深圳市南山区和大鹏区溃疡性结肠炎患者血浆同型半胱氨酸、叶酸及肿瘤坏死因子-α的水平及其临床意义

2016-06-05陈少文赵燕颖黄丽萍吉明柱刘艳红

胃肠病学和肝病学杂志 2016年1期

陈少文，赵燕颖，黄丽萍，吉明柱，刘艳红

1.深圳市大鹏新区南澳人民医院消化科，广东深圳 518121；2.吉林大学第四医院消化科；3.深圳市大鹏新区大鹏人民医院内科；4.深圳市蛇口人民医院消化科

陈少文1，赵燕颖2，黄丽萍3，吉明柱4，刘艳红4

目的探讨深圳市溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者中血浆同型半胱氨酸(Hcy)、叶酸(FA)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的改变及其临床意义。方法采用直接化学发光法检测深圳市南山区和大鹏区三家医院门诊和住院56例UC患者和60名健康对照人群血浆Hcy水平,并应用ELISA方法检测血浆FA和TNF-α水平。结果 UC患者中血浆Hcy水平明显高于对照组(P<0.01)；血浆Hcy水平与UC病情分级和病变范围均无关(P>0.05)。中度和重度UC患者中血浆FA水平明显低于对照组(P<0.01);血浆FA水平与UC病情分级无关(P>0.05)。UC患者中血浆TNF-α水平明显高于对照组(P<0.05)，TNF-α水平和UC病情分级呈正相关。结论 UC患者血浆Hcy和TNF-α水平明显高于正常人，FA水平则低于正常人，这些可能共同参与了UC的发生和发展。

溃疡性结肠炎；同型半胱氨酸；叶酸；肿瘤坏死因子-α

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是一种病因不明的慢性肠道性疾病。病变多累及直肠和远端结肠，并可向近端扩展以至发展到整个结肠。大量研究证实许多细胞因子与细胞因子网络直接参与了UC的形成和发展，如IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α。同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)是一种含硫基的氨基酸,是能量代谢和许多去甲基化反应的重要中间产物，是一种生物活性极高的有害分子[1]，其含量的增加主要是由于代谢酶的异常或营养缺乏如叶酸、维生素B12、B6等。目前已证实高同型半胱氨酸血症与克罗恩病相关，但Hcy水平与UC相关性还需要进一步的研究和证实。本文通过检测深圳市南山区和大鹏区3家医院UC患者和健康人的血清中Hcy、FA及TNF-α浓度，探讨Hcy、FA和TNF-α与UC的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择深圳市大鹏区2家医院和深圳市南山区蛇口人民医院2009年1月-2013年12月确诊的UC患者56例，男29例，年龄25～85岁，中位年龄51岁；女27例，年龄26～71岁，中位年龄50岁。诊断标准参考中华医学会消化病学分会《对炎症性肠病诊断治疗规范的建议》[2]，并根据该建议将56例UC患者分为轻度UC组24例，中度UC组17例，重度UC组15例。此次入院有50例患者行电子结肠镜检查后明确病变部位，病变累及直肠、乙状结肠者22例,左半结肠者15例，全结肠直肠者13例。对照组为同期在我院体检中心收集的60名年龄、性别相匹配的健康体检者(均排除高血压、冠心病、糖尿病、自身免疫疾病及动静脉血栓形成等疾病史)。

1.2 方法清晨空腹取静脉血3 ml于分离采血管内。以离心半径17.45 cm，3 500 r/min离心10 min分离血清，置于-80 ℃冰箱保存。采用直接化学发光法检测56例UC患者和60名正常对照者血清Hcy水平，检测仪器为西门子Centaur CP及其配套试剂。同时采用ELISA法检测上述人群的FA和TNF-α水平。试剂盒购自美国R&D公司，严格按照说明书操作。

1.3 统计学处理采用SPSS 12.0软件进行统计分析。组间均数的比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman秩相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组血浆Hcy、FA和TNF-α的表达情况UC组Hcy水平显著高于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。轻度UC患者Hcy水平低于中度UC患者，中度UC患者Hcy水平低于重度UC患者，但两组比较差异均无统计学意义(P=0.103，P=0.115)。一般正常空腹血浆总Hcy水平为5～15 μmol/L，故以血浆Hcy水平15.00 μmol/L为界值分高低2组。UC患者中Hcy≥15 μmol/L者23例，(41.07%)，健康对照组中Hcy≥15 μmol/L者6例(10.00%)，健康对照组中高Hcy的比例明显低于UC组，差异有统计学意义(χ2=5.561，P=0.008)。

重度和中度UC患者的FA水平明显低于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。轻度UC患者血浆FA水平虽然低于健康对照组，但差异无统计学意义(P>0.05) 。轻度UC患者的FA水平高于中度UC患者，中度UC患者FA水平高于重度UC患者，但差异无统计学意义(P>0.05) 。UC患者的TNF-α水平明显高于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。重度UC患者TNF-α水平高于中度UC患者，中度UC患者TNF-α水平高于轻度UC患者，差异均有统计学意义(P<0.05，见表1)。

分组例数Hcy(μmol/L)FA(nmol/L)TNF⁃α(ng/L)UC组轻度2415．99±3．02∗7．55±1．3732．5±3．7∗ 中度1718．01±4．21∗5．11±1．11∗59．1±9．9∗# 重度1519．53±5．16∗4．12±0．95∗86．9±11．9∗#对照组608．11±2．079．98±1．3815．9±9．1

注：与对照组比较，*P<0.05；与轻度UC患者比较，#P<0.05。

2.2 Hcy、FA、TNF-α和UC的相关性UC按病变范围分为全结肠型、直肠、乙状结肠型、左半结肠型、直肠型和区域性结肠型UC。各组UC患者血浆Hcy水平差异无统计学意义(P=0.385)，经相关性分析显示Hcy水平与UC病变范围无相关性(r=-0.142，P=0.278)。血浆FA、TNF-α水平与UC病变范围无相关性(P=0.416)。

UC患者血浆Hcy、FA和TNF-α与疾病相关性的分析显示，Hcy水平与UC病情分级无相关性(r=-0.239，P=0.09)。FA水平与病情分级无相关性(r=0.195，P=0.186)。TNF-α水平与病情分级呈正相关 (r=0.362，P=0.017 )。

3 讨论

目前认为UC与遗传、环境、免疫因素有关，肠道免疫系统调节异常可能发挥重要作用。肠黏膜可直接产生免疫效应分子对抗肠腔内微生物，或通过信号传导启动黏膜获得性免疫，介导直接的黏膜保护反应，这些分子的异常可能会引起黏膜保护机制的破坏[3-4]。有报道IL-1、TNF-α是介导UC炎症发生和扩大的两个主要的细胞因子[5]。TNF-α为重要的促炎性细胞因子，主要产生细胞为单核巨噬细胞，为介导UC的主要细胞因子。在UC患者体内存在多种异常抗体及免疫复合物，其通过不同途径刺激单核-巨噬细胞产生并释放TNF-α[6]。过多表达的TNF-α可以破坏肠黏膜及血管系统，导致炎性病变及溃疡的形成。且有研究[7]显示UC患者肠黏膜、粪便、血液中TNF-α水平增高，且与疾病活动度相关。按UC病情轻重可分为3级：轻度：此型最常见，通常仅累及结肠的远端部分，病情轻，腹泻每日少于4次，腹痛、便血轻或少见，缺乏全身症状和体征；中度：介于轻度与重度之间，起病突然，腹泻每日4～5次，为稀便和血便，腹痛较重，有低热，体质量减轻，食欲减退，可有肠道外表现；重度：起病急骤，有显著的腹泻、便血，有持续的严重腹痛，可出现低血压。我们发现UC患者TNF-α水平显著高于健康对照组，重度UC患者血清TNF-α水平显著高于中度和轻度UC患者，且TNF-α水平与UC病情分级呈正相关。进一步证明TNF-α参与了UC的发病机制，且与UC的发生、发展密切相关。

Hcy是甲硫氨酸(Met)去甲基化过程中的产物，UC患者高水平的Hcy对结肠血管内皮和上皮细胞具有潜在的损伤作用，可能加重UC的炎性反应过程。Hcy可能通过多种机制参与UC的病理生理过程[8]，Hcy可按不同方式转运至细胞内并通过巯基自氧化产生氧自由基，可降低细胞内抗氧化酶表达，降低机体清除体内氧自由基的能力，通过氧化应激反应造成内皮细胞的损伤[9]。Hcy还可通过诱导产生核因子NF-κB、IL-6、IL-8等炎性因子促进炎性反应[10]。另外，高水平的Hcy还可以促进血小板聚集，活化的血小板释放多种炎性介质，参与肠黏膜的炎症反应，导致UC发生[11]。已有研究[12]报道Hcy的升高可能与遗传基因、叶酸和VB12等表达水平有关。国外研究发现，IBD患者血浆和肠黏膜中Hcy浓度明显高于对照组，UC患者血浆Hcy水平更高达30%[13]。

本研究也显示UC患者血浆Hcy水平明显高于对照组，但血浆Hcy水平与UC患者病情分级及病变范围无关，这与既往的某些报道[14]不一致，可能和样本量不大有关。另外，有研究显示有UC家族史的患者的Hcy水平也较高[15]，这个结果有待于我们进一步证实。血浆TNF-α水平与UC密切相关，且与病情程度呈正相关性。但FA与UC无明显相关性。

总之，血清Hcy和TNF-α水平升高在UC患者中具有一定普遍性，为临床治疗提供新的思路。但是在本研究中没有涉及UC患者Hcy代谢酶基因多态性的研究，我们还需要更加广泛深入的探讨UC和Hcy及其影响因素之间的关系，为UC的治疗开辟新的途径。

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(责任编辑：陈香宇)

Levels of plasma homocysteine, folic acid and tumor necrosis factor-alpha and their clinical significance in ulcerative colitis in Nanshan district and Dapeng district of Shenzhen

CHEN Shaowen1,ZHAO Yanying2, HUANG Liping3, JI Mingzhu4, LIU Yanhong4

1. Department of Gastroenterology, the Nan’ao People’s Hospital of Dapeng District in Shenzhen, Shenzhen 518121; 2. Department of Gastroenterology, the Fourth Hospital of Jilin University; 3. Department of Internal Medicine, the Dapeng People’s Hospital of Dapeng District in Shenzhen; 4. Department of Gastroenterology, the Shekou People’s Hospital of Shenzhen, China

Objective To investigate the levels of plasma homocysteine (Hcy), folic acid (FA) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) and their clinical significance in ulcerative colitis (UC) in Shenzhen city. Methods The plasma Hcy levels of 56 cases of UC patients and 60 healthy controls who were collected from three hospitals of Shenzhen city were detected by direct chemiluminescence, plasma FA and TNF-α levels were detected by ELISA assay.Results The level of plasma Hcy in patients with UC was higher than that of control group (P<0.01).The level of plasma Hcy was not related to lesion range and disease classification of UC (P>0.05). The level of plasma FA in moderate and severe UC was significantly lower than that in the control group (P<0.01). There was no association between the level of plasma and disease classification of UC (P>0.05). The level of plasma TNF-α in UC group was significantly higher than that in the control group (P<0.05), TNF-α level was positively related to disease classification of UC.Conclusion The levels of serum Hcy and TNF-α are significantly higher in UC patients than those in the normal controls. The level of FA is lower in UC patients than taht in the normal controls. These may be involved in the occurrence and development of UC.

Ulcerative colitis; Homocysteine; Folic acid; Tumor necrosis factor-α

10.3969/j.issn.1006-5709.2016.01.014

陈少文，主治医师，研究方向：胃肠道疾病的临床诊治和基础。E-mail：chenshaowen76@126.com

R574.62

1006-5709(2016)01-0056-03

2015-02-17