扶正排毒片对氢化可的松致免疫抑制小鼠外周血T淋巴细胞及免疫器官的影响＊

史晶晶，时 博，苗明三，李青雅

（河南中医学院药学院 郑州 450046）

扶正排毒片对氢化可的松致免疫抑制小鼠外周血T淋巴细胞及免疫器官的影响＊

史晶晶，时 博＊＊，苗明三，李青雅

（河南中医学院药学院 郑州 450046）

目的：本研究通过观察扶正排毒片对免疫抑制小鼠血细胞免疫功能的影响以及免疫器官的病理变化，探讨其对免疫的调节作用。方法：采用皮下注射氢化可的松造动物免疫抑制模型。通过连续灌服不同剂量的扶正排毒片混悬液，观察扶正排毒片对实验动物外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞水平、CD4+/CD8+比值的影响及动物胸腺、脾脏、小肠的病理改变。结果：与模型组比较，扶正排毒片高、中、低剂量组与香菇多糖组均能显著提高免疫抑制小鼠CD3+、CD4+细胞数量，促进CD4+/CD8+比值增高。结论：扶正排毒片可改善氢化可的松致免疫抑制模型小鼠的免疫功能。

扶正排毒片 免疫抑制 氢化可的松

艾滋病全称为获得性免疫缺陷综合征（Acquird Immune Deficiency Syndrome，AIDS），HIV感染后，导致免疫功能缺陷，易发生机会性疾病，包括感染和恶性肿瘤，人体从HIV感染到AIDS发病，大致经过3个时期。无症状带毒期(Assympto matic Carrier，AC)、AIDS相关症候群期(AIDS related complex，ARC)、最后发展成AIDS[1,2]。目前世界上公认的治疗艾滋病有效疗法为高效抗逆转录酶病毒联合疗法，但对还未达到应用标准的无症状期HIV 感染者，却无适宜的药物治疗，只有等到病情的发展达到抗病毒治疗指征时才应用抗病毒药物治疗[3-5]。

扶正排毒片是河南中医学院针对无症状期HIV感染者“正气不足、邪毒内伏”的病机[6]，乏力、气短、纳差、便溏、自汗盗汗、易感外邪、头晕、倦怠等症状而研制的中药新药，本研究通过以氢化可的松造免疫抑制动物模型模拟HIV无症状期免疫低下状态，观察扶正排毒排对免疫功能的调节作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验试剂

扶正排毒片，主要成分为西洋参、黄芪、紫草、连翘、白花蛇舌草、甘草等（河南奥林特药业有限公司，批号：20070601)；香菇多糖片，主要成分为香菇菌多糖，规格：基片重0.1g（浙江普洛康裕天然药物有限公司，批号：20070401)；氢化可的松注射液（山西晋新双鹤药业有限责任公司，批号：200704261)。生理盐水（郑州化学制药厂，批号：070620021）；甲醛（上海化学试剂采购供应站，批号：031208）。

1.1.2 实验动物

昆明种小鼠，清洁级，体质量18-21 g，6周龄，雌雄各半；由武汉生物制品检定所提供，动物质量合格证号：合格证号：0036893。实验室温度20-25℃，湿度50%-60%，动物自由饮食。

1.1.3 实验仪器

EDTA抗凝管；JY601电子称（上海民桥医疗器械有限公司）；TDL-40B型离心机（上海安亭科学仪器厂）；可调式移液器（上海雷勃分析仪器有限公司）；病理图文分析系统（浙江永安公司）；流式细胞仪（美国BECKMAN COULTER公司，型号：EPICSXL）；组织切片机（德国蔡司公司，型号：Zeiss-HM440E）；电脑全自动染色机（常州华利公司，型号：ZMN-20802）；电脑自动组织脱水机（浙江科迪公司，型号：KD-TS3）；生物显微镜（日本奥林巴斯公司，型号：OLYMPUS BX-60）；高压锅或电炉或医用微波炉；恒温水浴锅（北京市光明仪器厂）。

1.2 实验方法

1.2.1 对免疫抑制小鼠外周血T淋巴细胞水平的影响

取小鼠60只，采用完全随机分组法均匀分成6组，其中5组使用氢化可的松造免疫抑制小鼠模型[7,8]。在给药的前6天，每天均皮下注射50 mg·kg-1的氢化可的松注射液（浓度：2.5 mg·mL-1，给药量：0.1 mL/10 g，分上午、下午两次皮下注射给药，每天总用量为50 mg·kg-1）。造模第1天，造模5组分别灌服高、中、低剂量的扶正排毒片混悬液（浓度：0.14、0.07、0.035 g·mL-1，给药量：0.2 mL/10 g）、香菇多糖片混悬液（浓度：0.01 g·mL-1，给药量：0.2 mL/10 g）及同体积的生理盐水。空白对照组小鼠予同体积生理盐水灌胃，不造模。每天给药1次，连续给药7天。第7天给药后1 h，摘眼球取血，加EDTA抗凝，抗凝全血用流式细胞仪检测小鼠外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞水平。

1.2.2 对免疫抑制小鼠免疫器官的影响

摘眼球取血后的小鼠，脱颈椎处死，解剖后取胸腺、脾脏、小肠，使用10%甲醛溶液固定，做病理切片。结果见表2-表4。

1.3 统计学方法

数据分析用SPSS 17.0统计软件，计量资料组间比较采用单因素方差分析，等级资料采用Ridit分析；P＜0.05认为有统计学差异。

2 实验结果

2.1 扶正排毒片对氢化可的松所致免疫抑制小鼠外周血T淋巴细胞水平的影响

从表1可以看出，与空白组比较，模型组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+极显著下降（P＜0.01），说明氢化可的松致小鼠免疫抑制模型成功建立。与模型组比较，香菇多糖片组及扶正排毒片高、中、低剂量组均可显著提高免疫抑制小鼠CD3+、CD4+细胞数量（P＜0.01），促进CD4+/CD8+比值增高（P＜0.01），详见表1。

表1 扶正排毒片对氢化可的松所致免疫抑制小鼠外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的比较（n=10）

2.2 扶正排毒片对氢化可的松所致免疫抑制小鼠免 疫器官的影响

空白组脾脏中脾小结及淋巴细胞较为密集（图1）。从表2可见，与空白组比较，模型组动物的脾小结明显缩小，淋巴细胞比较稀疏（P＜0.01），认为成功建模。与模型组比较，香菇多糖片组及扶正排毒片高、中剂量组均可显著改善免疫抑制小鼠脾小结缩小及淋巴细胞减少（P＜0.01），提示扶正排毒片对氢化可的松所致免疫抑制小鼠免疫功能具有改善作用。

从图2可以看出，空白组动物胸腺小叶分界清楚，皮质与髓质间分界清晰，皮质淋巴细胞比较密集。从表3可见，与空白组对比，模型组动物的胸腺皮质明显变薄，淋巴细胞亦较为稀疏（P＜0.01），我们认为造模成功。与模型组对比，香菇多糖片组及扶正排毒片高、中剂量组均可显著改善免疫抑制动物模型小鼠胸腺皮质萎缩及淋巴细胞稀疏（P＜0.01）。说明扶正排毒片对氢化可的松所致免疫抑制小鼠免疫功能具有调节作用。

图1 扶正排毒片对氢化可的松致免疫抑制小鼠脾脏组织形态的影响

表2 扶正排毒片对氢化可的松致免疫抑制小鼠脾脏组织中脾小结大小和淋巴细胞数的影响（n=10）

空白组动物肠粘膜上皮细胞、粘膜固有层、粘膜下层、肌层和浆膜层均正常（图3）。从表4可以看出，与空白组比较，模型组动物肠粘膜上皮细胞出现明显的变性坏死现象、粘膜固有层、粘膜下层均出现大量炎细胞浸润，经Ridit检验，P＜0.01，说明造模成功。与模型组比较，扶正排毒片高、中剂量组均可显著改善免疫抑制小鼠小肠炎症反应，经Ridit检验，P＜0.01，扶正排毒片低剂量组和香菇多糖片组有改善肠粘膜损伤的趋势，提示扶正排毒片对氢化可的松所致免疫抑制小鼠免疫功能具有改善作用。

图2 扶正排毒片对氢化可的松致免疫抑制小鼠胸腺组织形态的影响

表3 扶正排毒片对氢化可的松致免疫抑制小鼠 胸腺组织中胸腺厚度和淋巴细胞数的影响（n=10）

3 讨论

中医没有艾滋病这一病名，但是中医学对病毒性传染病的研究和施治已有几千年的历史。根据发病过程和临床特征，艾滋病应属于中医“疫病”、“伏气温病”、“虚劳”、“五劳损伤”等范畴，也就是由慢性传染病向内伤杂病演变的疾病[9-12]。AIDS的主要病机是本虚标实，疫毒之邪和瘀血内结是标，肾精亏损气血不足是本，病位在肺脾肾。中医中药对AIDS治疗既有抗病毒、抗机会感染的作用，也可提高机体免疫力和机体抗病毒能力和抵抗力，这正是目前治疗AIDS的几个重要方面。

图3 扶正排毒片对氢化可的松致免疫抑制小鼠小肠组织形态的影响

扶正排毒片是河南中医学院研制的治疗艾滋病的中药复方，由西洋参、黄芪、紫草、连翘、白花蛇舌草、甘草等组成，主要用于无症状HIV感染者。中医理论认为艾滋病基本病机为正气不足、邪毒内伏，常见的症状有乏力、气短、纳差、便溏、自汗、盗汗、易感外邪、头晕、倦怠等，因此调补正气，攻邪祛毒是其主要治则。

氢化可的松是一种糖皮质激素的长效制剂,对机体免疫过程中的许多环节均有抑制作用。小鼠在注射氢化可的松3天后出现活动减少、精神状态差、体质量减轻等状况，解剖后可观察到小鼠的胸腺、脾脏等免疫器官出现明显缩小，与正常组小鼠区别明显。模型组小鼠胸腺的组织切片表明胸腺发生严重萎缩，细胞稀疏，皮质明显变薄，脾小节明显缩小，淋巴细胞数明显减少，淋巴小结和红髓广泛出现灶状纤维增生，可以认为模型组动物的免疫功能显著下降，免疫抑制小鼠模型造模成功。

表4 扶正排毒片对氢化可的松致免疫抑制小鼠小肠粘膜病理改变的影响（n=10）

实验结果显示，扶正排毒片对免疫抑制小鼠免疫功能有一定的调节作用，可以明显改善免疫低下动物蜷缩弓背、毛竖闭目、体重减轻等一般体征。通过光镜病理观察分析表明：扶正排毒片可以明显改善免疫抑制小鼠脾脏脾小结缩小淋巴细胞稀疏，改善胸腺皮质萎缩淋巴细胞稀疏，减少小肠粘膜炎症浸润甚至坏死等病理改变。认为扶正排毒片有调节免疫抑制动物机体免疫功能的作用，有利于免疫功能低下小鼠免疫功能的恢复，改善生存质量的作用，为扶正排毒片用于不适合抗病毒治疗的HIV感染者的早期治疗奠定一定基础。

1 王志威,黄毅凌,黄碧玲,等.中医对艾滋病病机认识进展概述.亚太传统医药, 2015, 11(23): 42-44.

2 王健,邹雯.中医药治疗艾滋病的研究进展.中国艾滋病性病, 2014, 20(10): 794-796

3 Tan J Y, Lian L H, Nadarajan V S. Genetic polymorphisms of human platelet antigens-1 to -6 and -15 in the Malay-Sian population.Blood Transfus, 2012, 10(3): 368-376.

4 Arinsburg S A, Shaz B H, Westhoff C,et al. Determination of human platelet antigen typing by moleculai methods:importance in diagnosis and early treatment of neonatal alloimmune thrombocytopenia.Am J Hematol, 2012, 87(5): 525-528.

5 彭勃,王丹妮.对艾滋病无症状HIV感染期的认识.中华中医药杂志, 2006, 21(11): 663-665.

6 徐立然,陈关征,李欢.艾滋病中医“脾为枢机”探讨.中医研究, 2012, 23(2): 1-2.

7 张志远,王海莉,苗明三.扶正中药复方对环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠免疫器官和肠黏膜CD3+、CD4+、CD8+的影响.中医研究, 2008, 21(12): 17-20.

8 彭勃,苗明三,郭会军,等.扶正排毒片对氢化可的松致免疫抑制小鼠免疫功能的调节.中国临床康复, 2006, 10(39): 141-143.

9 沈珍.治未病理论在中医药防治HIV无症状期的应用.湖南中医杂志, 2012, 28(1): 80-81.

10 黄荣师.中医药治疗艾滋病研究进展.中医学报, 2015, 30(3): 330-332.

11 田淑娥,张毅.无症状HIV感染期的中医药研究进展.中医临床研究, 2013, 5(16): 118-119

12 姜枫,顾侦芳,李政伟,等.扶正排毒片对无症状人类免疫缺陷病毒感染者干扰素α的影响.中国中西医结合杂志, 2012, 32(12): 1700-1701.

Immunoregulatory Effects of Fuzheng Paidu Tablets on T Lymphocytes and Immune Organs in Mice

Shi Jingjing, Shi Bo, Miao Mingsan, Li Qingya
(College of Pharmacy, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China)

The goal of this study was to observe the impacts ofFuzheng Paidutablets (FZPDT) on blood cell immune function and pathological changes in immune organs, and to elucidate the immune regulation activity and mechanism of FZPDT in immunosuppressive mice. In this study, immunosuppressive model were establishedby subcutaneous injection with hydrocortisone. Mice were administered by intragastric infusion with high-, middle- and low-dose of FZPDT solution. Then the contents of CD3+, CD4+, CD8+T cells and ratio of CD4+to CD8+of all experimental animals were detected, and pathological changes in thymus, spleen and small intestine were observed. It was found that CD3+and CD4+cell counts and the ratio of CD4+to CD8+were increased in all the three doses of FZPDT groups and the lentinan tablet group when compared with the model group, which suggested that FZPDT may improve blood cell immune function in hydrocortisone-induced immunosuppressive mice.

Fuzheng Paidutablets, immunological function, hydrocortisone

10.11842/wst.2016.03.020

R285

A

（责任编辑：朱黎婷 张志华，责任译审：朱黎婷）

2015-08-27

修回日期：2016-01-25

＊ 河南省科技厅基础与前沿课题项目（102300413212）：HIV感染进程中免疫调控分子动态变化及中药作用机制研究，负责人：李青雅；河南省人力资源和社会保障厅博士后基金（豫人社博管[2014]3号）：中药扶正排毒片对艾滋病无症状HIV感染期的临床研究，负责人：李青雅。

＊＊ 通讯作者：时博，讲师，主要研究方向：中药学研究。