芡实中直链淀粉的测定研究*
2016-05-15崔锦良金秋萍方志成郑丽卿阙小峰司文会
崔锦良,金秋萍,方志成,郑丽卿,阙小峰,司文会
(1.苏州泰事达检测技术有限公司,江苏苏州 215002;2.苏州农业职业技术学院,江苏苏州 215008)
芡实中直链淀粉的测定研究*
崔锦良1,金秋萍1,方志成1,郑丽卿1,阙小峰2,司文会2
(1.苏州泰事达检测技术有限公司,江苏苏州 215002;2.苏州农业职业技术学院,江苏苏州 215008)
文章采用双波长分光光度法测定芡实中直链淀粉。该试验方法供试液直链淀粉含量在0~3 mg之间线性良好,精密度试验相对标准偏差为1.62%,回收率在92.0%~103.0%之间。
双波长分光光度法 芡实 直链淀粉
芡实是睡莲科芡属植物芡的成熟果仁,别名为鸡头米,鸡头苞,鸡头莲,刺莲藕[1]。原产于东南亚,我国自古就有栽培,分布于湖泊,塘滩地。芡实种子内的种仁可供食用,其含有丰富的淀粉、脂肪、钙、磷、铁、硫胺素、核黄素、尼克酸、抗坏血酸和微量胡萝卜素[2]。
淀粉不是单纯的分子,而是一种混合物,由2种不同类型的淀粉组成,一种是直链淀粉,一种是支链淀粉[3]。淀粉是芡实中含量最高的组分,其直链淀粉和支链淀粉含量比例对芡实品质、口感具有决定性影响。
近年来科研工作者着重研究了芡实的育种和栽培技术,芡实的化学成分,蛋白质的氨基酸组成,以及芡实的药学价值和食用方法。对芡实中直链淀粉和支链淀粉的研究较少。
文章对芡实中直链淀粉测定方法进行了研究试验,根据直链淀粉遇碘形成纯蓝色复合物基团,支链淀粉遇碘形成紫红色复合物基团的显色特征,运用双波长分光光度法进行测定直链淀粉的含量[4]。该试验芡实样品选自苏州车坊水八仙种植基地和苏州阳澄湖芡实种植基地。
1 试验部分
1.1 主要试剂与仪器
直链淀粉标准品;氢氧化钾:分析纯;盐酸:分析纯;碘化钾:分析纯;碘:分析纯。
碘试剂:称取2 g的碘化钾,用少量蒸馏水溶解,再加入0.2 g的碘振荡溶解并用蒸馏水定容至100 ml。
氢氧化钾溶液(0.5 mol/L):称取2.805 5 g的氢氧化钾,加蒸馏水溶解,并定容至100 ml。
盐酸溶液(0.1 mol/L):取8.5 ml的浓盐酸注入蒸馏水中,并定容至1 000 ml。
直链淀粉标准液(0.5 mg/ml):称取直链淀粉50 mg于100 ml容量瓶,加入氢氧化钾溶液10 ml,用封口膜封住容量瓶口,置于沸水浴加热,不时地振摇,30 min后取出,冷却,用蒸馏水定容至100 ml。
TU-1810紫外可见分光光度计;pHS-25 pH计;HH-2数显恒温水浴锅;XW-80A漩涡混匀器。
1.2 试验方法
1.2.1 直链淀粉标准溶液的图谱绘制
取5 ml的直链淀粉标准液于100 ml烧杯中,加入50 ml的蒸馏水,用盐酸溶液调pH至3.5左右,混匀,加入1 ml的碘试剂,用蒸馏水定容至100 ml。用1 cm的比色皿在400~800 nm波长下扫描,绘制图谱。
1.2.2 直链淀粉标准曲线的绘制
分别取直链淀粉标准液(0.5 mg/ml)0,1,2,3,5,6 ml于100 ml比色管中,加入50 ml的蒸馏水,用盐酸溶液调pH至3.5左右,混匀,加入1 ml的碘试剂,用蒸馏水定容至100 ml。用1 cm的比色皿在535 nm和570 nm波长下测定吸光度,以ΔA=A570-A535为纵坐标,直链淀粉含量为横坐标,绘制直链淀粉标准曲线。
1.2.3 样品中直链淀粉测定
取匀质的样品100 mg左右于100 ml烧杯中,加入10 ml 氢氧化钾溶液,用封口膜封口,置于沸水浴加热,不时振摇,30 min后取出,冷却,用蒸馏水定容至100 ml。过滤,取滤液待用。分别取2份15 ml的滤液于100 ml的比色管中,1份加入40 ml的蒸馏水,用盐酸溶液调pH至3.5左右,加入1 ml的碘试剂,用蒸馏水定容至100 ml,混匀,静置15 min,待测。
另1份加入40 ml蒸馏水,用盐酸溶液调pH至3.5左右,加蒸馏水定容至100 ml,混匀,静置15 min,待测。以零管为参比,用1 cm比色皿测定检测波长下的吸光度值。
2 结果与讨论
2.1 测定波长的确定
直链淀粉与碘作用产生纯蓝色基团,支链淀粉与碘作用生成紫红色基因。根据双波长比色原理,若试样溶液在2个波长处均有吸收,则2个波长处的吸光度差值与溶液中待测物质的浓度成正比。取直链淀粉和支链淀粉扫描液在400~800 nm波长下扫描,然后在同一坐标中绘制,见图1。根据上述原理和扫描的图谱,确定直链淀粉的测定双波长为535 nm和570 nm。
图1 直链淀粉和支链淀粉扫描图谱
图2 直链淀粉标准曲线
表1 直链淀粉含量与吸光度测定数据
表2 直链淀粉精密度测定数据结果
2.2 直链淀粉标准曲线绘制
以零管为参比,采用双波长法测定535 nm和570 nm下的吸光度。测定数据如表1。以直链淀粉含量为横坐标,以ΔA=A570-A535为纵坐标,绘制标准曲线如图2。根据线性回归,所得曲线为ΔA=0.023 4 x+0.001,相关系数R2=0.999 7,结果表明该试验具有良好的线性。
2.3 精密度试验
分别取直链淀粉标准液(0.5 mg/ml)5 ml,加入50 ml的蒸馏水,用盐酸溶液调pH至3.5左右,混匀,加入1 ml的碘试剂,用蒸馏水定容至100 ml。用1 cm的比色皿连续测定10次,结果表明,直链淀粉含量相对标准偏差1.62%。测定数据结果见表2。
表3 样品中直链淀粉加标回收率试验结果
2.4 回收率试验
在芡实样品中分别加入不同量的直链淀粉标准溶液,按照该试验方法来测定样品加标回收率,测试结果见表3。
结果表明,直链淀粉加标回收率在92.0%~103.0%,该方法具有较好的准确性。
2.5 结论
该试验采用双波长分光光度法测定芡实中直链淀粉含量,供试液中直链淀粉在0~3 mg之间线性关系良好,精密度试验相对标准偏差1.62%,回收率在92.0%~103.0%之间。结果表明该试验方法可操作性强,测定结果准确。
[1] 赵有为.中国水生蔬菜.北京:中国农业出版社,1999
[2] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志 第二十七卷.北京:科学出版社,1976
[3] 孙成斌.直链淀粉与支链淀粉的差异.黔南民族师范学院学报,2000,(2)
[4] GB 7648-1987,水稻、玉米、谷子籽粒直链淀粉测定法
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