禽腺病毒4型感染的诊断与防制

张磊 张宇 李巧 杨兴武 张鸿鑫 陈红英

摘 要：2015年8月，河南新郑某鸡场30日龄肉鸡突然出现死亡。病死鸡心包内存在大量积液，肝脏充血、肿大。PCR检测禽腺病毒4型核酸，呈现阳性，结合发病情况和剖检病变，诊断为禽腺病毒4型感染。然后对该鸡场采取了综合防制措施，取得了较好的效果。

关键词：心包积液；禽腺病毒4型；诊断；防制

中图分类号 S852.65 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）10-0116-02

Diagnosis and Preventive Treatment of Fowl Adenovirus-4 Infection

Zhang Lei1，2 et al.

（1College of Animal Science and Veterinary Medicine，Henan Agricultural University，Zhengzhou 450002，China；2Henan Vocational College of Agriculture，Zhengzhou 451450，China）

Abstract：In August 2015，some thirty-day-old broilers in Henan Province were affected with a disease characterized by an accumulation of near-amber fluid in the pericardial sac and an enlarged discolored liver with foci of hemorrhage. Fowl adenovirus-4 was positive for PCR detection. Combined with the epidemiology investigation，and autopsy results，infection of fowl adenovirus-4 was diagnosed. Then the situation had been effectively controlled by the integrated prevention measures.

Key words：Hydropericardium；Fowl adenovirus-4；Diagnosis；Preventive treatment

禽心包积水-包涵体肝炎综合征（Hydropericardium Syndrome-Inclusion Body Hepatitis，HPS-IBH）是主要由禽腺病毒4型（Fowl Adenovirus-4，FAV-4）引起的一种高度传染性和高死亡率的新型家禽疾病。该病的发病特征为3～5周龄鸡突然死亡，死亡率高达80%[1]。该病没有明显的临床症状，个别鸡在死亡前出现精神沉郁、羽毛卷曲等临床表现。病死鸡的剖检病变，主要为心包腔中蓄积有大量的淡黄色水样或胶状液体，心脏松弛，肝脏充血、肿大。该病呈急性经过，死亡率高，给禽业生产带来了巨大的经济损失。

2015年8月，河南新郑某鸡场30日龄肉鸡突然出现死亡，剖检可见大量心包积液、肝脏肿大充血和肾脏充血肿大等病变。根据发病情况、剖检变化和实验室诊断，诊断为禽腺病毒4型感染。

1 发病情况

该鸡场饲养了2 000多只30日龄肉鸡，鸡群中突然出现鸡只零星死亡，3d后死亡数高达100多只，剖检病死鸡，可见大量心包积液、肝脏肿大充血和肾脏充血肿大。常用药物均不能达到良好的控制效果。

2 临床症状与剖检结果

临床症状不明显，呈急性死亡。个别鸡在死亡前出现体温升高、积聚堆积、食欲下降、精神不振、垂头闭眼等不良表现。病死鸡剖检主要呈现为心包腔内有大量淡黄色液体或果冻状物，偶见心包有绿色液体，肝脏充血肿大、质脆色淡，心肌松弛，脾脏、肾脏充血肿大，肺脏水肿，个别病例出现法氏囊肿大以及肠道血管堵塞。

3 实验室诊断

3.1 病料DNA提取 剖检病死鸡，采集肝脏组织，剪碎、研磨混合后，按1∶5比例加入生理盐水制成组织悬液，反复冻融3次后，离心取上清液400μL，加入等体积SDS裂解液（终浓度为100μg/mL），再加入6μL蛋白酶K（终浓度为200μg/mL），使其充分混匀，置于55℃水浴条件下消化3h；加入等体积Tris平衡酚，混匀，12 000r离心5min；取上清液，经等体积酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1）、氯仿：异戊醇（24∶1）、氯仿各抽提1次，加入1.5倍体积异丙醇于-70℃放置30min，使其沉淀，12 000r离心5min弃上清液，取500μL70%乙醇洗涤2次；自然干燥后用20μL ddH2O溶解，贮存于-20℃备用。

3.2 引物设计与合成 据报道FAV-4六邻体的抗原表位区主要集中在前段、中段，具有型和群特异性表位，可作为诊断型和群的首选蛋白[2]。因此，根据GenBank公布的FAV-4GC株Hexon基因序列（EU177544）保守）区段，使用引物设计软件，设计了1对引物，预计扩增片段为421bp。上游引物为P1：5′-CGAGGTCTATACCAACACGAGCA-3′；下游引物为P2：5′-CGGCGCAGGTTAATGAAGTTATC-3′。

3.3 PCR扩增 PCR反应采用25μL体系：Premix Taq12.5μL，上下游引物（50μmol/L）各0.5μL，模板DNA 3μL，用灭菌的ddH2O补至25μL。PCR扩增程序为：95℃预变性5min；95℃变性50s、53℃退火45s、72℃延伸50s，35个循环；72℃延伸10min。PCR反应完毕后，取6μL PCR产物，1.0%琼脂糖凝胶进行电泳，于紫外灯下观察电泳结果。电泳结果显示，待检样本中可扩增出1条约400bp的目的条带（图1），而阴性对照未出现条带。而用禽流感病毒、新城疫病毒和鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）的引物，进行RT-PCR检测，结果均为阴性。再结合发病情况和剖检变化，诊断为禽腺病毒4型感染。

4 防治措施

应采取综合防治措施，饲养管理、防疫、消毒、免疫及监测5个环节缺一不可。加强饲养管理，注意饲料营养，减少应激，提高鸡群的整体健康水平；特别强调各阶段、各批次鸡整进整出。严格执行防疫和消毒制度，杜绝强毒污染和入侵，同时使用疫苗和药物进行预防。坚持定期的免疫监测，随时调整免疫计划，使鸡群始终保持有效的抗体水平。值得注意的是，IBDV和鸡传贫血病毒都能诱发腺病毒的感染与致病，所以家禽应正确地接种这两种疾病的疫苗。

对于FAV-4引起的禽心包积水-包涵体肝炎综合征，目前尚无有效的治疗药物。平时采取综合防制措施和FAV-4灭活疫苗免疫接种进行预防。一旦发病，采用临床上患心包积液、肝肾肿大等病变的死鸡肝脏甲醛灭活疫苗进行紧急接种，同时使用退烧药和消炎药给鸡饮水，饲喂保肝护肾药物，4～5d后即可收到较明显的治疗效果。总之，围绕抗病毒、利水消肿、保肝护肾、防治继发感染等原则积极采取正确的治疗手段，既可基本控制病情。

参考文献

[1]Asthana M，Chandra R，Kumar R.Hydropericardium syndrome：current state and future developments[J].Arch Virol，2013，158（5）：921-31.

[2]文艳玲，谢芝勋，黄琦，等.禽腺病毒1型和4型六邻体蛋白抗原表位和密码子偏爱性分析[J].动物医学进展，2007，28（11）：17.

（责编：张宏民）