外阴营养不良组织中Ang-Ⅱ、MMP-9及VEGF的表达及临床意义

范红伟　白凤楼　郝国荣　李清雪

050011　河北省石家庄市第四医院妇一科



·论著·

外阴营养不良组织中Ang-Ⅱ、MMP-9及VEGF的表达及临床意义

范红伟白凤楼郝国荣李清雪

050011河北省石家庄市第四医院妇一科

【摘要】目的了解血管紧张素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及血管内皮生长因子(VEGF)在外阴营养不良组织中的表达，探讨外阴营养不良疾病的发病机制。方法采取免疫组化链霉素抗生物素-过氧化酶(S-P)法，观察Ang-Ⅱ、MMP-9及VEGF在40例外阴营养不良组织中的表达情况，并与20例正常外阴皮肤作为对照组。结果Ang-Ⅱ在外阴营养不良组织中的表达显著低于正常外阴组织(P<0.05)；MMP-9在外阴营养不良组织中的表达显著低于正常外阴组织(P<0.05)；VEGF在外阴营养不良组织中的表达显著低于正常外阴组织(P<0.05)。结论外阴营养不良组织中Ang-Ⅱ、MMP-9及VEGF的表达降低，提示局部神经组织微血管功能障碍可能是外阴营养不良的相关因素之一。

【关键词】外阴营养不良；血管紧张素-Ⅱ；基质金属蛋白酶-9；血管内皮生长因子

外阴营养不良疾病是指女性外阴皮肤和黏膜组织发生变性及色素减退的一系列慢性疾病，外阴营养不良疾病根据病理表现不同分为：外阴鳞状上皮增生型、外阴硬化性苔癣型、外阴硬化性苔藓合并鳞状上皮增生型共三种类型。外阴营养不良疾病晚期常伴有外阴萎缩、阴道口狭窄、同房不适等症状，甚至癌变。由于外阴营养不良疾病病因不清，仍系临床一顽症。截至目前，此病发病机制和病因尚未清楚。有研究证实，其发病原因可能与外阴的神经变性、微血管障碍等多种因素有一定相关性[1]。本文采用免疫组化方法研究血管紧张素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及血管内皮生长因子(VEGF)在外阴营养不良组织中的表达情况，探讨这三种因子与外阴营养不良疾病发生的相关性，为今后的外阴不良疾病的发生、发展、诊断及诊断及治疗提供一定的参考价值。

1资料与方法

1.1一般资料收集2008年3月至2014年3月在我院住院的外阴营养不良患者外阴活检标本中的60例作为外阴营养不良组，参照1987年ISSVA和IPA讨论建议的分类标准分为外阴硬化性苔藓(LS)型30例,外阴鳞状细胞增生(SH)型25例和外阴硬化性苔藓及外阴鳞状细胞增生混合型(LS、SH混合型)5例；年龄18～60岁,平均年龄(45±9)岁；取同期因其他手术获取的正常外阴皮肤活检标本40例为对照(正常皮肤组)，年龄22～59岁，平均年龄(44±10)岁。2组患者年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2试剂与方法(1)试剂选取：SP法成套免疫组织化学试剂盒、鼠抗人MMP-9单克隆抗体均购自天津中平科技有限公司，羊抗人Ang-Ⅱ多克隆抗体免疫组化试剂盒购自R&D公司，鼠抗人VEGF单克隆抗体购自天津中平科技有限公司。(2)方法：采用SP法，免疫组化程序按试剂盒说明进行，采用免疫组织化学法进行检测，甲醛固定以后石蜡包埋切片，每种病理切片5张。

1.3结果判断Ang-Ⅱ、MMP-9及VEGF阳性反应为细胞浆内出现棕黄至深棕色颗粒。采用双盲方法进行，采用高倍显微镜(×400)随机选取10个视野，每个视野均计数100个细胞。无阳性细胞的视野计为阴性(-)，根据选取视野中阳性细胞的百分率判断分为：<5%(+)，5%～15%(++)，>15%(+++)。

2结果

2.1Ang-Ⅱ在外阴营养不良组织中的表达正常皮肤组40例，Ang-Ⅱ表达阳性者36例；外阴营养不良组共60例，Ang-Ⅱ表达阳性者1例；2组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。其中LS型组30例，表达阳性者1例，与正常皮肤组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；SH型25例，表达阳性者0例，与正常皮肤组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；LS、SH混合型组5例，表达阳性者0例，与正常皮肤组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1　Ang-Ⅱ在外阴组织中的表达　例

注：与正常皮肤组比较，*P<0.05

2.2MMP-9在外阴营养不良组织中的表达正常皮肤组与外阴营养不良组MMP-9阳性者比较，差异有统计学意义(P<0.05)；其中LS组30例，表达阳性者10例，与正常皮肤组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；SH组25例，表达阳性者8例，与正常肤组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；LS、SH混合型组5例，表达阳性者2例，与正常皮肤组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2　MMP-9在外阴组织中的表达　例

注：与正常皮肤组比较，*P<0.05

2.3VEGF在外阴营养不良组织中的表达正常皮肤组40例，VEGF表达阳性者36例；外阴营养不良组共60例，VEGF表达阳性者4例；2组比较差异有统计学意义(P<0.05)；其中LS组 30例，表达阳性者3例，SH组 25例，表达阳性者1例，LS、SH混合型组5例，表达均为阴性，3组与正常皮肤组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3　VEGF在外阴组织中的表达　例

注：与正常皮肤组比较，*P<0.05

3讨论

外阴营养不良疾病以外阴及肛周皮肤变薄、萎缩、弹性降低、色素减退、严重者致阴道口狭窄、同床困难等临床症状为主要特征。外阴营养不良疾病分为：(1)外阴鳞状上皮增生型：此种疾病类型的病理表现为光镜下表层皮肤角化不全或者角化过度，及轻重不等的慢性非特异性炎性细胞浸润为特点；(2)外阴硬化性苔藓型：此种疾病类型的病理表现为光镜下表皮萎缩，除此之外，上皮黑素细胞减少，同时由于表皮过度角化及黑素细胞减少致使外阴皮肤外观变浅、色素减退，甚至皮肤呈白色；(3)外阴硬化性苔藓合并鳞状上皮增生型：此疾病具备以上两种病理类型，以外阴皮肤萎缩变薄伴局灶隆起、角化过度为主要特点。

外阴营养不良疾病中外阴硬化苔藓型的发病机制为外阴真皮浅层的微小血管数目较正常组织的明显减少，使外阴真皮微循环的血供降低，表皮失去营养支持而发生外阴萎缩所造成的病变；外阴鳞状细胞增生型的病因是外阴组织细胞的变性和真皮乳头水肿，在局部炎性细胞的刺激过程中，外阴组织毛细血管痉挛、闭塞，从而导致局部组织的胶原纤维生成障碍和微循环障碍，引起外阴表皮细胞发生一系列不同程度的病变[2]。有研究认为外阴营养不良疾病的致病因素可能与自身免疫因子、遗传因素、HPV病毒感染、代谢紊乱等多种因素相关[3]。

外阴营养不良疾病是指多种原因引起的外阴皮肤和黏膜营养障碍而产生的表皮组织增生和真皮组织变性及色素脱失性疾病,其发病与上皮代谢的功能紊乱密切相关。它常常引起剧烈的、难以忍受的外阴瘙痒而严重影响患者生活质量。从幼年到老年均可发病,高峰年龄在40岁前后,3%～5%会发生癌变[1]。研究表明，外阴组织表皮的病变是继发的,其主要的病理变化发生在外阴组织的真皮层[4]。

Ang-Ⅱ是一种促使新血管生成的诱导剂，Ang-Ⅱ属于核糖核酸酶超家族中的一员[5]。Ang-Ⅱ的蛋白中共含有123个氨基酸，其相对分子量为14.4 kD，在肿瘤细胞研究中首先发现，当然，它也存在于正常细胞中，可以由多种细胞分泌，它的核糖核酸酶活性较弱。研究证实，Ang-Ⅱ可以在细胞内及细胞间发挥着促进血管生长的作用[6]。并且认为：其促进血管生成机制为：当Ang-Ⅱ与血管内皮细胞表面相结合时，细胞表面的肌动蛋白(actin)随之与Ang-Ⅱ结合，从而激发血浆纤溶酶原的活性，进一步刺激了细胞相关的蛋白水解酶(cell associated proteolytic)的活性，溶解细胞间基质，同时活化内皮细胞的连接蛋白，进而引导细胞迁移和侵袭[7]；另外,Ang-Ⅱ还可以刺激细胞的增殖、调节内皮细胞内有丝分裂原的活性、使细胞发生增生、形成管腔结构等多种功能。本研究发现，外阴营养不良组织中Ang-Ⅱ的表达较正常外阴组织降低，差异有统计学意义(P<0.05)。

基质金属蛋白酶(MMPs)是一组锌离子依赖性内肽酶，它与肿瘤细胞的侵袭、转移相关的ECM降解过程密切相关[8]。MMPs是一个大家族，其中的明胶酶有两种，明胶酶A(MMP-2)可以降解多种类型的胶原和蛋白[9]。MMPs参与机体内一系列生理病理过程，特别是在肿瘤的转移及浸润中发挥着不可缺少的作用[10-12]。MMP-9是MMPs家族中分子量最大的一个酶，其作用机制为通过降解 ECM，破坏基底膜屏障，破坏局部组织结构，促进新生血管的形成。本研究发现，外阴营养不良组织中MMP-9的表达较正常外阴组织降低，差异有统计学意义(P<0.05)。

VEGF是一种肝素结合因子，是作用最强、特异性最高的调控因子，VEGF的主要作用靶点为血管内皮细胞，它和内皮细胞上的受体高亲和力完成结合后，作为内皮细胞的特异性有丝分裂原，从而诱导毛细血管袢形成及内皮细胞的增生[13]，同时，VEGF也可以诱导内皮的间质产生，增加微血管通透性，从而促进体内新生血管的生成[14]。另外，研究已证实VEGF还可以促进神经元细胞的生长及增殖，刺激雪旺细胞的分裂，具有营养神经及保护神经的功能与作用[15]。本研究发现，外阴营养不良组织中VEGF的表达较正常外阴组织降低，差异有统计学意义(P<0.05)。

综上所述，外阴营养不良组织中Ang-Ⅱ、MMP-9及VEGF的表达较正常组织中的明显降低，进一步证实Ang-Ⅱ、MMP-9及VEGF这三种因子，在外阴营养不良组织中外阴及肛周皮肤变薄萎缩、弹性降低、色素减退等一系列病情变化的发生、发展及演变过程中，发挥着重要作用，提示局部血管的微循环障碍和胶原纤维生成障碍,可能是外阴营养不良的相关因素之一，在今后的外阴营养不良疾病基因治疗中，适当上调Ang-Ⅱ、MMP-9及VEGF这三种因子的表达，将会缓解外阴营养不良疾病的临床症状，进一步治疗外阴不良疾病这一顽症提供良好的前景。

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(收稿日期：2015-11-27)

【中图分类号】R 711.73

【文献标识码】A

【文章编号】1002-7386(2016)09-1383-03

通讯作者：李清雪，050011河北省石家庄市第四医院；

doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2016.09.033

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