高效液相色谱测定中药夏枯草活性成分含量

汤国茂（广州市增城区疾病防预控制中心药品检验科　广州　510000）



高效液相色谱测定中药夏枯草活性成分含量

汤国茂（广州市增城区疾病防预控制中心药品检验科广州510000）

摘要：目的：分析高效液相色谱（HPLC）测定中药夏枯草活性成分含量。方法：本次研究采用岛津SPD-15C型号的高效液相色谱仪、柱温箱、自动进样器等进行实验；色谱柱选择Phenomenex C18柱，流速设置为1mL/min；流动相为乙腈以及0.01%磷酸溶液，检测波长设置为210nm。结果：本次研究中，熊果酸回收率均值为98.65，RSD为3.98；齐墩果酸回收率均值为92.68，RSD为4.23；计算质量分数，熊果酸为3.98～8.26mg·g-1，齐墩果酸为0.256～0.598mg·g-1。结论：HPLC应用于中药夏枯草活性成分测定，操作方便，而且快速，可将其作为成分测定的有效措施。

关键词：高效液相色谱中药夏枯草活性成分

中药属于我国宝贵财富，其来源、成分等方面十分复杂，其中大部分来自矿物、植物等，每种中药中含有复杂的多种成分，例如，人参中含有维生素、有机酸、肽类等成分[1]。可见，探究中药成分对于充分发挥其作用具有现实意义[2]。高效液相色谱（HPLC），即通常所说的“近代柱色谱”，具有极易回收、降低样品消耗量、高速、高压等特点[3]。随着色谱手段日渐完善，广泛应用在中药探究领域，尤其是质量控制领域。为此，本次研究HPLC测定中药夏枯草活性成分含量，现详细报道如下：

1　实验仪器以及试剂

1.1实验仪器：本次实验采用岛津SPD-15C型号的高效液相色谱仪。其中，泵技术的具体参数为：40MPa最大压力，0.3%精度，0.001～10.000mL/min流量范围等。此外，本次实验还需选取赛多利斯BT125D电子天平（可读性0.01mg）、KQ3200E超声波清洗器（温度：RT-80℃；频率：40KHZ）、柱温箱、自动进样器以及真空脱气机等仪器[4]。

1.2实验试剂：本次实验采用齐墩果酸（包装规格：20mg，产品编号：MB6817，CAS号码：508-02-1）、咖啡酸（CAS号：331-39-5，供应商：Solarbio，保存条件：2℃～8℃，品牌：Solarbio）、熊果酸（供应商：成都瑞芬思，品牌：瑞芬思，储存环境：密封、避光、冷藏，CAS号：77-52-1）[5]。此外，本次实验还用到迷迭香酸（品牌：Solarbio，规格：20mg/支，存储温度：4℃，供应商：Solarbio，CAS号：20283-92-5，保质期：1年以上）。本次研究中选取的夏枯草来源于安徽、浙江、河南、山西、江苏等省份[6]。其中，除了江苏的药材是野生的，其余全部是市面销售药材，而且经过我科中药师的鉴定。实验中药材的产地以及批号信息详见表1。其中，安徽AH1、AH2、AH3、AH4这四个样品的批号分别是150258、150265、150264、150374；浙江ZJ1、ZJ2、ZJ3这三个样品的批号分别是150665、150646、150641；河南HN1、HN2两个样品的批号是150714、150734；山西SX1、SX2这两个样品批号分别为150896、150875；江苏JS1样品的批号为150452。

表1　药材的产地以及批号

2　结果

2.1色谱条件：本次研究中色谱柱选择Phenomenex C18柱，详细的参数信息为4.6mm×150mm，5μm；流速设置为1mL/min；流动相为乙腈以及0.01%的磷酸溶液，比例为27∶73；检测波长设置为210nm；柱温设置为30℃。此外，研究中通过二元梯度对药材进行洗脱，具体的梯度信息如下：①Time/min为0～20，Mobilephase（A/%）为95-80，Mobile phase（B/%）为5-20；②Time/min 为20～40，Mobilephase（A/%）为80-40，Mobile phase（B/%）为20-60；③Time/min为40～60；Mobilephase（A/%）为40 -5，Mobile phase（B/%）为60-95；④Time/min为60～75；Mobilephase （A/%）为5；Mobile phase（B/%）为95。

2.2制备对照样品以及供试品：首先，通过精密仪器取0.0153g熊果酸以及0.0115g迷迭香酸，而且将其置于容量为10mL的两个瓶内；通过精密仪器取0.0112g齐墩果酸以及0.0025g咖啡酸，将其置于容量为50mL的两个瓶内。其次，将上述各种试剂都通过甲醇溶液稀释，而且摇晃瓶子，使其达到均匀状态，得到的溶液分别为1.59g/L、0.212g/L、1.21g/L、0.051g/L。最后，将上述溶液都放置在温度为4℃的冰箱中保存。对于供试品，可通过精密仪器取0.01g夏枯草粉末放入烧瓶，然后缓慢添加浓度为75%的20mL乙醇溶液，然后经过称重、超声、静置、补足减失的重量等环节，通过滤膜对其进行过滤，保存续滤液，即供试品。

2.3分析线性关系：本次研究中，从各个对照品种，取熊果酸、齐墩果酸、迷迭香酸、咖啡酸分别取900μL、300μL、150μL、60μL，然后缓慢添加甲醇溶液，使其达到刻度。横坐标为对照品进样量，设为X，纵坐标为峰面积积分值，设为Y，利用其进行工作曲线的制备。经过线性分析，各个成分线性关系详见表2。其中，熊果酸曲线为y=19.52x+2.47，R2=0.9998，范围为4.75～158；齐墩果酸曲线为y=21.62x+5.74，R2=0.9997，范围为0.58～19.87；迷迭香酸曲线为y=47.65x+6.34，R2=0.9999，范围为3.45～108；咖啡酸曲线为y=169.54x+6.74，R2=0.9854，范围为0.16～4.78。

表2　各个成分线性关系

2.4精密度、稳定性等试验：①稳定性。经过试验，测量四个成分的峰面积，RSD结果表明，熊果酸为2.10%，齐墩果酸为4.21%，迷迭香酸为1.45%，咖啡酸为0.92%，说明全部供试品在一定时间内处于十分稳定的状态。②精密度：经过试验，测量四个成分的峰面积，RSD结果表明，熊果酸为1.45%，齐墩果酸为3.36%，迷迭香酸为0.87%，咖啡酸为0.81%，说明全部仪器性能处于良好状态。

2.5回收率：从已经知道含量的样品中利用精密称量仪器称取0.051g，将其放入容量为25mL的量瓶，然后在其中加入适量的四种对照品溶液，依据试验品溶液的测定项下进行处理，对回收率进行计算。熊果酸回收率均值为98.65，RSD为3.98；齐墩果酸回收率均值为92.68，RSD为4.23；迷迭香酸回收率均值为96.24，RSD为4.21；咖啡酸回收率均值为108.49，RSD为2.98。此外，计算质量分数，熊果酸为3.98～8.26mg·g-1，齐墩果酸为0.256～0.598mg·g-1，迷迭香酸为0.97～2.68mg·g-1，咖啡酸为0.038～0.106mg·g-1。

3　讨论

夏枯草属于夏枯草植物的果穗，通常在夏天成熟，具有较高的药用价值。因此，探究其成分显得尤为重要。本次研究中，HPLC应用于中药夏枯草活性成分测定，测定结果表明，迷迭香酸为0.97～2.68mg·g-1，咖啡酸为0.038～0.106mg·g-1。因此，HPLC具有快速、极易操作等优点，而且可有效测定各成分，具有较高的应用价值。

参考文献

[1]杨思敏，陈瑞战，董航，等.高效液相色谱-质谱联用快速筛选并鉴定黄芩甲醇提取物中抗氧化活性成分[J].分析化学，2012，7 （6）：888-892.

[2]刘明钰，李敏，陈娟娟，等.2，2-二苯基-1-苦肼基-高效液相色谱法快速筛选亚麻籽抗氧化活性成分[J].分析化学，2015，4（2）：245-250.

[3]梁慧，朱伟健，袁智泉，等.超高效液相色谱-串联质谱法对癍痧凉茶中18种活性成分的定量分析[J].分析测试学报，2015，9 （5）：558-563，569.

[4]李双花，冯思，陈茵佳，等.高效液相色谱法测定糖化酶中葡萄糖苷转移酶的活性[J].色谱，2014，9（5）：539-542.

[5]张清峰，付莹娟，陈继光，等.高效液相色谱法同时测定虎杖中五种活性成分[J].现代食品科技，2014，6（3）：216-219.

[6]邢航，张媛婷，鲁雪峰，等.高效液相色谱-二苯基三硝基苯肼在线检测葡萄酒中抗氧化活性成分[J].中国实验方剂学杂志，2013，7（21）：127-131.

中图分类号：R284.1

文献标识码：A

文章编号：1672-8351（2016）04-0004-02