乙酰谷酰胺注射液中有关物质的研究

王燕+钱伟钢+厉昌卫+徐菁华+孙东艳+周华娜+王雪敏

摘 要 目的：建立HPLC法测定乙酰谷酰胺注射液中的有关物质。方法：HPLC检测采用Sepax HP-C18柱、以0.1%的高氯酸水溶液-甲醇（99∶1）为流动相、检测波长为210 nm、柱温25 ℃。 结果： 6个有关物质能较好地分离，专属性、线性、定量限、检测限、校正因子、系统精密度、溶液稳定性、重复性均符合2010年版中国药典要求，结论：该方法可将乙酰谷酰胺注射液中的乙酰谷酰胺与6个有关物质完全分离。

关键词 乙酰谷酰胺注射液 HPLC 有关物质

中图分类号：R977.9； R927.11 文献标识码：A 文章编号 ：1006-1533（2016）09-0071-05

Study on the relevant substance in aceglutamide injection

WANG Yan1*，QIAN Weigang1，LI Changwei1，XU Jinghua1，SUN Dongyan1，ZHOU Huana2，WANG Xuemin2**

（1. Shanghai Zhaohui Pharmaceutical Co. LTD.， Shanghai 201908， China；

2. Nanjing Zeheng Pharmaceutical Technology Development Co. LTD.， Nanjing 210046， China）

ABSTRACT Objective： To establish an HPLC method for determination of relevant substances in aceglutamide injection. Methods： HPLC was performed on a Sepax HP-C18 column with a mobile phase of 0.1% perchloric acid and methanol（99：1） at detection wavelength of 210 nm and column temperature of 25 ℃. Results： Six relevant substances were well separated. The specificity， linearity， limit of quantitation and detection， correction factor， system precision， solution stability and repeatability were conformed to the requirements of 2010 version of Chinese Pharmacopoeia. Conclusion： Aceglutamide can be completely separated with 6 relevant substances in aceglutamide injection by this method.

KEY WORDS aceglutamide injection； HPLC； relevant substance

乙酰谷酰胺为脑功能改善药，具有改善神经细胞代谢、维持神经应激机能及降低血氨的作用[1]。临床上主要用于脑外伤性昏迷、神经外科手术等引起的昏迷、瘫痪及智力减退、记忆力障碍等适应证的治疗[2-3]。乙酰谷酰胺注射液收载于中国药典2010版，采用自身对照色谱法检测有关物质[4]，该方法仅对最大单杂质及总杂质进行限度检查；《日本药典》16版XVI Official Monographs中乙酰谷酰胺铝有关物质检测采用的是杂质外标及峰面积归一化法，该方法对杂质2-acetamidoglutarimide及总杂质进行检测[5]，但未对其它已知杂质进行定性研究。本文参考中国药典2010版二部乙酰谷酰胺注射液有关物质检查方法和《日本药典》16版XVI Official Monographs乙酰谷酰胺铝有关物质检查方法，建立了乙酰谷酰胺注射液有关物质检测方法，通过对乙酰谷酰胺原料合成工艺及乙酰谷酰胺注射液长期留样有关物质进行分析，经与有关物质对照品比较，共定性研究了6个有关物质，为乙酰谷酰胺的生产及质量控制提供了重要的依据。

1 材料与方法

1.1 材料

高效液相色谱仪（日本岛津公司），含LC-20AT泵及SDP-20AT紫外检测器及HT-230A型柱温箱（日本岛津公司）。色谱柱为Sepax HP-C18（美国赛分科技有限公司，4.6 mm×250 mm，5 μm）。乙酰谷酰胺对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100859-200501）；乙酰谷酰胺注射液（111002，111003，111004，上海朝晖药业有限公司，规格：5 ml，0.25 g）；有关物质A（谷氨酸，中国食品药品检定研究院，批号：100023-198601）；有关物质B（L-谷氨酰胺，Dr. Ehrenstorfer Gmbh惠赠，批号：10408）；有关物质C（N-乙酰-D-谷氨酰胺，自制，批号：20130110）；有关物质D（焦谷氨酸，Council of EuropeEDQM，批号：004P51）；有关物质E（N-（2，6-二氧代-3-哌啶基）乙酰胺，自制，批号：20130120）；有关物质F（N-乙酰-L-谷氨酸，自制，批号：20120917）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为纯化水。

1.2 有关物质检测方法

参考中国药典2010版二部乙酰谷酰胺注射液有关物质检查方法和JP XVI Official Monographs乙酰谷酰胺铝有关物质检查方法，建立了HPLC方法测定乙酰谷酰胺注射液的有关物质。取本品，加流动相溶解并稀释制成每毫升中约含1 mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取1 ml，置100 ml量瓶中，加流动相稀释制成10 μg/ml的溶液，作为对照溶液；同法配置缺乙酰谷酰胺的空白辅料溶液；另精密称取乙酰谷酰胺与有关物质A、B、C、D、E、F对照品适量，加流动相制成0.2 mg·ml-1的溶液，作为对照品储备液；分别取乙酰谷酰胺及有关物质A、B、C、D、E和F对照品储备液适量，加流动相溶解并稀释成每1 ml中含有关物质A、B各10 μg，乙酰谷酰胺、有关物质C、D和F各5 μg，有关物质E 0.5 μg的溶液，作为系统适用性溶液，按相同的方法分别配制相同浓度的单个对照品溶液作有关物质定位溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以0.1%的高氯酸水溶液-甲醇（99∶1）为流动相；检测波长为210 nm；柱温25 ℃，进样量为20 μl。