金线莲组织培养快繁技术试验

汪佳秀 武艳艳 钟田坤

摘 要 目的：建立金线莲无菌繁殖体系。方法：以金线莲植株茎段为外植体，分析茎段不同位置、培养基、生长调节剂和添加物对不定芽增殖和幼苗生长的影响。结果：外植体以中间段茎节（不含顶芽和长根）为宜，一步成苗最佳培养基配方为MS培养基+IBA（吲哚乙酸），用量为10 mL/L，香蕉100 g/L，活性炭2 g/L，白砂糖30 g/L，琼脂4.2 g/L，pH值5.8；不定芽增殖最佳培养基为MS培养基+TDE，用量为0.1 mL/L，土豆汁100 g/L，白砂糖30 g/L，琼脂6 g/L，pH值5.8；壮苗生根最佳培养基为1/2MS，生长调节剂添加适宜量为6-BA（0～0.5 mg/L）+NAA（3.0～4.0 mg/L），香蕉（20.0%）对促进幼苗生长有利，活性炭（0.3%）具有一定的促进作用；试管苗移载适宜基质为丹麦泥炭土，成活率可达到96%。结论：合理利用金线莲组培快繁技术，建立无菌繁殖体系，能够实现金线莲幼苗的快速繁殖。

关键词 金线莲；不定芽诱导；壮苗培养

中图分类号：Q944.6 文献标志码：B 文章编号：1673-890X（2016）06-0-03

金线莲中富含氨基酸、抗衰老活性微量元素，药效价值较高，被视为珍惜名贵药材，备受青睐。但受自身生长特点等因素影响，金线莲在自然条件下萌发率和繁殖率较低，在药品市场一直供不应求[1]。基于这一现状，利用植物培养技术来提高金线莲繁殖速度，加大人工培养规模，对保护金线莲和稳定市场供应，均具有重要的现实意义。现将有关实验结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

无菌繁殖体系建立为江西金线莲野生种源，采集植株茎段，外植体以含顶芽茎段为主。

1.2 方法

1.2.1 一步成苗

1.2.1.1 无菌繁殖

取植株，去叶，先放入水中漂洗，再用流水冲洗，时间分别为5、30 min；以75%酒精浸湿，放入0.1%氯化汞溶液中，12 min后取出，用蒸馏水冲洗，取茎上段（即具茎尖）、中段和下段（即匍匐茎段），各1.5 cm，均带有节间，并分别接种于备好的培养基上。

1.2.1.2 最佳培养基配方

MS培养基+IBA（吲哚乙酸），用量为10 mL/L，香蕉100 g/L，活性炭2 g/L，白砂糖30 g/L，琼脂4.2 g/L，pH值5.8；培养条件为：温度（25±2）℃，光照时间和强度分别为12 h/d、1 800 lx左右[2]。

1.2.2 分步出瓶

1.2.2.1 不定芽诱导

通过单因素实验考察基本培养基对不定芽诱导的影响，大量元素减半（1/2MS），其他成分不变，各加入6-BA和NAA，用量分别为4.0 mg/L、1.0 mg/L；选取无菌健壮植株，做前期处理，接10个茎节，均重复3次，以MS为培养基，梯级加入细胞分裂素和生长素，培养期间定时观察不定芽生长情况，统计不定芽数，分析生长调节剂对不定芽诱导的影响；繁殖最适培养基为：MS培养基+TDE，用量为0.1 mL/L，土豆汁100 g/L，白砂糖30 g/L，琼脂6 g/L，pH值5.8。

1.2.2.2 壮苗培养

以1/2MS为基本培养基，6-BA和NAA分别进行梯级处理，前者设1～5 mg/L，后者设0.5～1.5 mg/L，共计15个处理，分析生长调节剂对幼苗生长和发根的影响；另加6-BA（0.5 mg/L）和NAA（2.0 mg/L），考察天然有机物与活性炭对幼苗生长的影响；生根最适合培养基为：MS培养基+6-BA，用量为0.1 mL/L，IBA（吲哚乙酸）5 mL/L，香蕉提取液50 g/L，活性炭2 g/L，白砂糖30 g/L，琼脂4.2 g/L，pH值5.8；接入将增殖培养无根幼苗，高为3 cm左右，具在3～4节间，有1～2片，接种无根幼苗10株，重复3次，定期观察生长情况。

1.2.2.3 移栽

选苗，高为7 cm左右，茎基直径2 mm左右，丛生根2～3条，炼苗后洗净培养基，移入装有不同基质土盆中；移栽前，基质均用45%多菌灵可湿性粉剂，均以800倍溶液浇透消毒，具体条件为：阴棚遮阴度为80%，空气相对湿度为85%左右；移栽3个月后，记录成活株数[3]。

2 结果与分析

2.1 无菌繁殖体系建立和不定芽诱导影响分析

外植体茎段分化程度会影响到诱导结果，金线莲茎段外植体不定芽诱导显示，外植体上段的接种数共75段，萌动率为100.0%，不定芽数为47个，平均芽增值率为0.60倍，芽体生长势旺且芽数少；外植体中段的接种数共166段，萌动率为100.0%，不定芽数为680个，平均芽增值率为4.03倍，芽体芽数较多且发育良好；外植体下段的接种数共94段，萌动率为85.2%，不定芽数为138个，平均芽增值率为1.71倍，芽体芽数较少且生长缓慢。基本培养基能够萌发出不定芽体，但对诱导产生的影响较大，结果显示，MS培养基芽体生长状况最佳，其次1/2MS，与1/3MS比较差异较为明显，表明MS和1/2MS培养基适合作为金线莲经段不定芽诱导的基本培养基，详见表1。

本次实验所用生长调节剂为6-BA、KT和NAA，处理结果显示：6-BA用量为1.0 mg/L、2.0 mg/L、4.0 mg/L和6.0 mg/L，平均芽增长率分别为2.72倍、3.28倍、4.02倍、3.22倍；芽体生长变化趋势为色嫩绿且芽较弱转为色较率且芽较壮；KT用量为2.0 mg/L和4.0 mg/L，平均芽增长率分別为2.25倍、2.58倍，芽体生长状况为色黄白且芽较弱；以6-BA 4.0 mg/L为准，加NAA，用量为0.5 mg/L、1.0 mg/L、1.5 mg/L，平均芽增长率分别为5.36倍、4.58倍、4.16倍，芽体生长状况为色浓绿且芽粗壮。从中能够得出，生长调节剂添加量对金线莲不定芽增殖的影响较大，且不同生长调节剂所产生的影响存在差异，在相同添加量下，6-BA的增值率明显高于KT，表明6-BA更适合金线莲茎节不定芽的诱导，添加适宜量为4.0 mg/L；NAA对金线莲不定芽的诱导具有一定的促进作用，6-BA（4.0 mg/L）+NAA（0.5 mg/L），芽体生长状况即能够达到改善。

2.2 壮苗生根培养和移载成活影响分析

在金线壮苗生根培养中，6-BA和NAA添加量不同，壮苗净增叶、发根数和鲜质量净增量也存在一定差异。多次处理结果显示，6-BA（0.5 mg/L）+NAA（1.0 mg/L），平均净增叶为1.8片，发根数为2.2条，鲜质量净增量为539.5 mg；6-BA（1.0 mg/L）+NAA（1.0 mg/L），平均净增叶为1.3片，发根数为2.2条，鲜质量净增量为525.8 mg；6-BA（1.5 mg/L）+NAA（1.0 mg/L），平均净增叶为1.1片，发根数为1.4条，鲜质量净增量为450.2 mg；6-BA（0.5 mg/L）+NAA（2.0 mg/L），平均净增叶为3.2片，发根数为2.6条，鲜质量净增量为588.2 mg；6-BA（1.0 mg/L）+NAA（2.0 mg/L），平均净增叶为2.1片，发根数为2.8条，鲜质量净增量为583.4 mg；6-BA（1.5 mg/L）+NAA（2.0 mg/L），平均净增叶为1.6片，发根数为1.7条，鲜质量净增量为466.2 mg；6-BA（0.5 mg/L）+NAA（3.0 mg/L），平均净增叶为4.3片，发根数为3.7条，鲜质量净增量为700.6 mg；6-BA（1.0 mg/L）+NAA（3.0mg/L），平均净增叶为3.3片，发根数为3.0条，鲜质量净增量为622.8 mg；6-BA（3.0 mg/L）+NAA（1.5 mg/L），平均净增叶为3.0片，发根数为2.2条，鲜质量净增量为524.6 mg；6-BA（0.5 mg/L）+NAA（4.0 mg/L），平均净增叶为3.7片，发根数为3.3条，鲜质量净增量为662.8 mg；6-BA（1.0 mg/L）+NAA（4.0 mg/L），平均净增叶为2.6片，发根数为2.6条，鲜质量净增量为584.8 mg；6-BA（1.5 mg/L）+NAA（4.0 mg/L），平均净增叶为2.3片，发根数为2.4条，鲜质量净增量为535.8 mg。综合比较来看，在金线壮苗培养中，6-BA适宜添加量为0～0.5 mg/L，NAA适宜添加量为3.0～4.0 mg/L。

不同添加物你对金线莲幼苗生长的影响存在一定的差异，结果显示，香蕉對促进幼苗生长有利，土豆汁对促进幼苗生长不利，活性炭具有一定的促进作用，详见表2。本次实验种植基质以丹麦泥炭土为基质，试管苗移载成活率达到96%。

3 讨论

金线莲茎段不同部位、培养基、生长调节剂和添加物对不定芽增殖、幼苗生长均会产生一定的影响，有必要建立无菌繁殖体系，确定金线莲幼苗快速繁殖的条件[4]。本次实验结果显示，外植体以中间段茎节（不含顶芽和长根）为宜，一步成苗最佳培养基配方为MS培养基+IBA（吲哚乙酸），用量为10 mL/L，香蕉100g/L，活性炭2 g/L，白砂糖30 g/L，琼脂4.2 g/L，pH值5.8；不定芽增殖最佳培养基为MS，生长调节剂添加适宜量为6-BA（4.0 mg/L）+NAA（0.5 mg/L）；壮苗生根最佳培养基为1/2MS，生长调节剂添加适宜量为6-BA（0～0.5 mg/L）+NAA（3.0～4.0 mg/L），香蕉（20.0%）对促进幼苗生长有利，活性炭（0.3%）具有一定的促进作用；试管苗移载适宜基质为丹麦泥炭土，成活率可达到96%。组织培养所获得的金线莲植株与野生金线莲生长环境不同，在药用成分和药理活性方面可能存在一定的差异，这一问题还有待进一步研究。

参考文献

[1]周锐，孔琼，薛春丽，等.屏边野生金线莲组培快繁技术研究[J].云南农业科技，2014，10（4）：7-10.

[2]周锦业，丁国昌，何荆洲，等.不同光质对金线莲组培苗叶绿素含量及叶绿素荧光参数的影响[J].农学学报，2015，11（5）：67-72.

[3]袁小铃，王建栋，王思雨，等.金线莲组培快繁体系优化及多糖含量测定[J].浙江农业科学，2015，12（7）：983-985.

[4]魏翠华，秦建彬，谢宇，等.应用正交设计法优选台湾金线莲快繁培养基[J].中国农学通报，2013，10（4）：114-117.

（责任编辑：刘昀）