高效分子排阻色谱法测定头孢美唑钠聚合物含量

刘丽莉

哈药集团制药总厂 150000

高效分子排阻色谱法测定头孢美唑钠聚合物含量

刘丽莉

哈药集团制药总厂 150000

目的：使用高效分子排阻色谱法对头孢美唑钠聚合物中的含量进行测定。方法：使用高效分子排阻色谱法，将实验过后的结果使用色谱柱的对比方法进行比较，使用盐酸缓冲液中的磷酸氢儿钠与磷酸二氢钠、乙腈、为实验数据参考上的流动相；在实验过程中对波长进行检测上的处理，实验人员还要对实验溶液上的流速与波长进行考虑与步骤上的安排。结果：这种实验方法的使用，使得孢美唑钠峰与聚合物之间的分离效果达到了最佳的状态。结论：并且在一定的浓度设置下峰面积可以与实验溶液呈现出良好的线性关系。结论：这种实验方法在使用的过程中收获了较好的实验效果，与此同时，这种实验方法操作简单，结果准确可靠，值得实验人员对其大范围的推广。

头孢美唑钠；聚合物；TSKgelG2000SWXL凝胶色谱柱

头孢美挫钠是一种抗生素在临床使用过程中具有良好的抗菌消炎效果，但是，这种药物在使用过程中经常发生复发型过敏反应，这种过敏源并不是抗生素本身导致的，导致出现这种不良反应的原因是头孢美唑钠药品中含有的高分子聚合物。文章通过葡萄糖凝胶柱法对这种药品进行聚合物含量的测定，在实验过程中使用了两种分析方法，通过对比实验以后发现，采用高效分子排阻色谱法可以收获较好的实验结果，并能满足数据上的准确性，这种方法也更为准确灵敏。

1 仪器与试药

目前，头孢美唑钠聚合物的测定未收入国内外药典，参照文献方法进行试验，结果表明，葡聚糖凝胶色谱柱的柱效低，分离效果差(所有聚合物为一个峰，该峰与主峰未能达到基线分离)，峰型拖尾，分析时间长等。而通过优化色谱条件，采用高效分子排阻色谱法(以下简称：HPSEC)很好地解决了这一问题。本文采用HPSEC法对头孢美唑钠的聚合物进行测定，该色谱柱柱效高(柱效上万)，主峰和聚合物峰峰型对称，分离效果好(该色谱柱可分离出几个聚合物峰且聚合物峰与主峰能完全基线分离)。该方法更为准确、灵敏，简便，是β-内酰胺抗生素聚合物测定的必然趋势。

高效液相色谱仪：ShimadzuLC-20AT泵、ShimadzuSPD-20A型紫外检测器、ShimadzuCTO-20A柱温箱；Agilent1200泵、Agilent1200二极管阵列检测器。头孢美唑钠样品(批号：120701、120702、120703)，由四川抗菌素工业研究所提供；头孢美唑钠对照品(批号：1097782)，由美国Rockville公司提供；乙睛为色谱纯；水为乐百氏纯净水；其它试剂均为分析纯。

2 HPSEC法的方法与结果

2.1 色谱条件

用TSKgelG2000SWXL凝胶色谱柱(7.8mm×30cm,5μm)(TOSOH公司)，以pH7.0的5mmo/L磷酸盐缓冲液[5mmol/L磷酸氢二钠-5mmol/L磷酸二氢钠(61:39)，V/V]-乙腈(90:10)为流动相，检测波长为 254nm，流速约每 0.6mL/min，柱温为 25℃。理论板数按头孢美唑钠峰计算不低于3000，头孢美唑钠峰与相邻聚合物峰的分离度应符合要求。

2.2 溶液的配制及测定2.2.1供试品溶液制备

取头孢美唑钠约50mg，精密称定，置100mL容量瓶中，加水溶解并定量稀释制成每1mL中含0.5mg的溶液，摇匀即得。

2.2.2 对照溶液制备

取头孢美唑钠对照品约25mg，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含5μg的溶液。

2.2.3 测定方法

按2.1项下色谱条件，精密量取供试品溶液和对照溶液各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算聚合物的含量。供试品溶液色谱图请见图 1(主峰前的峰为聚合物峰)，头孢美唑钠峰与相邻聚合物峰均能达到基线分离。

2.3 聚合物测定的方法学验证

取本品约50mg，置100mL容量瓶中，共6份分别按以下条件实验：(1)未降解样品；(2)高温破坏样：于 60℃下放置 10d，冷却；(3)酸破坏样：加0.1mol/LHCl1mL，放置0.5h，取0.1mol/LNaOH溶液1mL中和；(4)碱破坏样品：加 0.1mol/LNaOH溶液 1mL，放置 1min，取0.1mol/LHCL溶液1mL中和；(5)强光破坏样：强光(4500±500)照10d；(6)氧化破坏样：加入3%H2O21mL,放置3h。取上述样品依法操作，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取上述条件下的样品溶液各20μL，按2.1项下的色谱条件进行分析，记录色谱图。试验结果表明：本品对酸碱很不稳定，对氧化、高温、光照不稳定。但主峰与以上破坏产生的聚合物峰均能获得良好分离。可见，所建聚合物检查法对样品中的聚合物包括强破坏条件下产生的聚合物峰均有良好的分离，因此，本聚合物检查法具有很好的专属性。

图1 头孢美唑钠HPSEC色谱图

3 讨论

3.1 聚合物的定位

在实验过程中采用葡萄糖凝胶色谱柱检测方法可以对大分子化合物葡萄糖进行定位上的分析处理，在分析过程中，两种凝胶色谱柱都可以对药品中的大分子化合含量进行测定，葡聚糖凝胶色谱柱检测方法在实验过程中要比头孢美挫钠主峰出峰早。实验人员对头孢美挫钠的溶液进行收集处理以后，可以采用葡聚糖柠胶色谱柱法对对实验结果进行分析处理。处理过后的数据结果表明，收集到的供试液会在聚合物位置出峰。

此时实验人员可以对头孢美锉钠溶液进行提取，葡聚糖凝胶色谱柱法可以对头孢美唑钠的峰前溶液进行收集，这样处理的原因是防止头孢美唑钠溶液在放置过程中与空气发生相应的化学反应导致测出的结果失去原有的精准性。收集到的供试液实验人员可以采取凝胶色谱柱法进行数据上的分析，这样处理以后，实验人员可以在实验结果反应的过程中发现供试液会在图一中的主峰前出峰，这些研究上的结果表明，头孢美唑钠聚合物通过凝胶色谱法的测定以后，测定出的主峰在峰前的锋面呈现都是聚合物上的锋面展示，而主峰后的锋面是小分子杂质上的锋面展示。

3.2 不同凝胶色谱柱的对比

相关研究文献中对于头孢美纳挫的元素确定，主要的实验方法是葡萄糖凝胶柱法。这种实验方法可以对头孢美纳挫中的聚合物进行质量分数上的测定，在方法实验过程中，葡萄糖凝胶会作为实验步骤中的填充剂。实验人员需要使用玻璃内径对柱长的中低压色谱项柱进行分离处理。研究结果表明，头孢美挫钠的色谱柱在实验数据中出现了柱效低，浓度高的情况。同时，这种情况的发生，也直接导致了实验峰型出现了拖尾。

这种实验方法在使用过程中不仅会受到实验环境的影响，实验人员在对数据结果进行分析时，所需要的时间也较多。在对溶液进行分离处理时，聚合物由于在实验过程中只能使用一个峰面，所以，分离的效果往往达不到实验人员所期望的标准。为了让分离效果得到相应的提升，实验人员可以采用高效凝胶色谱柱开展实验上的步骤，这种实验方法可以让色谱柱的柱效得到相应的提升，分离效果也更好。实验过后得出的实验数据较为准确，并且实验人员开展实验步骤时，操作的步骤基本没有发生任何的调整，实验方法简单有效。所以，实验人员在开展实验研究时，应该尽量选择TSKgel凝胶色谱柱的检测方法。

[1]丁玉莲,杜文革,蔡蓉,黄晓军.凝胶色谱法测定注射用头孢美唑钠的聚合物[J].广东药学院学报.2012(05)

[2]江晓玲,刘昆,邓俊丰,李波.头孢菌素类抗生素中高分子杂质的研究进展[J].国外医药(抗生素分册).2007(06)

[3]袁雯玮.高分子聚合物研究与中国药典 2005年版β-内酰胺类抗生素高分子聚合物修订情况及操作要点[J].中国抗生素杂志.2005(12)

R323.1

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