山东省潍坊地区水貂阿留申病血清流行病学调查

葛爱民+崔晓娜+李汝春+朱俊平

摘要： 用对流免疫电泳方法对山东省潍坊地区8个水貂规模化养殖场和13个养殖户的682个送检样品进行阿留申病检测。结果显示：该地区水貂阿留申病平均阳性率为32.8%，说明潍坊地区水貂阿留申病的感染比较严重。其中规模化养殖场平均阳性率为33.3%，散养户阳性率为32.3%，二者差异不显著；来自诸城市的269个血清检样阳性率为48.7%，明显高于其他地区，说明诸城市为水貂阿留申病的主要流行地区；对幼龄水貂和成年水貂的阳性检出率进行比较的结果显示，水貂阿留申病的感染率未见明显的差异。

关键词： 山东潍坊地区；水貂阿留申病；流行病学调查；对流免疫电泳

中图分类号： S858.92 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2016）03-0260-02

水貂阿留申病是由阿留申病毒引起的一种慢性传染病，特征是终生病毒血症、持续感染、全身淋巴细胞增生、血清 γ-球蛋白增多、肾小球肾炎、动脉炎和肝炎[1]，我国动物检疫中属三类动物疫病[2]。自从上世纪40年代发现该病，国内外检测阳性率普遍较高，有的地区甚至可达80%[3]。水貂阿留申病可引起水貂死亡，影响种貂繁殖性能和造成毛皮质量下降。

山东省潍坊地区近几年水貂养殖规模逐年扩大，在很多县区已成为农民增收、致富的主要养殖项目之一，形成了一重大产业，既有规模化的养殖场，也有管理粗放的小规模散养户。在大规模、爆发式扩种形势下，存在着市场波动、品种不良、管理水平差、繁殖性能低等问题，其中水貂阿留申病的危害在本地自养殖水貂开始就一直存在，严重影响水貂养殖效益[4]。

阿留申病常用检测方法有碘凝集试验、对流免疫电泳试验、免疫复合物检测法、PCR方法等。本研究采用对流免疫电泳方法对潍坊地区水貂群进行阿留申病检测，以了解当地阿留申病的感染情况及危害程度，为养殖场水貂引种检疫提供参考依据，指导当地水貂阿留申病的防控。

1 材料与方法

1.1 病料来源

山东省潍坊地区8个水貂规模化养殖场和13个养殖户的682个随机血清样本。具体采样情况见表1。

1.2 仪器与器材

电泳仪（北京市六一仪器厂，DYY-5型）、台式离心机（长沙英泰仪器有限公司，TD4型）、电泳槽（上海天能科技有限公司，HE-120型）、塑料毛细采血管、微量可调移液器及配套吸头、打孔器等。

1.3 试剂

诊断试剂：水貂阿留申病对流免疫电泳试验抗原（批号：20130915）购自吉林特研生物技术有限公司，标准阳性血清、阴性血清均由农业部动物检疫所提供；电泳缓冲液：巴比妥钠缓冲液（三羟甲基氨基甲烷6.005 g，巴比妥钠10.31 g，叠氮钠0.2 g，各加入适量二级水溶解后，用盐酸将pH值调至 8.5～8.6，最后用二级水定容至1 000 mL）；0.8%琼脂糖：称取琼脂糖（电泳级）0.8 g，加入50 mL蒸馏水中，水浴煮沸溶化，再加入Tris-巴比妥钠缓冲液50 mL，趁热注板。

1.4 血清采集

趾尖采血，用塑料毛细管收集血液，经3 000 r/min离心 3～5 min，获得待检血清。

1.5 对流免疫电泳试验

根据SN/T 1314—2003《水貂阿留申病对流免疫电泳操作规程》[5]进行操作。

1.5.1 铺板 吸取已溶化并冷却到70 ℃左右的0.8%琼脂糖缓冲液，均匀地铺于玻璃板上，琼脂厚度约为3 mm。

1.5.2 打孔与封底 将已凝固的琼脂糖凝胶板放在打孔模板上打孔，孔径为3 mm，孔间距为4 mm。将打好孔的凝胶板在乙醇灯外焰上加热封底。

1.5.3 加样 将被检血清按照编号顺序用移液器从左向右逐份加到靠阳极端孔内，阴极端孔加入抗原，均以加满孔但不外溢为度。同时，每块板须设阳性和阴性血清对照。

1.5.4 电泳 将电泳槽两侧加满电泳缓冲液，将加样完毕的琼脂糖凝胶板平放于电泳槽架上，接通电源电泳，电压在 90 V 左右，电泳30～60 min后判定结果。

2 结果与分析

2.1 规模化场与散养户水貂被检血清的检测结果对比

表2数据显示，规模化养殖场水貂阿留申病阳性率为18%～52%，平均阳性率为33.3%，散养户阳性率为32.3%，经统计分析，规模化场与散养户差异不显著（P>0.05），说明水貂阿留申病的感染率与饲养规模大小无关。

2.2 不同地区水貂被检血清的检测结果

由表3可知，诸城市水貂养殖场和散养户阿留申病阳性率为48.7%，其他县区阳性率在16.7%～28%之间，经统计分析，诸城与安丘、昌邑、坊子、奎文、临朐5地相比水貂阿留申病血清阳性率差异显著（P<0.05），说明诸城市为水貂阿留申病的主要流行地区。

2.3 成年貂与幼年貂血清检测结果

由表4可知，356只成年貂检出阳性貂120只，阳性率为33.7%，326只幼龄貂检出阳性貂104只，阳性率为31.9%。经统计分析，成年貂与幼龄貂差异不显著（P>0.05），说明水貂阿留申病在不同年龄阶段感染率无明显差别。

3 讨论

通过对潍坊地区部分水貂养殖场和散养户的阿留申病毒感染情况调查，结果发现该地区水貂阿留申病平均阳性率为32.8%，这与我国其他一些地方报道的阳性水平相比略微偏高，但相差不是非常明显，比如2005年薛强等对青岛一家水貂场进行检测，440只种貂检出阳性水貂117只，阳性率为26.6%[6]；2014年陈超然等对威海荣成的2家水貂场用碘凝集试验检测，“+ + +”以上强阳性的占总数的25.3%[7]，说明我国水貂养殖集中区域阿留申病普遍存在，而且阳性率均不低。

调查研究水貂规模化养殖场和散养户阿留申病的阳性率，可以了解阿留申病在规模化饲养与管理水平相对较高的散养情况下的感染差别，结果表明二者差别不大，说明在目前的引种状况、疫病防控水平下，阿留申病的传播与饲养规模大小无关。

诸城市在水貂养殖规模上处于潍坊地区的领先地位，本次阿留申病检测结果显示，A、B、C 3个规模化养殖场阳性率明显高于其他地区，且散养户的阳性率也很高，这恰好反映了前几年诸城地区水貂引种、炒种的混乱局面，同时也体现了我国目前水貂养殖现状，即养殖密度越大的地区，环境污染越严重，疫病防控越困难，造成的经济损失也越大。

本次调查在采样阶段刻意均衡了各场成年水貂与幼龄水貂的数量，以达到充分了解水貂阿留申病在不同年龄阶段的感染差异，结果显示，虽然幼龄水貂较成年水貂阳性率偏低，但差异并不明显，这说明水貂阿留申病的垂直传播不可忽视。从而，无论本场自留种貂还是外场引种，严格检疫、及时淘汰阳性种貂至关重要。同时，虽然成年水貂生长期长，但养殖场（户）在成年阶段一般会对阿留申病症状明显的病貂及早淘汰，也是差异不明显的一大原因。

在检测方法的选择上，目前广泛使用碘凝集试验法和对流免疫电泳法。碘凝集试验要求条件低，方便、经济，但由于凡是造成丙种球蛋白增多的疾病都可以发生碘凝集反应，所以为非特异性方法，与其他方法相比有一定的欠缺，但在基层大规模筛查时为比较适合的检测方法[8-9]。对流免疫电泳法要求的检测设备相对简单，便于操作，检测成本也较低，准确率高，目前被普遍使用[10]。PCR方法成本太高，无法用于较大样本数检测，检测结果就不可能反映实际感染情况[10]。

本试验调查结果表明，潍坊地区水貂阿留申病的感染率较高，造成的直接或间接经济损失较大，说明大规模扩种，大量新养殖户涌入，使得对水貂阿留申病的危害认识不足，不清楚阿留申病检测及淘汰阳性种貂的重要性。由于水貂阿留申病无有效治疗方法，现阶段疫苗免疫效果也不是很理想，建议每年定期检疫2次，特别是在10、11月份检测，阳性貂可随季节皮一起取皮淘汰，需要3～5年的净化，逐渐培养出无阿留申病健康水貂群。

本次检测在重点养殖区域、采样数量及年龄结构方面进行综合考虑，旨在充分了解潍坊地区水貂阿留申病的感染分布与危害程度，为水貂养殖业的健康发展提供指导，为水貂阿留申病的科学防控提供依据。

参考文献：

[1]徐凤宇，王树志. 水貂阿留申病概述[J]. 经济动物学报，2006，10（2）：106-111.

[2]杨廷桂，陈桂先. 动物防疫与检疫技术[M]. 北京：中国农业出版社，2011：67.

[3]邵西群，肖家美，赵元楷，等. 水貂阿留申病的防制[J]. 经济动物学报，2001，5（1）：12-15.

[4]宋月峰，宋晓东，王晓龙. 水貂阿留申病的防治[J]. 中国动物保健，2013，15（4）：69.

[5]国家认证认可监督管理委员会. SN/T 1314—2003 水貂阿留申病对流免疫电泳操作规程[S]. 北京：中国标准出版社，2003.

[6]薛 强，郭绍聪. 水貂阿留申病的检测技术及应用效果[J]. 当代畜牧，2006（12）：40-41.

[7]陈超然，温建新.威海某地区水貂阿留申病的诊断与调查[J]. 天津农业科学，2014，20（4）：17-20.

[8]姚 彬，杜 杰，刘倩宏，等. 水貂阿留申病碘凝集反应与对流免疫电泳对比试验[J]. 吉林农业科技学院学报，2014，23（2）：14-16.

[9]王克祥，刘永逵，孙宏磊.水貂阿留申病的研究进展[J]. 中国畜牧兽医，2010，37（12）：223-225.

[10]肖家美，程世鹏，赵 艳.水貂阿留申病诊断方法的研究进展[J]. 特产研究，2007，29（2）：70-72.