据，鉴定这些化合物为：β-谷甾醇(1)、β-胡萝卜甙(2)、豆甾-4-烯-3-酮(3)，所有化合物均首次从该植物叶中分离得到。

1仪器与试剂

核磁共振仪(Brucker AV400 MHz)，高效液相色谱仪(安捷伦)，XT5-100型显微熔点测定仪(温度未校正)，4001型电子天平，紫外线分析暗箱(YOZO-KX)，柱色谱硅胶(200～300目，青岛海洋化工厂)，硅胶H 硅胶、GF254(青岛海洋化工厂)，C18反相硅胶(日本YMC公司)，葡聚糖LH-20凝胶(Amersham Blosclences公司)，其余试剂均为分析纯及色谱纯。

2药材

斜脉暗罗于2008年7月采自海南省昌江县霸王岭自然保护区，原植物由海南师范大学生物系钟琼芯教授鉴定为PolyalthiaplagioneuraDiels，标本现藏于海南师范大学热带药用植物化学教育部重点实验室。

3提取分离

斜脉暗罗叶4.2 kg(干重)用15 L质量分数95%的酒精回流三次，合并提取液减压回收溶剂得乙醇浸膏约2 L，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取至回收溶剂后蒸馏瓶壁几乎无物质为止，分别得石油醚部位63 g、二氯甲烷部位135 g，乙酸乙酯部位72 g、正丁醇部位44 g。

取二氯甲烷部位与150 g硅胶拌样，经硅胶柱层析,以石油醚-乙酸乙酯(100%，90%，80%～80%，90%，100%)梯度脱洗，每500 mL为一馏分，根据薄层层析色谱追踪，合并相同组分，得A-O十五个馏分。A流分经反复硅胶柱色谱，石油醚-乙酸乙酯(15∶1)洗脱，得化合物1(30 mg)；B流分经反复硅胶柱色谱，石油醚-氯仿(4∶1)洗脱，得化合物 2(20 mg)和3(15 mg)。

4结构鉴定

化合物1：白色针状晶体，难溶于乙醇，不溶于甲醇、水，易溶于氯仿、乙酸乙酯，用薄层色谱分析，在紫外灯254 nm和365 nm均不显荧光，I2熏显色呈黄棕色，5%硫酸乙醇溶液显色为紫红色，该化合物性质与已知化合物β-谷甾醇二者的物化性质相近，故可初步判断该化合物为β-谷甾醇，取该化合物与β-谷甾醇标准品进行薄层色谱展开对照，二者的比移值相同。取该化合物与β-谷甾醇标准品混合后测熔点，混合熔点不下降，故确定为β-谷甾醇(β-Sitosterol)。

化合物2：白色粉末，m.p. 268～270 ℃。难溶于氯仿、甲醇等溶剂，易溶于吡啶。Molish反应为阳性，与萝卜苷标准品薄层层析Rf值一致，二者混合熔点不下降，故确定为β-胡萝卜苷(β-Daucosterol)。

化合物3：白色长针状结晶(丙酮)；溶于石油醚、氯仿、丙酮，不溶于甲醇；254 nm紫外灯下有紫红色荧光。与浓硫酸显紫色。推测为甾体或三萜类的化合物；从整个1H-NMR谱的峰形以及δ：5.74(1H,s)的烯氢质子信号峰，说明该物质为甾体类化合物，且仅含有一组双键；13C-NMR谱的δ：199.5的羰基碳信号、171.5和123.6的双键碳信号进一步证明此甾体含有α, β不饱和酮结构；13C-NMR谱显示共有29个碳，表明该化合物为含29个碳原子的酮羰基甾烯类化合物；1H-NMR谱的高场处还给出了6个CH3，分别为：δ：1.20(3H,s),0.93(3H,d,J=6.5 Hz),0.86(3H,t,J=7.5 Hz),0.84(3H,d,J=8.0 Hz),0.82(3H,d,J=7.0 Hz)，0.73(3H,s)。该化合物的光谱数据与文献[11-12]报道数据一致，故确定该化合物为豆甾-4-烯-3-酮。

5结论

本文首次对斜脉(PolyalthiaplagioneuraDiels)叶化学成分进行了系统研究，从斜脉暗罗叶的乙醇提取物的二氯甲烷部位分离得到3种甾体化合物，这3种甾体化合物均是首次从斜脉暗罗叶中分离出来。

致谢：本实验核磁共振均由上海鑫饰化工科技有限公司刘鑫剑代为测试，在此列出，以表谢意。

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Steroidal Composition Research on Leaves ofPolyalthiaPlagioneura

LIUBing-Jing1,2,XIONGYue3,ZENGJing1,2

(1.SchoolofPharmacy,GannanMedicalUniversity;2.JiangxiProvincicalKeyLabofCerebrovascularpharmacology,Ganzhou,Jiangxi341000；3.Dept.ofPharmacy,NanchangIntegratedHospitalofChineseandWesternMedicine,Nanchang,Jiangxi330003)

Abstract:Objective：To isolate and identify the components from the leaves of P. plagioneura.Methods：The compounds were isolated and purified by silica gel column, Sephadex LH-20,and C18chromatography. Their chemical structures were elucidated on the basis of physicochemical properties and spectral data.Results:Three steroidal compounds were isolated and identified as: β-sitosterol (1), β-daucosterol (2), Stigmast-4-en-3-one(3). Conclusion:All compounds are isolated from the leaves of P. plagioneura for the first time.

Key words:P. plagioneura;chemical constituents; steroidal

*基金项目：江西省科技厅项目(20142BBG70113);江西省卫生厅项目(GJJ13678)

通讯作者：曾靖，男，教授，主要从事中药药理学研究。E-mail:zengjing61@hotmail.com

中图分类号：R285.5

文献标志码：A

文章编号：1001-5779(2016)02-0187-03

DOI:10.3969/j.issn.1001-5779.2016.02.006

(收稿日期：2015-11-30)(责任编辑：敖慧斌)