一种ABO血型快速检验试纸条在法医学检验中的应用评估

金 鑫郝金萍马应锦吴宏武（海南省公安厅刑警总队 海南 海口 5700；公安部物证鉴定中心 北京 0008；儋州市公安局刑警支队 海南 儋州 57700；东方市公安局 海南 东方 57600）

一种ABO血型快速检验试纸条在法医学检验中的应用评估

金 鑫1郝金萍2马应锦3吴宏武4
（1海南省公安厅刑警总队 海南 海口 570203；2公安部物证鉴定中心 北京 100038；3儋州市公安局刑警支队 海南 儋州 571700；4东方市公安局 海南 东方 572600）

研究评估ABO血型快速检验技术在法医学领域中的应用可行性，溶解生物斑迹中所含的ABO血型物质，利用ABO血型胶体金试剂条，观察其准确度、灵敏度、种属特异性，得出ABO血型快速检验技术检验快速、操作简便、结果准确的结果，该方法可用于法医工作中ABO血型检验。

法庭科学 ABO血型 胶体金试剂条

伴随DNA技术在法医学中应用的快速推广和普及，ABO血型检验技术因检验操作步骤繁琐、对操作的技术要求较高[1]而渐渐退出实践应用。但ABO血型检验技术同DNA技术在法医学中的发展应用并不矛盾，反之可以起到补充、简繁DNA检验技术工作的作用。本实验对研究ABO血型快速检验技术的灵敏度、种属特异性和准确性进行研判，评估ABO血型快速检验技术在法医学领域中的应用可行性。

1 样本制备

1.1 血痕

127 份，在医院用棉签采集静脉血，血型已知，室温晾干，放置1～2年。

1.2 唾液斑

73份，血型已知的志愿者漱口后用唾液采集器收集唾液，涂于滤纸，室温放置1～2年。

1.3 动物血痕

分别取3份猪血、10份牛血、13份羊血，涂于滤纸上，晾干后常温保存。

2 材料和方法

2.1 材料

ABO试剂条（Testlagret AB公司，瑞典），ABO血型物质溶解液（自制，含1%吐温80及4%吐温20）。

2.2 方法

（1）取0.3cm2血斑或唾液斑，剪碎后置于eppendorf试管中。在试管中加130μL血型物质溶解液，溶解5min，震荡混匀。

（2）检验前将试剂条从袋子中取出，如有冷藏保存的，必须平衡到室温，平置于台面上。

（3）吸取100μL待检样本溶解液，加入到试剂条的加样孔中，观察结果，结果判读参考[2]（陈旧斑迹10min后观察结果，最迟不要超过15min；新鲜斑迹10min内即可观察结果）。

3 实验结果

3.1 准确度结果

200 份志愿者的血斑和唾液斑经检验，有188份与志愿者事先报告的ABO血型分型一致，其余12份不一致的分型结果如下表所示，其中5份样本（82号、84号、91号、93号、109号）经试剂条多次检验分型明确，且与志愿者事先报告的分型不一致，怀疑有可能是志愿者报告错误；有4份样本（118号、121号、130号、133号）经试剂条多次检验分型不明确，且与志愿者事先报告的分型不一致，经DNA基因型检测后证实其基因型与志愿者事先报告的分型一致；有3份样本（136号、145号、152号）试剂条测定的分型与基因型一致，与志愿者报告的分型不一致。简而言之，200份样本中有4份样本采用研发的试剂条出现分型错误，8份样本为志愿者提供信息错误，准确率为98%。

表ABO血型分型结果不一致的样本

3.2 种属特异性实验结果

26份非人样本均未检出A、B血型物质，如下图所示。

图 牛、羊、猪ABO血型检测结果

3.3 灵敏度验证实验结果

新鲜采集的已知A型及B型人血，倍比稀释后取5μL经ABO血型快速检测系统检测，A型血检测灵敏度为1∶64，B型血检测灵敏度为1∶32。

4 讨论

4.1 准确度

临床上，为使ABO血型检测结果准确，应进行正反两个试验来分型：一是用标准A、B、O型血清鉴定红细胞上的抗原，为正向定型；另一种是用标准A、B、O型红细胞鉴定血清中的抗体，为反向定型。当正反试验的结果与常规的ABO分型原则不符的时候，提示可能是弱亚型或变异型。本实验使用的为血型正定型检测试剂条。有4份样本出现分型错误，其原因可能是：①样本浓度过低：导致大量胶体金液通过检测线，增加了在检测线上假阳性信号的可能性，以及在检测期后，它也会提高胶体金标粒子回流的可能性；②当花费很多时间来观测检测结果（通常是超过15min）时，膜就会变干，多余的金标粒子很有可能开始从吸附区向干燥后膜回流；③样品中含有可能与金标粒子或捕捉抗体发生非特异性结合的物质，例如细菌碎片也可能与捕捉抗体和金标粒子发生交叉反应。

4.2 种属特异性

动物的血型很复杂，例如狗的血型有5种，猫的血型有6种，羊的血型有9种，马的血型为9～10种，猪的血型有15种，牛的血型达40种以上，植物也有血型[3]。通过对26份猪、牛、羊血液的研究发现，所研发的ABO血型快速检测系统具有种属特异性。

4.3 灵敏度

A、B血型抗原的检测灵敏度分别为1∶64、1∶32，完全可以应用到实际案件检验中。因为红细胞的数量男性400～550万/μL，女性350～500万/μL[4]，在1∶32至1∶64倍比稀释之间表明本实验的灵敏度在红细胞数量10～40万/μL，而现场血痕量通常在1mL以上，高灵敏度表明检验能力更强。

综上，ABO血型快速检验技术的准确性、种属特异性、灵敏度符合法医检验工作的需要。此项技术为法医实践检案工作提供有效快捷的辅助技术手段，可提高基层检验部门的工作效率；避免了检材和耗材的浪费，质量安全有保证，有助于基层办案单位经济效益和社会效益的双提升。

[1]侯一平.法医物证学[M].北京:人民卫生出版社,2010:316.

[2]郝金萍,金鑫,周毅,等.胶体金技术检测ABO血型的应用[J].刑事技术,2014(2):17-18.

[3]王艳芝,李志仁,等.动植物的血型[J].河北农业科技,1989(3):19-20.

[4]王庭槐.生理学[M].北京:人民卫生出版社,2013:328.

D918.3

A

2095-7939(2016)01-0069-02

2015-09-17

金鑫（1981-），女，吉林榆树人，海南省公安厅刑警总队技术处主检法医师，主要从事法医遗传学研究。

孟凡骞）