贫血程度对多发性骨髓瘤患者免疫功能和生活质量的影响

傅爱林，沈刚，沈文香，汪小葛

(江苏大学附属昆山医院，江苏昆山215300)

贫血程度对多发性骨髓瘤患者免疫功能和生活质量的影响

傅爱林，沈刚，沈文香，汪小葛

(江苏大学附属昆山医院，江苏昆山215300)

目的 探讨贫血程度对多发性骨髓瘤(MM)患者免疫功能及生活质量的影响。方法 选择合并贫血的MM患者95例，将其按照贫血程度分为轻症组42例(Hb为90～110 g/L)、中症组28例(Hb 61～89 g/L)、重症组25例(Hb≤60 g/L)，以同期体检健康者40例作为对照组。比较各组Th1/Th2、T淋巴细胞亚群比例(CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)、B淋巴细胞比例(CD19+)、B淋巴细胞亚群比例(CD19+CD20+CD27-、CD19+CD20+CD27+和CD19+CD38+)、血清免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM和IgE)和补体(C3、C4)水平。采用KPS功能状态评分评价各组生活质量。结果 与对照组比较，轻症组、中症组、重症组Th1/Th2、CD4+/CD8+、CD19+CD38+比例及血清IgG、IgA水平均降低，CD8+比例及血清C3、C4水平均升高(P均<0.05)。与轻症组比较，中症组和重症组CD19+比例均降低，但重症组降低更明显(P均<0.05)。与轻症组和中症组比较，重症组Th1/Th2、CD4+/CD8+均降低，CD8+比例均升高(P均<0.05)。与对照组和轻症组比较，中症组和重症组血清IgM水平均降低(P均<0.05)。各组CD3+、CD4+、CD19+CD20+CD27-、CD19+CD20+CD27+比例及血清IgE水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。对照组、轻症组、中症组、重症组KPS功能状态评分分别为100、(62±12)、(45±11)、(31±9)分，两两比较P均<0.05。结论 贫血越严重，MM患者的免疫功能紊乱越严重，生活质量越差。

多发性骨髓瘤；贫血；体液免疫；细胞免疫；生活质量

多发性骨髓瘤(MM)是一种源于B细胞，以产生免疫球蛋白的浆细胞克隆性增生为特征的恶性肿瘤，其发病率占恶性血液疾病的10%左右，目前仍无根治方法[1，2]。MM患者存在不同程度的细胞免疫和体液免疫紊乱。贫血是MM的常见并发症，占初诊患者的60%～80%，可影响治疗效果及患者预后[3]。临床上关于贫血程度对MM患者免疫功能及生活质量影响的研究较少，为此我们进行了如下研究。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2005年3月～2015年6月我院收治合并贫血的MM患者95例，男51例、女44例，年龄37～84(62.2±7.5)岁。患者均符合《中国多发性骨髓瘤诊治指南》[4]中的诊断标准。排除合并其他肿瘤者、合并严重心肝肾功能不全者。将MM患者按照贫血程度分为轻症组42例(Hb 90～110 g/L)、中症组28例(Hb 61～89 g/L)、重症组25例((Hb≤60 g/L)。轻症组男22例、女20例，年龄(60.5±9.3)岁；中症组男15例、女13例，年龄(61.4±8.1)岁；重症组男14例、女11例，年龄(63.8±9.8)岁。选择同期本院体检健康者40例作为对照组，男20例、女20例，年龄36～85(61.8±10.4)岁。各组性别、年龄均具有可比性。

1.2 免疫指标检测 采集各组清晨空腹静脉血10 mL，分成两份加入到真空采血管中。一份加入乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)抗凝，置于4 ℃条件下，用于T、B淋巴细胞检测。另一份置于37 ℃温箱中1 h，然后置于4 ℃冰箱过夜，3 000 r/min离心10 min，收集血清置于4 ℃条件下，用于免疫球蛋白及补体检测。①Th1/Th2：采用Elabscience公司提供的ELISA试剂盒检测各组血清IFN-γ和IL-10，以IFN-γ代表Th1、IL-10代表Th2，计算Th1/Th2。②T淋巴细胞亚群比例：取50 μL抗凝血与20 μL CD3+、CD4+和CD8+抗体混匀后在室温避光孵育15 min，在收样前加入1.5 mL红细胞裂解液，室温下避光孵育15 min，1 500 r/min离心5 min，弃上清液后加入PBS清洗一次，用PBS重悬。采用流式细胞仪分析总T细胞CD3+、TH细胞CD4+和Tc细胞CD8+比例，计算CD4+/CD8+。③B淋巴细胞及其亚群比例：取100 μL抗凝血，加入20 μL FITC标记的鼠抗人CD19单克隆抗体，同型阴性对照IgG-FITC及PE标记的鼠抗人CD25单克隆抗体、同型阴性对照IgG-PE，4 ℃条件下孵育30 min，加入红细胞裂解液，1 000 r/min离心10 min，弃上清，用PBS重悬，上流式细胞仪检测CD19+比例，以此表示B淋巴细胞比例。取100 μL抗凝血，分别加入ECD-CD19、PECD20、FITC-CD27、PE-CD38以及同型阴性对照，反应后采用流式细胞仪检测B淋巴细胞亚群比例，即CD19+CD20+CD27-为初始B细胞、CD19+CD20+CD27+为记忆性B细胞和CD19+CD38+为抗体分泌细胞。④血清免疫球蛋白及补体水平：采用速率散射比浊法检测血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM和IgE，采用ELISA法检测血清补体C3、C4，试剂盒均由美国Beckman公司提供。

1.3 生活质量评价 采用KPS功能状态评分标准评价各组生活质量。总分100分，得分越低，说明生活质量越差[5]。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件。计量

2 结果

2.1 各组免疫功能指标比较 与对照组比较，轻症组、中症组、重症组Th1/Th2、CD4+/CD8+、CD19+CD38+比例及血清IgG、IgA水平均降低，CD8+比例及血清C3、C4水平均升高(P均<0.05)。与轻症组比较，中症组和重症组CD19+比例均降低，但重症组降低更明显(P均<0.05)。与轻症组和中症组比较，重症组Th1/Th2、CD4+/CD8+均降低，CD8+比例均升高(P均<0.05)。与对照组和轻症组比较，中症组和重症组血清IgM水平均降低(P均<0.05)。各组CD3+、CD4+、CD19+CD20+CD27-、CD19+CD20+CD27+比例及血清IgE水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。见表1、2、3。

表1 各组Th1/Th2及T淋巴细胞亚群比例比较

注：与对照组比较，*P<0.05；与轻症组比较，#P<0.05。

表2 各组B淋巴细胞比例及B淋巴细胞亚群比例比较±s)

注：与对照组比较，*P<0.05；与轻症组比较，#P<0.05。

表3 各组免疫球蛋白及补体水平比较±s)

注：与对照组比较，*P<0.05；与轻症组比较，#P<0.05。

2.2 各组生活质量比较 对照组、轻症组、中症组、重症组KPS功能状态评分分别为100、(62±12)、(45±11)、(31±9)分，两两比较P均<0.05。

3 讨论

MM是浆细胞异常增生的恶性肿瘤，如不及时治疗，进展期MM患者的中位生存时间仅为6个月，接受传统化疗后仅有25%的患者可以生存5年以上，一般中位生存时间不超过3年[6]。研究发现，MM患者本身存在免疫系统的复杂缺陷，过继免疫细胞治疗很可能成为未来治疗MM的方向之一[7]。MM的特征为骨髓浆细胞瘤和一株完整性的单克隆免疫球蛋白或Bence Jones蛋白质过度生成，并在骨髓内恶性增殖，引起骨折、骨髓功能衰竭及多发性溶骨性损害、肾脏损害等。MM患者最常见的临床表现是贫血[8]，主要表现为正细胞正色素性贫血，多为首发症状。贫血的发生机制主要有以下几方面：①骨髓瘤细胞浸润红骨髓，造成正常造血组织减少。②并发肾功能衰竭，促红细胞生成素产生相对减少，导致红细胞生成减少。③某些细胞因子如IL-2β、TNF-β和IL-6等干扰红系祖细胞对促红细胞生成素的反应。MM的发病机制尚未完全明确，患者免疫功能低下不仅与B细胞、浆细胞介导的体液免疫缺陷有关，而且与T细胞介导的细胞免疫缺陷有关[9，10]。

淋巴细胞是人体主要的免疫细胞，其数量变化在一定程度上反映机体的细胞免疫水平。研究表明，肿瘤患者体内存在着抗肿瘤免疫应答，并以细胞免疫为主。T淋巴细胞(CD3)可分为CD4和CD8两大亚群，其中CD4细胞是辅助性T细胞，是主要的免疫应答细胞；CD8细胞是细胞毒性T细胞，并对CD4细胞具有调节抑制作用；CD4/CD8可反映机体细胞免疫功能状态[11]。研究表明，MM初诊患者外周血CD3+CD8+T细胞较健康人群明显增高，并导致CD4+/CD8+比例失衡，进展期CD4+/CD8+比稳定期有所降低，提示T细胞亚群比例紊乱与MM的发生、发展紧密相关[12]。本研究结果表明，与对照组相比，不同程度贫血者CD8+比例明显升高，而CD3+和CD4+比例变化不明显，使得CD4+/CD8+明显下降，贫血程度较重者变化更明显。说明MM患者体内存在T细胞亚群数量异常及比例失衡，与贫血严重程度有关。

正常情况下，机体Th1和Th2细胞功能处于动态平衡状态，维持机体正常的细胞免疫和体液免疫功能；当机体受到异己抗原攻击时Th1或Th2细胞中某一亚群功能升高，另一亚群功能降低，出现Th1/Th2平衡失调并向Th1或Th2转化的趋势，这种现象称为Th1/Th2漂移。研究表明，急慢性淋巴细胞白血病、非霍奇金淋巴瘤、MM等血液系统肿瘤免疫格局偏向Th2，削弱了在肿瘤免疫中起重要作用的Th1型反应，有助于肿瘤细胞的免疫逃逸[13]。研究发现，MM患者中存在Th1与Th2比例失衡[14]。本研究结果显示， 伴有贫血的MM患者Th1/Th2均显著低于对照组，贫血程度较重者降低更明显。

B淋巴细胞的功能是产生抗体、提呈抗原，并分泌细胞因子参与免疫调节。CD19是B淋巴细胞表面的特异抗原，可反映总B淋巴细胞数量。本研究结果显示，伴有贫血的MM患者CD19+、CD19+CD38+比例均低于对照组，贫血程度较重者降低更明显。说明MM患者外周血中多克隆性B细胞减少，存在体液免疫功能缺陷，与贫血严重程度有关[15]。健康人血清中的Ig含量是恒定的，在机体防御中发挥重要作用，过高或过低均可能是一种病态。MM患者体内单克隆浆细胞恶性增殖并分泌大量单克隆Ig，恶性浆细胞病无节制地增生，广泛浸润和大量单克隆Ig的出现及沉积，造成正常Ig的生成受抑制。由于骨髓瘤细胞的增生程度和浸润范围不一，合成分泌单株异常Ig多少也不同[16]。本研究结果显示，不同贫血程度的MM患者血清IgG、IgA和IgM水平均低于对照组，而补体C3和C4水平均高于对照组，且贫血程度较重者变化更明显。本研究对照组、轻症组、中症组、重症组KPS功能状态评分逐渐降低，说明贫血程度对MM患者的生活质量有明显影响。

综上所述，贫血对MM患者的体液免疫、细胞免疫功能及生活质量均有明显影响；贫血越严重，患者免疫功能紊乱越严重，生活质量越差。

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