CYP39A1基因在肝癌组织中的表达及临床意义

龚由之，曾 智，江应安

武汉大学人民医院 1.感染科； 2.病理科，湖北 武汉 430060

CYP39A1基因在肝癌组织中的表达及临床意义

龚由之1，曾 智2，江应安1

武汉大学人民医院 1.感染科； 2.病理科，湖北 武汉 430060

目的 检测人肝癌组织中CYP39A1基因的表达，探讨其与人肝癌临床病理特征的关系。方法 应用免疫组化SP法检测32例肝癌组织及其相应的癌旁正常组织中CYP39A1基因的表达。 结果 32例肝癌组织中CYP39A1基因阳性及强阳性表达率(25.00%)显著低于其相应的癌旁正常组织(93.75%)，差异具有统计学意义(P<0.01)。32例肝癌组织中，CYP39A1基因表达程度与患者的性别、淋巴结转移、远处转移、T分期(T1期+T2期,T3期+T4期)无关(P>0.05)，与患者年龄及肿瘤分化程度有关(P<0.05)。结论 CYP39A1基因在肝癌的发生、发展中起着重要作用，可能成为肝癌靶向治疗的一个新靶点。

肝癌；癌旁正常组织；CYP39A1基因；免疫组化

原发性肝癌是世界上第五大常见肿瘤和第三大肿瘤死亡相关因素，起病隐匿，预后差。手术切除和肝移植等被认为是肝癌根治性治疗的手段，但大多数患者在初次诊断时，便已进入肝癌晚期，因而失去了根治性治疗的机会。细胞色素P450(CYP)是一种单加氧酶超家族，参与包括甾类激素、胆汁酸、胆固醇、药物、毒素等物质在内的新陈代谢[1]。CYP39A1基因编码7α甾类羟化酶，这种酶参与24-羟化胆固醇的代谢。有报道[2-3]CYP39A1在卵巢癌中高甲基化，并可作为胆管细胞癌判断预后的生物学标志。本研究通过检测CYP39A1在肝癌组织中的表达，探讨其与人肝癌临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 试剂、标本来源及临床、病理资料 免疫组化试剂盒、DAB显色剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司，兔抗CYP39A1多克隆抗体(ab129334)购自Abcam上海贸易有限公司。

收集2012年12月-2014年12月在武汉大学人民医院手术切除的肝癌标本32例，手术同时取距肿瘤边缘2 cm的正常肝脏组织。术前均未做任何放、化疗。

肿瘤分期根据UICC及AJCC 2002版进行，所有标本均经病理诊断证实。每份标本离体后立即以10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，连续切片，切片厚4 μm，65 ℃烘烤备用。

1.2 免疫组化 采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶SP法检测32例肝癌组织及其相应的癌旁正常组织中CYP39A1基因的表达，一抗工作浓度1∶400，DAB显色，操作严格按免疫组化试剂使用说明书进行。

1.3 结果判断标准 随机选取3个高倍镜(40×)视野，根据阳性细胞染色强度综合判定实验结果：无阳性染色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。判断0分为阴性，1分为弱阳性，2分为阳性，3分为强阳性。

1.4 统计学方法 CYP39A1基因在肝癌组织及癌旁正常组织表达，及与肝癌临床病理特征关系比较均采用χ2检验，统计分析由SPSS 19.0软件完成，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CYP39A1基因在肝癌及其癌旁正常组织中的表达 32例肝癌组织中，CYP39A1阳性表达8例(25.00%)，其中强阳性0例；阴性及弱阳性表达24例(75.00%)，在其相应的癌旁正常组织中，CYP39A1基因阳性表达30例(93.75%)，其中强阳性15例(46.88%)；CYP39A1基因阴性及弱阳性表达2例(6.25%)。32例肝癌组织中CYP39A1基因阳性、强阳性表达率显著低于其相应的癌旁正常组织，差异有统计学意义(P<0.05)。在癌旁正常组织中CYP39A1表达时表现为细胞质和细胞核膜均出现明显棕褐色颗粒，阳性细胞占满视野(见图1)，CYP39A1基因在肝癌组织中表达时细胞质及细胞核均未出现明显的棕黄色或棕褐色颗粒，镜下视野呈阴性表达(见图2)。在同一张组织切片中，肝癌及其癌旁正常组织中CYP39A1基因表达存在明显差异(见图3)。

图1 癌旁正常组织免疫组化染色示CYP39A1表达阳性(40×)；图2 肝癌组织免疫组化染色示CYP39A1表达阴性(40×)；图3 同一份样本中CYP39A1在肝癌组织及其癌旁正常组织中的表达(IHC 40×)

Fig 1 Immunohistochemical staining showed CYP39A1 (+) in the adjacent normal tissue (40×); Fig 2 Immunohistochemical staining showed CYP39A1 (-) in hepatocellular carcinoma tissue (40×); Fig 3 The expression of CYP39A1 in hepatocellular carcinoma tissue and adjacent normal tissue in the same sample (IHC 40×)

2.2 CYP39A1基因表达与肝癌临床病理特征的关系 32例肝癌组织标本中CYP39A1表达与患者性别、淋巴结转移、远处转移及T分期无明显相关性(P>0.05)，与患者年龄及病理分化程度有关(P<0.05，见表1)。

表1 CYP39A1基因的表达与临床病理特征的关系

Tab 1 The relationship between the expression of CYP39A1 and the clinicopathological features

临床病理因素CYP39A1基因的表达阳性阴性P值性别 男25817>0．05 女707年龄(岁) ≤551468<0．05 >5518216分化程度 高、中分化型23815<0．05 低分化型909淋巴结转移 有101>0．05 无31823

续表1

临床病理因素CYP39A1基因的表达阳性阴性P值远处转移 有615>0．05 无26719T分期 T1⁃T219613>0．05 T3⁃T413211

3 讨论

CYP39A1是细胞色素P450超家族成员，位于人类6号染色体上，含14个编码外显子，翻译表达7α甾类羟化酶，参与24-羟化胆固醇的代谢[4]。研究者[5]通过对42例卵巢癌及子宫内膜癌化疗患者研究发现，CYP39A1单核酸多态性(rs7761731)与紫杉醇引起的严重中性粒细胞减少症有关。相继有学者[6]在对头颈部肿瘤化疗患者研究中也得出，CYP39A1(rs7761731)多态性与化疗诱导的中性粒细胞减少症及感染死亡关系密切。CYP39A1在肿瘤中的作用也逐渐被研究者们探讨，Huang等[2]研究发现CYP39A1在卵巢癌中高甲基化，导致其转录失调，从而使胆固醇、喹啉酸代谢失调，促进了卵巢癌的发生。更有研究者[3]发现，CYP39A1在胆管细胞癌中低表达，并与高氧化应激及不良预后关系密切。

本研究通过对32例肝癌及癌旁正常组织中CYP39A1表达的比较发现，CYP39A1在癌旁组织中的表达明显高于其在对应肝癌组织中的表达(P<0.01)，进一步对32例肝癌患者临床病理进行分析发现，该基因表达与性别、淋巴结转移、远处转移及T分期无关(P>0.05)，而与患者年龄及肿瘤的分化程度有关(P<0.05)。

现有研究中，关于CYP39A1研究的报道甚少。通过本次研究表明，CYP39A1与肝癌的发生、发展有密切关系，并可能成为诊断及判断肝癌预后的潜在生物学标志，为临床诊断及治疗肝癌提供新的思路。但其在肝癌发生、发展中的作用机制以及信号通路的传导有待进一步的研究。

[1]王斌, 李德远. 细胞色素p450的结构与催化机理[J]. 有机化学, 2009, 29(4): 658-662. Wang B, Li DY. Structure and catalytic mechanism of cytochrome P450 [J]. Chinese Journal of Organic Chemistry, 2009, 29(4): 658-662.

[2]Huang YW, Jansen RA, Fabbri E, et al. Identification of candidate epigenetic biomarkers for ovarian cancer detection [J]. Oncol Rep, 2009, 22(4): 853-861.

[3]Khenjanta C, Thanan R, Jusakul A, et al. Association of cyp39a1, runx2 and oxidized alpha-1 antitrypsin expression in relation to cholangiocarcinoma progression [J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2014, 15(23): 10187-10192.

[4]Li-Hawkins J, Lund EG, Bronson AD, et al. Expression cloning of an oxysterol 7alpha-hydroxylase selective for 24-hydroxycholesterol [J]. J Biol Chem, 2000, 275(22): 16543-16549.

[5]Uchiyama T, Kanno H, Ishitani K, et al. An SNP in CYP39A1 is associated with severe neutropenia induced by docetaxel [J]. Cancer Chemother Pharmacol, 2012, 69(6): 1617-1624.

[6]Melchardt T, Hufnagl C, Magnes T, et al. Cyp39a1 polymorphism is associated with toxicity during intensive induction chemotherapy in patients with advanced head and neck cancer [J]. BMC Cancer, 2015, 15: 725.

(责任编辑：王全楚)

Expression of CYP39A1 in hepatocellular carcinoma tissue and its clinical significance

GONG Youzhi1, ZENG Zhi2, JIANG Ying’an1

1.Department of Infectious Diseases; 2.Department of Pathology, Renmin Hospital of Wuhan University, Wuhan 430060, China

Objective To detect the expression of CYP39A1 in human hepatocellular carcinoma(HCC), and to explore its relationship with clinical and pathological features of HCC.Methods The expression of CYP39A1 was detected by immunohistochemistry in 32 HCC specimens and their corresponding adjacent normal tissues.Results The rate of positive and strong positive expression of CYP39A1 in HCC tissue was significantly lower than that in adjacent normal tissue (25.00%vs93.75%,P<0.01). The expression of CYP39A1 was correlated with age and poor differentiation (P<0.05), but not correlated with gender, lymph node metastasis, distant metastasis and T stage(T3+T4)(P>0.05).Conclusion CYP39A1 gene plays an important role in the occurrence and development of HCC, and may be the novel treatment target of HCC.

Hepatocellular carcinoma; Adjacent normal tissue; CYP39A1 gene; Immunohistochemistry

龚由之，硕士研究生，研究方向：医院感染的基础和临床研究。E-mail: 121029279@qq.com

江应安，博士，教授，研究方向：医院感染的基础和临床研究。E-mail: jiangya_cn@aliyun.com

10.3969/j.issn.1006-5709.2016.08.006

R735.7

A

1006-5709(2016)08-0865-03

2016-01-13