痰液性状和保存条件对结核菌培养阳性率的影响

郑瑶

痰液性状和保存条件对结核菌培养阳性率的影响

郑瑶

目的 探讨不同性状及不同保存时间条件对痰液样本结核菌培养阳性率的影响。方法 统计分析949份结核菌培养结果，对比不同性状及不同保存条件下的痰液标本结核菌培养阳性率。结果 在上述不同性状的痰液样本检测中，干酪痰的阳性培养率最高，阳性培养率从高到底依次为干酪痰、血性痰、粘液痰、唾液，组间对比差异具有统计学意义（P＜0.01）。经检查，220例结核菌培养结果显示为阳性。将其随机分为4组，每组样本数是55例。将其置于不同温度条件下培养，发现当保存温度是-18℃时，随着样本保存时间的延长，标本阳性率有不明显的下降，差异无统计学意义；在4℃、25℃及30℃时，随着样本保存时间的延长，样本阳性率均有明显下降（P＜0.05），尤其是在28 d时下降特别明显（P＜0.05）。而在温度相同时，保存时间为0 d时标本阳性率最高，随着保存时间的延长，同一温度下样本的阳性率均呈下降趋势（P＜0.05），且4℃、25℃及30℃时标本阳性率从低14 d开始即与0 d差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 不同性状及不同保存条件会对痰液样本结核菌培养阳性率造成较大影响，因此在进行痰液结核菌培养实验时，应选取适宜性状痰液并于适宜温度条件下短时间保存。

痰液性状；保存条件；结核菌；阳性率

痰液结核菌分离培养是当前用于肺结核病原学实验室检查的重要依据，同时也是结核病病原学诊断的“黄金标准”[1]，其痰液样本的阳性检出率高于涂片检查[2]。在进行结核菌培养实验中，不仅需要对接种前的痰液样本进行去污染处理，还应按照相应操作规程，选取合适的痰液性状及保存条件。为进一步研究痰液性状和保存条件对结核菌培养阳性率的影响，对我疾病控制中心收集的痰液样本检测结果进行统计分析，现作如下报道。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取上饶市疾病预防控制中心于2012年2月～2014年10月收集的痰液样本949份，痰液性状划分参照标准[3]对949份标本展开抗酸杆菌涂片检查。

1.2 方法

1.2.1 痰结核菌培养方法 实验前，上述949份痰液样本均采用4%氢氧化钠处理，后接种酸性罗氏培养基进行痰结核菌分离培养，于37℃环境下孵育8周后进行实验报告总结。总结抗酸杆菌检查结果。

1.2.2 不同保存条件下的痰液标本实验方法 将上述经由抗酸杆菌检查为阳性的痰液样本随机分为4组，分别于-18℃、4℃、25℃、30℃条件下保存，并在不同时间后对其进行痰结核菌分离培养实验检查。

1.3 质量控制[4]上述培养过程均参照《结核病诊断实验室检验规程》中的相关规定实施质量控制。

1.4 统计学方法 此次研究使用统计学软件SPSS 17.0对相关数据进行处理，计量资料以“x±s”形式表示，采用t检验；计数资料以百分比形式表示，采用χ2检验。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同性状痰液结核菌培养阳性率对比 在本次收集的949份痰液样本中，干酪痰179例，血性痰107例，粘液痰535例，唾液128例。结核菌培养实验为阳性的痰液样本数为220份，其中干酪痰110份，阳性培养率为61.45%（110/179）；血性痰39例，阳性培养率为36.45%（39/107）；粘液痰60例，阳性培养率为11.21%（60/535）；唾液11例，阳性培养率为8.59%（11/128）。在上述不同性状的痰液样本检测中，干酪痰的阳性培养率最高，阳性培养率从高到底依次为干酪痰、血性痰、粘液痰、唾液，组间对比差异具有统计学意义（P＜0.01）。

2.2 不同保存条件下痰液培养阳性率对比 经检查，220例结核菌培养结果显示为阳性，将其随机分为4组，每组样本数是55例。将其置于不同温度条件下培养，当保存温度是-18℃时，随着样本保存时间的延长，标本阳性率有不明显的下降（P＞0.05）；在4℃、25℃及30℃时，随着样本保存时间的延长，样本阳性率均有明显下降（P＜0.05），尤其是在28 d时下降特别明显（P＜0.05）。而在温度相同时，保存时间为0 d时标本阳性率最高，随着保存时间的延长，同一温度下样本的阳性率均呈下降趋势（P＜0.05），且4℃、25℃及30℃时标本阳性率从低14 d开始即与0 d差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 不同保存条件下痰液培养阳性率对比[n(%)]

3 讨论

3.1 结核菌培养实验 结核菌培养实验是当前医学界公认的结核病细菌学检查的“黄金标准”[5]，不论是对于细菌检查还是临床诊断工作来说，结核菌培养都是最佳的检查方法。通过结核菌培养实验，能够对肺结核病患者进行准确诊断，特别是对于经由涂片检查显示为阴性的肺结核患者来说，结核菌分离培养实验能够对其是否为肺结核患者进一步确认，同时也可弥补涂片检查所带来的遗漏，为肺结核的临床诊断提供了重要依据，同时也在一定程度上有利于帮助消灭传染源。但是，实际工作中存在着部分III型肺结核患者结核菌培养实验仍然为阴性，相关研究表明[6]，其主要是同痰液样本性状以及保存条件有着较大关联。

3.2 痰液性状对结核菌培养阳性率的影响 对结核菌分离培养实验来说，痰液样本的质量对培养结果的准确性存在一定影响，有研究表明不同性状的痰液样本结核菌培养阳性率存在显著差异[7]。本次研究的949例痰液样本中，结核菌培养实验为阳性的痰液样本数为220份，其中干酪痰的阳性检出率最高，唾液的阳性检出率最低。因此在日后进行培养实验时，可注意选取干酪痰作为实验标本，从而提升痰液培养阳性检出率。同时需要注意在进行痰液取样时，应严格遵循相关规范要求，降低培养失败的可能性。

3.3 保存条件对结核菌培养阳性率的影响 经检查，220例结核菌培养结果显示为阳性。将其随机分为4组，每组样本数是55例。将其置于不同温度条件下培养。研究结果发现，样本保存时间与保存温度对于这220例已经检测为阳性的痰液标本的检测结果有明显影响。（1）温度固定时对比：如在温度是-18℃时，样本保存时间不同时，标本检测的阳性率虽有一定差异，但结果差异无统计学意义。而在在4℃、25℃及30℃时，以温度为固定值进行对比，各固定温度值不同保存时间对比显示，除了保存0 d、3 d及7 d时样本阳性率不同温度组比较差异无统计学意义，而在21 d与28 d时，随着保存温度的升高，样本阳性率呈下降趋势，甚至在28 d时，30℃组样本的阳性率已降低至0%。（2）保存时间为固定值的对比：将时间作为固定两，对不同保存温度对样本阳性率结果进行分析，可以发现，保存时间相同时，随着保存温度的升高样本阳性率呈降低趋势，尤其是在21 d与28 d时比较明显。同时，有研究资料表明[8]，痰液标本中其他类型的细菌会随着样本保存时间时间的延长以及保存温度的增加，且结核菌的数量会逐步减少，从而进一步加重了痰液样本污染情况，最终造成样本结核菌阳性检出率下降。综上所述，痰液性状及保存条件会对结核菌培养阳性率造成较大影响，所以在进行培养实验时，可针对性的选择适宜性状的痰液并于合适温度条件下短时间内保存并进行接种培养，能够有效提升结核菌阳性检出率，便于临床指导用药。

[1] 董彬.不同性状、不同保存条件痰标本结核菌培养阳性率比较[J].医学动物防制，2011,27（5）：447-448.

[2] 齐学进.临床技术操作规范结核病分册[M].北京:人民军医出版社,2004:32-36.

[3] 中国疾病预防控制中心.痰涂片镜检实验室质量保证手册[S].北京：中国协和大学出版社，2004.

[4] 宋凯.咳痰时间、痰标本性状与涂片抗酸杆菌检出关系分析[J].中国防痨杂志,2008,30（5）：414-416.

[5] 李静.涂片镜检法与培养法检测结核分支杆菌的结果比较[J].宁夏医学杂志,2006,45(10):787-788.

[6] 李寒滨.痰标本质量是提高痰涂片和培养阳性率的第一要素[J].中华中西医学杂志,2007，5（6）：61.

[7] 谢兵.不同性状、不同保存条件痰标本结核菌培养阳性率比较[J].临床医学工程，2013，20（2）：203-205.

[8] 李建华.肺结核患者痰标本性状、咳痰时间与抗酸杆菌涂片阳性检出率关系分析[J].临床荟萃，2009,24（16）:1439-1441.

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.25.040

江西 334000 上饶市疾病预防控制中心 （郑瑶）