地木耳乳膏皮肤安全性实验研究

林　静，胡程萍,刘杰书

1.湖北理工学院医学院(湖北 黄石 435003) 2.湖北民族学院中医药学院(湖北 恩施 445000)



地木耳乳膏皮肤安全性实验研究

林静1，胡程萍1,刘杰书2*

1.湖北理工学院医学院(湖北 黄石 435003) 2.湖北民族学院中医药学院(湖北 恩施 445000)

【摘要】目的评价地木耳乳膏皮肤用药的安全性。方法采用家兔完整皮肤和破损皮肤分组涂抹地木耳乳膏(1.0 g/只)和空白基质(1.0 g/只)进行皮肤刺激性实验；健康豚鼠分组涂抹地木耳乳膏(0.2 g/只)、空白基质(0.2 g/只)、1% 2,4-二硝基氯苯溶液(0.2 mL/只)进行致敏性实验，均以红斑和水肿情况为评价标准；对大鼠分组涂抹地木耳乳膏(1 g/只)、空白基质(1 g/只)和1% 2,4-二硝基氯苯溶液(1 mL/只)进行皮肤急性毒性实验，观察各组大鼠体质量变化、死亡及中毒反应等。结果地木耳乳膏对家兔完整皮肤无刺激性，对破损皮肤有轻度刺激性，给药48 h后刺激性消失；对豚鼠无过敏反应和急性毒性反应。结论地木耳乳膏是一种安全性较好的外用制剂。

【关键词】地木耳乳膏；皮肤；刺激实验；过敏实验；急性毒性实验

地木耳(NostoccommuneVauch.)又称地衣、地耳、地皮菜等，为藻类蓝藻纲念珠藻科(Nostocaceae)念珠藻属植物念珠藻(NostoccommuneVauch.)的藻体[1]。在我国，地木耳资源丰富，分布范围广，生命力极强，漫长时间的进化已经使其适应了干旱、强紫外辐射的荒漠环境[2]，富含蛋白质、粗脂肪、粗纤维、矿物质、维生素、氨基酸、蓝藻素、多糖等各种营养成分[3-5]。地木耳提取物具有良好的抗氧化、保湿和紫外线防护效果，将其制备成乳膏剂，可应用于美容护肤方面[6]。为了解并评价该乳膏在皮肤给药过程中是否安全, 本文通过进行动物皮肤刺激性实验、皮肤过敏性实验和皮肤急性毒性实验等研究[7-11],为临床安全用药提供理论依据,现报道如下。

1材料与方法

1.1动物普通级健康成年白家兔，雌雄兼用，体质量(2.0±0.2)kg；普通级健康Hartley豚鼠，雌雄兼用，体质量(450.0±5.0)g；SD成年大鼠，体质量(200.0±15.0)g,均购自武汉生物制品研究所有限责任公司，许可证号SCXK(鄂)2008-0003。

1.2药物地木耳乳膏(批号20150608，用药浓度：每10 g含0.4 g地木耳醇提物)及乳膏空白基质 (批号20150608)，均由湖北理工学院医学院药剂室提供； 2，4 -二硝基氯苯 (武汉威顺达科技发展有限公司提供，批号20131010), 临用前用70%乙醇制备成所需浓度的溶液。

1.3方法

1.3.1皮肤刺激性实验家兔10只，随机分为2组，即完整皮肤组和破损皮肤组，每组各5只，以乳膏空白基质为对照，给药前24 h将兔脊柱左右两侧约3 cm×3 cm的面积内剃去毛，并用75%乙醇消毒该区域。在此脱去毛区域内继续用消过毒的手术剪刀划破皮肤，直至损伤角质层、皮肤轻微渗血，即为破损皮肤组。采用同体自身左右对比法，每天左侧去毛区域均匀涂抹地木耳乳膏)，右侧对照区涂抹空白基质，每只各1.0 g，均用无菌纱布覆盖，胶布固定，24 h后用温水洗除受试物，连续给药7 d，洗除受试物后1、24、48、72 h观察并记录红斑及水肿情况。按表1评分标准进行评分[3],计算平均分值以判断刺激性的强度，刺激性反应积分平均分值=(红斑形成总积分+水肿形成总积分)/实验动物数。

表1　皮肤刺激强度评分标准

1.3.2皮肤致敏性实验取豚鼠30只，雌雄各半，随机分成3组，每组各10只，给药前24 h将豚鼠背部脊柱左右两侧的毛剃去，去毛面积每侧约为3 cm×3 cm。①致敏接触：分别在各组豚鼠的左侧脱毛区均匀涂抹地木耳乳膏(0.2 g/只)、空白基质(0.2 g/只)和1%的2,4-二硝基氯苯溶液(0.2 mL/只)，用无菌纱布固定，持续6 h，于第7、14 d时再使用同法给药1次，于每次药物去除后观察皮肤红斑和水肿情况。②激发接触：末次致敏后14 d，分别在相应组豚鼠的右侧脱毛区域均匀涂抹地木耳乳膏(0.2 g/只)、空白基质(0.2 g/只)、1%的2,4-二硝基氯苯溶液(0.2 mL/只)，6 h后除去药物，即刻观察，然后于24、48、72 h再次观察各组豚鼠涂药区域皮肤的过敏情况，按表2评分标准进行致敏率的评价[3]。致敏反应平均分值=(红斑形成总积分+水肿形成总积分)/实验动物数；致敏反应发生率=有过敏反应动物数/动物总数×100%。

表2　皮肤致敏强度评分标准

1.3.3皮肤急性毒性实验取大鼠12只，随机分成3组，每组各4只，皮肤准备方法同1.3.2。分别在各组豚鼠的左侧脱毛区均匀涂抹地木耳乳膏(1 g/只)、空白基质(1 g/只)和1%的2,4-二硝基氯苯溶液(1 mL/只)，用无菌纱布固定，涂药24 h后用温水洗除受试物，观察，之后同法连续7 d。观察大鼠的中毒反应和死亡情况，以及动物的体质量变化、毛发、四肢活动和进食等情况。如有死亡，及时进行尸检和观察,必要时行病理组织学检查。

2结果

2.1皮肤刺激性实验多次给药后，空白基质与地木耳乳膏对完整皮肤无刺激性；破损皮肤组动物中，空白基质的平均反应分值均低于0.49分，对皮肤无刺激性；地木耳乳膏在用药1、24 h后均有轻度刺激性，但在给药48 h后平均反应分值均为0，刺激性消失，见表3。

表3　家兔皮肤刺激性实验结果(n=5，分)

2.2皮肤致敏性实验地木耳乳膏与空白基质对皮肤无致敏作用，均未出现红斑、水肿等反应，致敏率为0。而阳性致敏物2,4-二硝基氯苯激发给药6～72 h后，豚鼠皮肤可见不同程度的红斑和水肿，其致敏率达100%，见表4。

表4　豚鼠皮肤过敏性实验结果(n=10)

2.3皮肤急性毒性实验去除受试物后第7 d，空白基质组、完整皮肤地木耳乳膏组、破损皮肤地木耳乳膏组的豚鼠全部存活。实验期间，3组豚鼠的采食、大便、四肢活动均未见明显异常，未出现体质量异常变化和全身中毒反应,表明地木耳乳膏对豚鼠皮肤无明显的急性毒性。

3讨论

地木耳醇提取物具有良好的抗氧化、保湿和紫外线防护效果，可对皮肤产生良好的保湿和防晒作用，且天然植物的提取物具有光化学稳定、安全可靠等优点。本实验通过家兔皮肤刺激性实验，家兔完整皮肤涂以地木耳乳膏，无刺激反应，破损皮肤涂以地木耳乳膏1、24 h后有轻度刺激性，但在给药48 h后恢复正常状态；皮肤致敏性实验结果表明地木耳乳膏无致敏性；急性毒性实验显示无明显毒性作用。由此可见，地木耳乳膏作为皮肤局部用药的不良反应较小，使用安全，值得进一步临床推广应用。

[参考文献]

[1]朱浩然.中国淡水藻志:第九卷[M].北京:科学出版社2007:253.

[2]范群艳,吴向阳,仰榴青,等.地木耳的研究进展[J].常熟理工学院学报,2007,2l(4):55-59.

[3]牛生洋,郝峰鸽,赵瑞香,等.地皮菜中多糖的抑菌特性研究[J].广东农业科学,2011(9):93-94.

[4]JAKI B,ORJALA J,HEILMANN J.New antibacterial metabolites from the Cyanobacterium Nostoc commune[J].Journal of Natural Products,2000,63(9):1 283-1 285.

[5]鄢贵龙,纪丽莲,韩铭海,等.地皮菜营养成分分析与评价[J].营业学报,2010,32(1):97-98.

[6]康苗苗,冯佳,李砧,等.地木耳活性成分的提取及其护肤功效研究[J].香料香精化妆品,2014(6):47-50.

[7]国家食品药品监督管理局.化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则[S].北京：2006:10-23.

[8]徐叔云.药理实验方法学[M].3版.北京:人民卫生出版社,2001:1 861-1 862.

[9]谢秀琼.中药新制剂开发与应用[M].2版.北京:人民卫生出版社,2000:367-571.

[10]孙敬方.动物实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,2002:191,374-375.

[11]陈奇.中药药理研究方法学[M].2版.北京:人民卫生出版社,2006:159-161.

责任编辑：艾茜

Experimental Study on the Safety ofNostoccommuneVauch Cream

Lin Jing1,Hu Chengping1,Liu Jieshu2*

(1.SchoolofMedicine,HubeiPolytechnicUniversity,Huangshi435003，China;2.SchoolofTraditionalChineseMedicine,HubeiUniversityforNationalities,Enshi445000,China)

【Abstract】Objective To evaluate the safety of Nostoc commune Vauch cream.Methods The skin irritation test was performed on the skin of rabbits.The skin allergy test and acute toxicity test were performed on the skin of guinea pigs. Results Nostoc commune Vauch cream had no irritation on the intact skin of rabbits, but the mild irritation on the damaged skin was observed,which faded away 48 hs afterwards.Nostoc commune Vauch cream had no allergical reaction and acute toxicity on the skin of guinea pigs.Conclusion It is safe to use Nostoc commune Vauch cream which can treat the cutaneous diseases.

【Key words】Nostoc commune Vauch cream;skin;irritation test;allergy test;acute toxicity test

基金项目湖北省教育厅青年项目(Q20122905)。

作者简介林静(1979- )，女，湖北黄石人，讲师，硕士，研究方向：天然药物开发应用。*通信作者刘杰书，男，教授，研究方向：民族医药学。

【中图分类号】R965.3

【文献标识码】A

【文章编号】1008-8164(2016)01-0053-03

收稿日期：2016-01-16