MMP及TIMP在子宫内膜异位症中的表达*＊?

范玉香

(赞皇县医院，河北赞皇　051230)



MMP及TIMP在子宫内膜异位症中的表达*＊?

范玉香

(赞皇县医院，河北赞皇051230)

［摘要］目的:探讨基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9及组织抑制因子TIMP-1、TIMP-2在子宫内膜异位症(EMT)患者血清及腹腔液中的表达及意义。方法:选取行腹腔镜术EMT患者40例及同期行腹腔镜术非EMT患者40例作为研究对象，采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定两组患者MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2在血清和腹腔液中的表达，同时比较EMT不同分期患者血清及腹腔液中MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2。结果: EMT组患者血清及腹腔液中MMP-2、MMP-9表达水平显著高于非EMT组(P＜0.05)，EMT组TIMP-1、TIMP-2的表达水平显著低于非EMT组(P＜0.05) ;随临床EMT分期的增加MMP-2、MMP-9表达水平相应升高，Ⅲ～Ⅳ期显著高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05) ;而TIMP-1、TIMP-2的表达水平随EMT临床分期增高而降低，Ⅲ～Ⅳ期显著低于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05)。结论: MMP-2、MMP-9的高表达与TIMP-1、TIMP-2的低表达，可能参与EMT的发生与发展过程。

［关键词］子宫内膜异位症;血清;体液，腹腔;基质金属蛋白酶;组织抑制因子

网络出版时间: 2016－02－23网络出版地址: http: / /www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160223.2101.056.html

子宫内膜异位症(EMT)是指子宫内膜组织在子宫腔被覆内膜及子宫肌层以外的部位生长、浸润，导致疼痛、出血、不育等临床症状，是育龄期妇女常见的良性疾病，发病率达10%～15%，严重影响妇女身心健康及生活质量［1－2］。EMT的发病机制与经血逆流种植学说、静脉和淋巴播散学说、免疫学说等相关［3］。研究指出，EMT是一种血管生成依赖性疾病，内膜的种植过程是免疫应答异常、局部炎症反应和血管新生的过程，在这个过程中间基质金属蛋白酶(MMP)及其组织抑制因子(TIMP)起着重要的作用，二者以1∶1的比例形成复合物，抑制MMP的活性，调控着对细胞外基质(ECM)中MMP的降解［4－5］。本研究旨在探讨基质金属蛋白酶-2、9(MMP-2、MMP-9)及其组织抑制因子-1、-2(TIMP-1、TIMP-2)在EMT患者血清及腹腔液中的表达及意义。

1　材料和方法

1.1一般资料

选取2014年1月～2015年1月妇科经腹腔镜术确诊为EMT患者40例作为观察组，符合EMT疾病诊断标准及分期标准［6］，排除有心、脑、肾等器官严重疾病，排除免疫、代谢、内分泌等激素依赖性疾病，至少3月内未接受过任何激素药物治疗;年龄23～46岁，平均(31.3±6.7)岁;体重指数(BMI) 16.2～25.2 kg/m2，平均(20.8±3.2) kg/ m2;根据美国生育协会评分标准(r-AFS)分期，Ⅰ～Ⅱ期15例，Ⅲ～Ⅳ期25例。选取同期因子宫肌瘤或不孕症等行腹腔镜术的非EMT患者40例作为对照组，其中子宫肌瘤28例，不孕症12例，引起不孕症原因为卵巢肿瘤、输卵管发育不全或不通等，年龄24～46岁，平均(32.0±5.2)岁; BMI 16.3 ～25.7 kg/m2，平均(21.1±3.5) kg/m2。两组患者年龄、BMI等资料比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

1.2方法

所有研究对象于入院第2天清晨7时采集外周静脉血5 mL，常温静置1 h，3 500 r/min离心20 min，取上清液置－70℃保存待检。腹腔液标本于手术时用无菌注射器吸取子宫直肠陷凹和子宫膀胱陷凹处腹腔液5 mL，3 500 r/min离心20 min，取上清液置－70℃条件保存待检。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定两组患者血清及腹腔液MMP-2、 MMP-9和TIMP-1、TIMP-2的水平，试剂盒购自上海西唐生物科技有限公司，由专业人员按照说明书操作。

1.3观察指标

观察EMT患者与非EMT患者血清及腹腔液中MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2水平，并比较EMT不同分期患者血清及腹腔液中MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2的差异。

1.4统计学分析

应用SPSS 18.0软件分析数据，计量资料采用均数±标准差(±s)表示，采用t检验，计数资料用χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2　结果

2.1血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2

观察组血清MMP-2、MMP-9表达水平显著高于对照组(P＜0.05)，TIMP-1、TIMP-2的表达水平显著低于对照组(P＜0.05)，差异有统计学意义，见表1。

表1　两组患者血清中MMP-2、MMP-9、TIMP-1 及TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.1 The serum levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in two groups

表1　两组患者血清中MMP-2、MMP-9、TIMP-1 及TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.1 The serum levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in two groups

(1)与对照组比较，P＜0.05

指标　　观察组(n =40)　　对照组(n =40) 155.2±50.3 MMP-9　 289.3±62.2(1)　191.1±53.5 TIMP-1　 238.7±57.5(1)　401.2±65.5 TIMP-2　 205.5±39.7(1)MMP-2　 245.8±58.7(1)343.7±41.5

2.2腹腔液MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2

观察组腹腔液中MMP-2、MMP-9表达水平显著高于对照组(P＜0.05)，TIMP-1、TIMP-2的表达水平显著低于对照组(P＜0.05)，差异有统计学意义，见表2。

表2　两组患者腹腔液中MMP-2、MMP-9、TIMP-1 及TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.2 The peritoneal fluid levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in two groups

表2　两组患者腹腔液中MMP-2、MMP-9、TIMP-1 及TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.2 The peritoneal fluid levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in two groups

(1)与对照组比较，P＜0.05

指标　　观察组(n =40)　　对照组(n =40) 15.3±6.2 MMP-9　27.3±4.4(1)　18.3±5.8 TIMP-1　 975.7±421.5(1)　1 305.5±437.3 TIMP-2　 831.5±305.8(1)MMP-2　25.7±8.5(1)1 131.3±305.7

2.3不同分期EMT患者血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2水平

EMT患者Ⅲ～Ⅳ期血清MMP-2、MMP-9的表达水平显著高于Ⅰ～Ⅱ期，Ⅲ～Ⅳ期血清TIMP-1、TIMP-2表达水平显著低于Ⅰ～Ⅱ期，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表3　EMT不同分期患者血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.3 The serum levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in EMT patients with different clinical staging

表3　EMT不同分期患者血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.3 The serum levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in EMT patients with different clinical staging

(1)与Ⅰ～Ⅱ期比较，P＜0.05

指标　　Ⅰ～Ⅱ期(n =25)Ⅲ～Ⅳ期(n =15) MMP-2　179.2±39.5　 291.3±54.5(1)MMP-9　210.3±42.2　 335.4±69.5(1)TIMP-1　362.7±71.2　 158.5±42.3(1)TIMP-2　241.5±32.7　 115.7±21.3(1)

2.4不同分期EMT患者腹腔液MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2水平

EMT患者Ⅲ～Ⅳ期腹腔液MMP-2、MMP-9的表达水平显著高于Ⅰ～Ⅱ期，Ⅲ～Ⅳ期腹腔液TIMP-1、TIMP-2表达水平显著低于Ⅰ～Ⅱ期，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表4。

表4　EMT不同分期患者腹腔液MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.4 The peritoneal fluid levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in EMT patients with different clinical staging

表4　EMT不同分期患者腹腔液MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.4 The peritoneal fluid levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in EMT patients with different clinical staging

(1)与Ⅰ～Ⅱ期比较，P＜0.05

指标　　Ⅰ～Ⅱ期(n =25)Ⅲ～Ⅳ期(n =15) MMP-2　18.5±6.7　 27.1±5.0(1)MMP-9　19.3±5.7　 28.9±4.3(1)TIMP-1　 1 215.6±502.1　 870.3±267.9(1)TIMP-2　 1 115.3±375.8　 781.6±215.4(1)

3　讨论

EMT被认为是类似癌性浸润的一种良性疾病，月经期脱落的子宫内膜细胞随经血逆流，经血管或淋巴管进入腹腔、肝、肺等器官，种植于器官表面并生长。异位内膜本身及其周围组织血液供应的建立和维持是EMT的发病基础，目前已发现许多肽类生长因子以自分泌或旁分泌形式促进血管内皮细胞增殖与分化。EMT患者全身及盆腔局部发生了免疫状况改变，不能对异位的内膜清除，导致机体巨噬细胞数量增加，MMP由巨噬细胞、结缔组织细胞、内皮细胞、粒细胞等合成及分泌，是具有高度同源性的内肽酶，可以加快血管内皮细胞新生血管的形成，与整合素相互活化增强细胞间黏附，在内膜细胞的异位种植生长中起促进作用［7－9］。TIMP是MMP的特异性抑制因子，MMP的活性可被TIMP和巨球蛋白所抑制，通过调节MMP的活性调控ECM的更新与破坏［10－11］。基底膜的完整性是判断异位内膜浸润与侵袭的重要标志，MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2在这一过程的调节中具有特殊意义［12］。MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2主要分布在EMT患者的血管内皮细胞和腺上皮细胞，在间质细胞表达相对较低，于EMT在位内膜和正常子宫内膜血管内皮细胞、腺上皮细胞及间质细胞中的表达率较低［13］。MMP-2、MMP-9的表达随EMT临床分期的升高而增强，提示与EMT患者异位内膜的侵袭呈正相关。由于MMP-2 和MMP-9在EMT患者早期就有表达，在异位组织中明显增高，临床可通过检测MMP-2、MMP-9的水平来判断愈后情况［14］。本研究表明，EMT患者MMP-2、MMP-9在血清和腹腔液中的表达水平显著高于对照组，随着临床分期的增加MMP-2、MMP-9的表达水平也相应升高，本组Ⅲ～Ⅳ期MMP-2、MMP-9的表达水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期，说明MMP-2、MMP-9在异位内膜中的过度表达，使得异位内膜有很强大的水解能力，降解病变周围的基底膜，使异位内膜在组织内种植生长并使病灶不断扩大。TIMP通过调解MMP的活性调控着细胞外基质的合成与降解，MMP与TIMP间的平衡如果失调，会引起多种病理改变，这种现象在EMT的发生发展过程中起重要作用，TIMP-1和TIMP-2随着EMT病情的发展和r-AFS分期的升高其表达水平逐渐降低，而MMP-2和MMP-9活性反而增强［15］。本研究显示TIMP-1、TIMP-2在EMT的表达水平低于对照组，且随临床分期的增加TIMP-1、TIMP-2的表达水平也相应降低，本组Ⅲ～Ⅳ期的TIMP-1、TIMP-2表达水平明显低于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05)，使MMP-2/TIMP-2与MMP-9/TIMP-1间的比值增加，平衡出现失调，使异位内膜侵袭力增加，改变了ECM的合成与降解，与文献［15］报道一致。研究认为MMP与TIMP平衡的失调，改变了ECM合成与降解过程，诱发并促进EMT的发生与发展［16］。

总之，MMP-2、MMP-9的高表达与TIMP-1、TIMP-2的低表达，可能参与EMT的发生与发展，临床通过检测其表达水平，对预测疾病的发生发展与转归具有重要意义。

4　参考文献

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(2015－06－23收稿，2015－11－21修回)

中文编辑:戚璐;英文编辑:刘华

·护理学研究·

Expression of MMP and TIMP in the Endometriosis

FAN Yuxiang
(Zanhuang Hospital of Hebei Province，Zanhuang 051230，Hebei，China)

［Abstract］Objective: To explore the expressions of MMP-2，MMP-9，TIMP-1，and TIMP-2 in the serum and peritoneal fluid in patients with endometriosis (EMT) and their clinical significance.Methods: A total of 40 patients with EMT for laparoscopy and 40 patients with non-EMT for laparoscopy at the same period were enrolled in the study.The double-antibody sandwich ELISA was used to detect the expressions of MMP-2，MMP-9，TIMP-1，and TIMP-2 in the serum and peritoneal fluid.Meanwhile，the expressions of MMP-2，MMP-9，TIMP-1，and TIMP-2 in the serum and peritoneal fluid in patients with EMT at different stages were compared.Results: The expression levels of MMP-2 and MMP-9 in the serum and peritoneal fluid in EMT group were significantly higher than those in the non-EMT group (P＜0.05).The expression levels of TIMP-1 and TIMP-2 in EMT group were significantly lower than those in the non-EMT group (P＜0.05).With the increasing clinical staging of EMT，the expression levels of MMP-2 and MMP-9 were correspondingly elevated while the expression levels of TIMP-1 and TIMP-2 were reduced with the increasing clinical staging of EMT.Specifically，the expression levels of MMP-2 and MMP-9 at stageⅢ～Ⅳwere significantly higher than those at stageⅠ～Ⅱ(P＜0.05) while the expression levels of TIMP-1 and TIMP-2 at stageⅢ～Ⅳwere significantly lower than those at stageⅠ～Ⅱ(P＜0.05).Conclusion: The high expressions of MMP-2 and MMP-9 and low expressions of TIMP-1 and TIMP-2 are probably involved in the genesis and development of EMT.

［Key words］endometriosis; serum; body fluid，abdominal cavity; matrix metalloproteinaeses; tissue inhibitor

*［基金项目］河北省科技进步项目(20150261)

［中图分类号］R711.2

［文献标识码］A

［文章编号］1000-2707(2016) 02-0238-04