ABO血型正反定型与交叉配血实验结果及影响因素分析

庞卫花　徐娜　杨敬芳　安和兵　李金巍

075100　河北省张家口市，河北北方学院附属第二医院检验科(庞卫花、杨敬芳、安和兵、李金巍)，妇产科(徐娜)



·论著·

ABO血型正反定型与交叉配血实验结果及影响因素分析

庞卫花徐娜杨敬芳安和兵李金巍

075100河北省张家口市，河北北方学院附属第二医院检验科(庞卫花、杨敬芳、安和兵、李金巍)，妇产科(徐娜)

【摘要】目的分析ABO血型正反定型与交叉配血实验结果，并探讨其影响因素。方法选择3 000例血清标本，采用微柱凝胶法行ABO正反定型及Rh血型鉴定，并与异型血进行交叉配血。对78例ABO正反定型与交叉配血不合的标本，采用2-Me处理被患者自身冷抗体凝集的红细胞，凝聚胺法及微柱凝胶法行血型不规则抗体筛选及特异性鉴定，氯喹放散法测定自身抗体所掩盖的同种抗体等，分析ABO血型正反定型不符与交叉配血不合的原因。结果3 000例经正定型检测的血清标本，其中红细胞定型为A型879例，676例检出抗B，203例未检出抗B，抗B检出率76.9%(676/879)；红细胞定型为B型1 034例，762例检出抗A，272例未检出抗A，抗A检出率73.7%(762/1 034)；红细胞定型为O型1 087例，770例同时检出抗A和抗B，抗A和抗B检出率70.8%(770/1 087)，76例仅检出抗A，抗A检出率7.0%(76/1 087)，60例仅检出抗B，抗B检出率5.5%(60/1 087)，181例未检出抗A和抗B。选择反定型完全没出现凝集反应的800例血清标本，采用微柱凝胶法进行交叉配血实验，结果显示，78例出现凝集反应，配血不合。经分析，ABO血型正反定型不符与交叉配血不合的原因主要有：自身冷抗体21例(26.9%)、血型不规则抗体14例(17.9%)、血型抗原性减弱11例(14.1%)、血型抗体效价减弱9例(11.5%)、自身抗体阳性9例(11.5%)、实验方法学原因6例(7.7%)，此外，肝素影响及血标本细菌污染也为重要原因。结论ABO血型鉴定中正反定型大部分一致，而出现正反定型不符与交叉配血不合的原因有多种，其中自身冷抗体、血型不规则抗体、血型抗原性减弱、血型抗体效价减弱、自身抗体阳性占较大比例，临床输血前应采取多种血型血清学检测方法进行相互验证，确保临床输血安全，保障患者安全。

【关键词】ABO血型；正反定型；交叉配血；微柱凝胶法

对于失血性休克、贫血及重症感染、烧伤等危重患者，数学为临床常用重要干预手段之一。目前，临床虽提倡成分输血，安全性较高。但研究表明，输血在挽救患者生命同时，也带来一定不良反应，如免疫抑制、溶血性输血反应等，严重时可影响患者生命安全[1]。有文献报道，ABO血型正反定型不符可致急性溶血性贫血等发生，给患者生命安全带来严重威胁[2]。本研究检测我院2012年4月至2014年4月共3 000例患者、送检血样及献血员标本，并对一些ABO血型正反定型不符标本进行交叉配血实验，探讨ABO血型正反定型不符与交叉配血不合的原因及对处理方式进行探讨，以期为临床安全输血提供建议。

1资料与方法

1.1一般资料选取2012年4月至2014年4月我院3 000例患者、送检血样及献血员标本，送检验科进行ABO血型鉴定。其中男1 800例，女1 200例；年龄5～85岁，平均年龄(39±12)岁。包括白血病患者325例，多发性骨髓瘤患者91例，骨髓纤维化患者24例，贫血患者288例，肠癌患者164例，消化道出血患者270例，外科手术患者269例，以及其他相关疾病患者1 569例。筛选出ABO血型正反定型不符与交叉配血不合的78例患者作为研究对象，其中男41例，女37例；年龄20～65岁，平均年龄(46±9)岁。本研究均经患者及家属知情同意，且均符合医院伦理委员会基本要求。

1.2试剂所用试剂抗A、抗B、抗A+B、抗H、抗A1、抗D、抗c等均购自上海血液生物医药有限责任公司，反定型后细胞悬液由长春博德生物制品研究所提供；微柱凝胶卡及专用离心机购自达亚美公司。

1.3仪器免疫微柱离心机、卡式专用离心机、免疫微柱孵育箱购自达亚美公司。

1.4血型鉴定方法

1.4.1ABO血型正反定型:使用长春博讯ABO、RhD血型定型试剂卡将全体血样标本进行ABO血型正反定型，筛选出正反定型不符的标本。对此初次出现正反定型不符的标本重新采集，并严格按照微柱凝胶卡操作规程重复试验，以排除人为因素及技术失误。对重新采集的血样，留取唾液做进一步的血型物质鉴定。

1.4.2交叉配血:将患者血清及红细胞放置37℃水浴中预温10 min，再采用微柱凝胶法进性交叉配血实验。

1.4.3ABO血型正反定型与交叉配血不符的进一步鉴定:应用2-Me处理被患者自身冷抗体凝集的红细胞，凝聚胺法及微柱凝胶法行血型不规则抗体筛选及特异性鉴定，氯喹放散法测定自身抗体所掩盖的同种抗体。

1.5鉴定标准鉴定检测均参照《全国临床检验操作规程》和《临床输血诊疗技术》进行。

2结果

2.1血清ABO血型抗体检测结果选取3 000例经正定型检测的血清标本，其中红细胞定型为A型879例，676例检出抗B，203例未检出抗B，抗B检出率76.9%(676/879)，正反定型不相符率4.2%(37/879)；红细胞定型为B型1 034例，762例检出抗A，272例未检出抗A，抗A检出率73.7%(762/1 034)，正反定型不相符率4.2%(43/1 034)；红细胞定型为O型1 087例，770例同时检出抗A和抗B，抗A和抗B检出率70.8%(770/1 087)，正反定型不相符率1.8%(20/1 087)76例仅检出抗A，抗A检出率7.0%(76/1 087)，60例仅检出抗B，抗B检出率5.5%(60/1 087)，181例未检出抗A和抗B。见表1。

表1　3 000例血清标本ABO抗体检出情况

2.2血清反定型与反应时间的关系选取正定型为A型、反定型为B性的血清标本各1 000例进行反定型检测，结果显示，随着反应时间延长，出现凝集反应的标本数逐渐增多。见表2。

表2　正定型为A、B型血清标本各1 000例反定型实验检测情况　例(%)

2.3交叉配血实验选择反定型完全没出现凝集反应的800例血清标本，采用微柱凝胶法进行交叉配血实验，结果显示，78例出现凝集反应，配血不合。

2.4ABO血型正反定型不符与交叉配血不合的原因分析经ABO正反定型、吸收放散试验、抗人球蛋白试验及血型不规则抗体筛选等，整理分析得出造成ABO血型正反定型不符与交叉配血不合的原因主要有：自身冷抗体、血型不规则抗体、血型抗原性减弱、血型抗体效价减弱、自身抗体阳性等。见表3。

表3　ABO血型正反定型不符与交叉配血不合的原因分析

3讨论

输血对于失血性休克等危重患者具有重要临床价值，有文献报道，输血前有部分患者ABO血型正反定型不符及交叉配血不合，导致无法确认患者血型，影响输血抢救，不利于临床治疗[3,4]。正因如此，探讨ABO血型正反定型不符及交叉配血不合相关原因具有重要价值。

本研究采用微柱凝胶法结合血清学方法检测ABO血型正反定型，并与异型血进行交叉配血实验，筛选出其中ABO血型正反定型与交叉配血不合病例。本结果显示，879例红细胞定型为A型的标本正反定型不相符率4.2%(37/879)，1 034例红细胞定型为B型的标本正反定型不相符率4.2%(43/1 034)，1 087例红细胞定型为O型的标本正反定型不相符率1.8%(20/1 087)，说明3 000例标本中大部分患者ABO血型正反定型一致。交叉配血实验结果显示，800例标本中有78例出现凝集反应，配血不合。我们分析其原因，主要影响因素：(1)自身冷抗体：为影响ABO血型正反定型不符及交叉配血不合最为常见原因之一。健康人群冷凝集素效价一般低于1∶16，其活性在0～4℃时最强，能够与红细胞结合引起凝集反应[5]。但在支原体肺炎、自身免疫性贫血、传染性单核细胞增多症、某些恶性肿瘤等病理情况下，患者血清中具有高效价冷凝激素，影响检测结果[5,6]。此种情况下，需加做自身对照并结合冷抗体效价检测、冷抗体吸收试验、直接抗人球蛋白试验等一系列实验进行鉴定。本研究发现，对此类患者将血清及红细胞置于37°C孵育15 min行离心观察，于凝固状态下使用2-Me处理红细胞，后进行ABO正定型，有助于准确判断。(2)血型不规则抗体：血型不规则抗体为ABO血型不合另一重要原因，有研究表明，血型不规则抗体检出率为0.3%～2.0%，为引起较差配血不合及输血反应的重要原因之一。在自身对照为阴性情况下，若反定型与O型细胞凝集反应呈阳性，则应该考虑血型不规则抗体出现的可能性[7]。针对于此种原因时，可通过细胞及谱细胞筛选出血型不规则抗体并进行特异性鉴定，从而选择合适血液进行输血抢救。(3)血型抗原性减弱：血型抗原减弱为ABO血型不符及交叉配血不合发生的另一重要原因。相关研究表明，白血病及恶性肿瘤患者由于外周血出现大量原始及幼稚细胞，引起血型抗原性减弱，从而导致血型误定现象发生[8, 9]。此时，加大试剂血清剂量，延长放置时间后再行离心试验观察则有助于判断。(4)血型抗体效价下降：血型抗体减弱临床应重视。有研究表明，若仅为抗体减弱，延长抗原抗体反应时间或者加大血清剂量有助于评估[6]。(5)自身抗体阳性：自身抗体阳性主要指机体收到自身血型抗原刺激后，机体所产生的免疫性抗体，可采取抗人球蛋白法进行判断。(6)血浆蛋白异常：血浆蛋白异常为ABO血型正反定型不符及交叉配血不合的重要因素，肝脏疾病、多发性骨髓瘤等患者血清中存在异常球蛋白，且部分疾病可引起纤维蛋白水平增高等可致定型困难[10]。(7)实验方法学原因：在使用微柱凝胶法检测ABO血型时，如果血标本抗凝效果差或者离心时间过短等原因导致血中纤维蛋白含量升高进而出现假性凝集反应[11]。因此，临床检测过程中应严格按照步骤进行操作，尽量消除血中纤维蛋白对结果的影响。(8)血样污染：细菌污染能够激活红细胞上的T抗原，从而与供血者血清中的抗T抗体结合出现凝集反应，这也是造成假阳性结果的原因之一。临床进行血型鉴定及交叉配血工作时，应尽量选择新鲜的血标本，保障临床输血安全。

综上所述，正确的ABO血型正反定型及交叉配血是保证临床安全输血的关键和前提，引起正反定型不符及交叉配血不合的原因有多种，其中自身冷抗体、血型不规则抗体、血型抗原性减弱、血型抗体效价减弱、自身抗体阳性等均为重要原因，针对于不同情况，我们可采取针对性措施以降低其发生，保障临床输血安全。

参考文献

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(收稿日期：2015-12-11)

【中图分类号】R 446.11

【文献标识码】A

【文章编号】1002-7386(2016)09-1366-03

doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2016.09.027