电针对正常犬血浆三种相关神经营养园子的影响

李伟　李拓　高蕊　程鹏　李佳　姜代勋　陈武

摘要：目的：初步观察电针对正常比格犬血浆中神经营养因子浓度的影响，为分析针灸对神经机能障碍性疾病的治疗、保健作用机制积累数据。方法：8只}匕格犬，选取足三里、趾问、百会和膀胱俞穴，于清醒状态下隔日电针刺激，并在电针前和首次电针后第1天、4天、7天和14天采血，分离血浆，Elisa试剂盒检测神经生长因子（nervegrowthfactor，NGF）、脑源性神经生长因子（brain-derivedneurotrophicfactor，BDNF）和神经营养素-3（neurotrophin-3，NT-3）的浓度。结果：电针后，血浆中三种神经营养因子的浓度呈升高变化。与针前比较，NGF的浓度在电针后第4天极显著升高（p<0.01）、第7天显著升高（P<0.05）和第14天极显著升高（P<0.01）；BDNF的浓度在电针后第4天、第7天和第14天均极显著升高（P<0.01）；NT-3的浓度在电针后第4天（P<0.01）和第14天（P<0.01）差异极显著，第1天和第7天差异不显著。结论：电针可提高犬血浆NGF、BDNF、NT-3的浓度，提示电针对神经系统的治疗与保健作用可能与此有关。

关键词：神经生长因子；脑源性神经营养因子；神经营养素3；电针

中枢及末梢神经机能障碍是临床常见的动物疾病。研究发现，一些神经性疾病的发生与血浆中神经营养因子的水平有关。针灸作为中国传统医学的代表之一，对神经系统疾病疗效切实。然而，针灸改善神经机能的机理尚未不完全清楚。本研究通过观察电针前和电针后不同时间段试验犬血浆中NGF、BDNF和NT-3浓度的变化，为揭示针灸对神经性疾病的治疗、保健作用机理积累数据。

1.材料与方法

1.1实验动物

8只性成熟比格犬（购自北京市海淀区兴隆实验动物养殖厂），雌雄各半。

1.2实验材料

KWD-808I脉冲电疗仪（常州市武进长城医疗器械有限公司）；针灸针（0.2×25mm，苏州针灸用品有限公司）；一次性用真空静脉采血管（浏阳市三九医用科技发展有限公司）；一次性用真空采血器配套用针（上海康依医疗器械有限公司）；NGF-Elisa试剂盒（E08N0014，BlueGene）；BDNF-Elisa试剂盒（E0880007，BlueGene）；NT-3-Elisa试剂盒（E08N0018，BlueGene）。

1.3实验方法

针前对照（空白组）：在电针开始前1周，进行一次采血、收集血浆，-80℃冻存。

电针组：选取百会穴、足三里穴、膀胱俞穴和趾间穴。其中，百会穴进行针刺，但不接电针仪，其余三组穴位相同穴位连接同一组导线，采用连续波（频率2Hz），电针强度以后肢出现轻微抖动为宜，25min/次，隔天1次。在第一次电针结束后24h采血，分离血浆，为第1天，依此类推，在电针后第4天、7天和14天分别采血，分离血浆，-80℃冻存。采用Elisa法检测血浆样品中NGF、BDNF和NT-3的浓度。

1.4统计学处理

数据采用SPSS17.0软件进行统计分析。采用四参数法求得Elisa试剂盒标准曲线，根据标准曲线计算血浆中NGF、BDNF、NT-3的浓度，浓度值用平均数±标准差（x±s）表示，采用独立样本t检验，检验标准：P0.05差异显著，P0.01差异极显著。

2.试验结果

由图1可知，电针后，血浆中NGF浓度呈升高趋势。与针前相比，电针后第1天差异不显著（P>0.05）；第7天差异显著（P<0.05）；第4天和14天差异极显著（P<0.01）。

由图2可知，电针后，血浆中BDNF的浓度开始升高。与针前相比，电针第1天差异不显著（P>0.05）；电针第4天、第7天和第14天差异极显著（P<0.01）。

由图3可知，与针前相比，电针后，血浆中NT-3的浓度逐渐升高。电针第4天、第14天差异极显著（P<0.01）；电针第1天、第7天血浆NT-3的浓度变化不显著（P>0.05）。

3.讨论

神经机能障碍性疾病是犬的多发病。外周或中枢神经损伤引发的瘫痪，不仅给患动自身带来痛苦和活动不便，还给其主人和医疗活动带来沉重的负担。针灸作为一种治病、防病的手段，在面神经麻痹、坐骨神经麻痹、膀胱麻痹、直肠麻痹、椎间盘脱出等疾病治疗的过程中，显示出了神奇的治疗效果。

神经机能的恢复离不开相关神经营养因子的参与。NGF、BDNF、NT-3是神经营养素家族中三大主要成员，对神经元的生长、分化、发育，维持神经系统生存和功能，以及防止神经元死亡，促进受损神经纤维和轴突的再生等方面发挥着十分重要的作用。文献表明，NGF、BDNF和NT-3在许多中枢神经系统疾病发生、发展和转归过程中，起着至关重要的作用。有研究证明，用硅胶管连接坐骨神经横断模型大鼠两神经断端，管中充有BDNF组对断端神经元的再生促进作用显著高于充有磷酸盐缓冲液的对照组。李漾超等对BDNF与癫痫研究进行总结发现，BDNF具有抗癫痫作用的同时，也参与了癫痫发生的机制。

趾间、足三里、百会和膀胱俞穴是宠物临床治疗神经性疾病常用穴。邹伟等用“百会”透“曲鬓”头针疗法干预急性脑出血模型大鼠，设定造模后6h、1d、2d、3d、7d五个时间窗，观察血肿周围脑组织BDNFmRNA和NGFmRNA的表达情况，发现各时间窗电针组大鼠BDNFmRNA和NGFmRNA表达均显著高于模型组，且高峰期分别在脑出血后的第2天和第7天。研究还发现，电针足三里和百会穴能提高大鼠海马回BDNF的水平。也有研究证明，电针曲池和足三里穴能提高脑缺血再灌注模型大鼠大脑皮质脑源性神经营养因子的表达。王燕等对电针促进神经营养因子表达研究进行总结发现，电针能够提高NGF、BDNF、NT-3等神经营养因子在损伤脊髓组织中的阳性表达。然而电针对犬血浆中NGF、BDNF和NT-3浓度影响的研究未见报道。因此，本研究对犬电针前、后血浆三种神经营养因子浓度变化进行了观察研究。

结果表明，电针后，血浆中NGF、BDNF、NT-3浓度开始升高。在电针第4天、第7天和第14天，与针前空白组比较，存在显著性差异，而电针第一天，三种神经营养因子的浓度虽有所升高，但与针前空白组比较差异不显著；在上述电针的四个时间段，血浆中三种神经营养因子的浓度呈现出了“低-高-低-高”的波动现象，而这种波动与空白组相比，均处在一个较高的水平。说明，电针刺激足三里、膀胱俞、百会和趾间穴能够在较短的时间内（2次针灸后）提高正常比格犬循环血血浆中NGF、BD-NF、NT-3的浓度。

血浆神经营养因子浓度的提高，利于神经组织营养和损伤后的修复，提示电针对神经系统的治疗、保健作用可能与提高血浆中神经营养因子的浓度有关。

本次研究虽然发现电针能够提高正常比格犬血浆中NGF、BDNF和NT-3的浓度，并提示针灸尤其是电针治疗神经系统疾病的机制可能与此有关，但对于疾病状态下神经营养因子的变化及电针对其的影响还需要进一步研究。

4.结论

电针能在短时间内提高正常犬血浆NGF、BD-NF、NT-3的浓度，且其对神经系统的治疗、保健作用可能与此有关。

（编辑：狄慧）