低分子量酪氨酸磷酸酶在子宫颈鳞癌中的表达及在预后判定中的应用价值

庄永菊



低分子量酪氨酸磷酸酶在子宫颈鳞癌中的表达及在预后判定中的应用价值

庄永菊

【摘要】目的分析子宫颈鳞癌患者低分子量络氨酸磷酸酶(LMW-PTP)的表达和预后价值。方法选取2008 年3月至2014年8月石蜡标本160例，依照病变程度分为正常组，宫颈上皮内瘤变Ⅰ期、Ⅱ～Ⅲ期组和宫颈鳞癌组，采用RT-PCR及免疫组化法分析LMW-PTP水平。结果C33A、SiHa和CaSki细胞系中LMW-PTPmRNA表达明显高于HaCaT细胞(P＜0.05)，HaCat细胞中LMW-PTP表达最低，明显低于其他组(P＜0.05)，C33A、SiHa和CaSki细胞系中LMW-PTP呈高表达状态，HaCaT细胞中LMW-PTP表达呈弱阳性，C33A细胞、SiHa细胞、CaSKi细胞中表现均明显提高，正常宫颈上皮组织到子宫颈鳞癌进展中，LMW-PTP表达逐渐升高，中分化子宫颈鳞癌组织中LMW-PTP表达明显高于高分化组织(P＜0.05)，低分化子宫颈鳞癌组织中LMW-PTP表达明显高于中分化子宫颈鳞癌组织(P＜0.05)，子宫颈鳞癌组织中LMW-PTP表达与患者组织学程度密切相关(P＜0.05)。结论LMW-PTP在子宫颈鳞癌进展中起到重要作用，提示LMW-PTP表达有助于改善子宫颈鳞癌预后。

【关键词】宫颈鳞癌;低分子量络氨酸磷酸酶;免疫组化

宫颈癌是常见恶性肿瘤之一，相关资料显示，我国每年约新增13万宫颈癌患者，发病率仅次于乳腺癌［1］，近些年宫颈癌发病率有逐渐上升的趋势，由于宫颈癌侵袭、转移等，宫颈癌死亡率很高［2，3］。研究宫颈癌转移以及复发机制对患者治疗和预后有重要意义［4］。在以往分析络氨酸磷酸酶中，不少研究指出络氨酸磷酸酶能够参与很多生理过程，在内环境稳定以及免疫功能方面发挥出重要作用［5］，低分子量络氨酸磷酸酶(LMW-PTP)是络氨酸磷酸酶的一种，相关研究表明LMW-PTP与肿瘤转移有关［6］。为分析LMWPTP在子宫颈鳞癌中的表达和预后价值，整理患者临床资料，报告如下。

1　资料与方法

1.1一般资料选取我院2008年3月至2014年8月病理科石蜡标本182例为研究对象，依照组织病变分为正常宫颈组22例，宫颈上皮内瘤变Ⅰ期组(CINⅠ期组) 21例、CINⅡ～Ⅲ组49例和宫颈鳞癌组90例。宫颈癌组患者高分化6例，中分化54例，低分化30例;＞45岁43例，＜45岁47例;患者临床分期为Ⅰ期69例，Ⅱ期21例;肿瘤直径≤4 cm 44例，肿瘤直径＞4 cm 46例。所有石蜡标本均由2名以上高级职称病例医师确认，患者资料保存完整，4组患者在年龄、体重等一般资料差异无统计学意义(P＞0.05)。

1.2方法试验中所采用宫颈癌C33A、SiHa、CaSki 和HaCaT细胞系均由中国科学院上海细胞所提供，逆转录试剂盒购自美国Santa Cuze公司。细胞爬片经细胞胰酶消化后技术，接受细胞，加入灭菌盖玻片，采用PBS清洗2次，放入冰丙酮中固定，清洗备用。

1.2.1RT-PCR检测:采用TRlzol法(美国Invitrogen公司)提取细胞RNA，DNA酶(武汉华美生物工程有限公司)处理后采用氯仿和酚提取，加入DEPC溶解，依照逆转录酶体系转录为cDNA，经过35循环预变性、延伸，将扩增产物进行电泳检测。

1.2.2免疫组化检测:依照试剂盒说明书进行免疫组化，采用辣根酶标记，采用石蜡包埋2 mm切片，烘烤脱水，酒精脱水后加蒸馏水洗，加入柠檬酸抗原高压修复，室温下冷却，加入过氧化氢封闭，加入LMW_PTP抗体(美国Santa Cuze公司)，采用PBS清洗，经苏木精染色后脱水，中性树脂封片，采用PBS作为阴性对照试验。

1.3观察指标依照细胞角色程度分析抗原含量，“0分”为阴性，“1分”为弱阳性，“3分”为强阳性，依照阳性细胞数分为“0”代表没有出现阳性细胞，阳性细胞＜10%为“1分”，阳性细胞总是在11～50%为“2分”，阳性细胞在51%～80%为“3分”，阳性细胞＞80%为“4分”。1～4分为低表达，4分为高表达，0分为阴性表达。

1.4统计学分析应用SPSS 17.0统计软件，计数资料采用χ2检验，P＜0.05表示有统计学意义。

2　结果

2.1细胞系中LMW-PTPmRNA的表达RRT-PCR结果显示，人永生化正常表皮细胞HaCaT细胞中LMWPTPmRNA表达很低，C33A、SiHa和CaSki细胞系中LMW-PTPmRNA表达明显高于HaCaT细胞(P＜0.05)。见图1。

2.2细胞系中LMW-PTP蛋白表达Western Blot结果显示，HaCat细胞中LMW-PTP表达最低，明显低于其他组(P＜0.05)，C33A、SiHa和CaSki细胞系中LMW-PTP呈高表达状态。见图2、3。

图1　细胞系中LMW-PTPmRNA的表达

图2　细胞系中LMW-PTP蛋白表达

图3　细胞系中LMW-PTP蛋白的表达

2.3细胞系中LMW-PTP表达免疫组化染色实验结果表明HaCaT细胞中LMW-PTP表达呈弱阳性，C33A细胞、SiHa细胞、CaSKi细胞中表现均明显提高，见图4。

图4　细胞系中LMW-PTP表达

2.4宫颈上皮和宫颈鳞癌组织中LMW-PTP蛋白表达情况正常宫颈上皮组织到子宫颈鳞癌进展中，LMW-PTP蛋白表达逐渐升高，组与组之间差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

2.5宫颈鳞癌不同分化级别LMW-PTP蛋白表达中分化子宫颈鳞癌组织中LMW-PTP蛋白表达明显高于高分化组织(P＜0.05)，低分化子宫颈鳞癌组织中LMW-PTP表达明显高于中分化子宫颈鳞癌组织(P＜0.05)。见表2。

表1　宫颈上皮和宫颈鳞癌组织中LMW-PTP蛋白表达情况例(%)

表2　宫颈鳞癌不同分化级别LMW-PTP表达　例(%)

2.6影响因素分析子宫颈鳞癌组织中LMW-PTP表达与年龄、临床分析无明显关系，与患者组织学程度密切和淋巴结转移情况相关(P＜0.05)。见表3。

表3　影响因素分析　例

3　讨论

宫颈癌是常见妇科恶性肿瘤之一，由于具有侵袭性、转移性等病死率很高，宫颈癌早发现早治疗对宫颈癌患者有重要意义。LMW-PTP是一组分子量大小在18 kDa蛋白质，无特定表达特异性［7］。在研究LMWPTP中，一般认为LMW-PTP能够参与多种生理过程［8］，在癌症等病理情况下，LMW-PTP表达异常［9］。以往分析中有研究表明LMW-PTP的表达与肿瘤转移情况密切相关，而且在高度转移肿瘤中高表达率很高［10］，也有研究表明LMW-PTP在乳腺癌的发生和进展中起到促进作用［11］，在本组分析中通过RT-PCR及免疫组化法分析低分子量络氨酸磷酸酶在宫颈鳞癌组织表达。

在本研究中，RT-PCR表达研究结果显示，HaCat细胞系中LMW-PTPmRNA表达明显低于C33A、SiHa以及CaSKi宫颈癌细胞系，而且LMW-PTPmRNA表达在C33A、SiHa细胞系表达差异不明显，而且免疫组化结果显示LMW-PTP蛋白在C33A、SiHa细胞系表达同样无明显差异(P＞0.05)，提示宫颈鳞癌细胞系中LMW-PTPmRNA表达与感染无明显相关性。在以往分析LMW-PTP表达与临床症状关系中，不少研究指出LMW-PTP表达情况与患者组织学程度以及淋巴结转移情况相关［12］。本研究证实了这一点，分析LMWPTP与患者临床病例特征关系，研究结果表明子宫颈鳞癌组织中LMW-PTP表达与年龄、临床分析无明显关系，与患者组织学程度密切相关(P＜0.05)。宫颈上皮瘤变是正常宫颈组织到宫颈鳞癌病变发展中形成的一系列病理变化［13］，因此可以认为观察LMW-PTP在正常宫颈上皮组织、宫颈上皮瘤变和宫颈鳞癌的表达能够深入分析，LMW-PTP表达与宫颈鳞癌关系。在分析LMW-PTP作用研究中，认为不同肿瘤组织中LMW-PTP表达不同，从不同分化级别宫颈鳞癌LMWPTP表达中发现中分化子宫颈鳞癌组织中LMW-PTP蛋白表达明显高于高分化组织(P＜0.05)，低分化子宫颈鳞癌组织中LMW-PTP表达明显高于中分化子宫颈鳞癌组织(P＜0.05)，提示LMW-PTP与宫颈鳞癌进展密切相关。推测LMW-PTP能够起到细胞内蛋白磷酸化作用，能够调控宫颈癌细胞的转移，也可能是因为LMW-PTP破坏了细胞间钙桥连接，导致宫颈癌细胞浸润。

参考文献

1 刘纪昀，于燕妮，张著学，等.IMP3、P16在宫颈上皮内瘤变及浸润性癌中的表达及意义.中国妇幼保健，2014，29:1752-1755.

2 张金莉，王红英，潘泽民，等.维吾尔族子宫颈鳞癌患者血浆中DAPK基因启动子甲基化分析.中国妇幼保健，2014，29:682-684.

3 罗晓红.奈达铂致严重不良反应1例.医药导报，2015，34:125.

4 骆志红，杨华英，孙冬霞，等.年轻宫颈鳞癌组织中微血管形成及c-Myc和CO X-2表达的临床病理研究.医学综述，2015，21:911-913.

5 刘静，沈海滨，曾春英.微血管密度和中期因子在宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌患者中的表达及其意义.中国妇幼保健，2014，29:833-835.

6 郑岚岚.钙调磷酸酶调节蛋白1(RCAN1)与NF-κB相互作用机制及其影响白血病细胞活力的研究.山东大学学报，2011，23:105-107.

7 陈军莹，姚德生，宋红林.早期子宫颈鳞癌伴淋巴结转移患者癌组织中差异微小RNA的表达.中华妇产科杂志，2014，49:226-228.

8 杨桂春，于丽波，王玉霞.NOB1在宫颈鳞癌中的表达及其临床意义.肿瘤学杂志，2014，20:990-993.

9 张惠民，陈淑琴，姜红叶.Zeste同源增强子2和p53蛋白在宫颈鳞癌及癌前病变中的表达及临床意义.中华肿瘤杂志，2014，36:597-601.

10 汤艳.Survivin、HPV16-E7蛋白、VEGF在宫颈鳞癌及癌前病变中的表达及临床意义.中国现代医生，2014，52:101-103，107.

11 吕锡芳，顾雅娟，李福霞，等.Ubiquitin、P33ING1b和P53蛋白在宫颈鳞癌中的表达及意义.医学信息，2015，23:21-22.

12 刘慧，徐海伟，余涛，等.酪氨酸磷酸酶蛋白受体σ在成年大鼠视皮层可塑性再激活过程中的作用.中华实验眼科杂志，2013，31: 39-44.

13 周萍，肖宏，胡雅君.宫颈鳞癌组织中圆柱瘤基因及核因子κB蛋白的表达及其临床意义.中国妇幼保健，2014，29:4814-4817.

·论著·

The expression and clinical significance of low molecular weight protein tyrosine phosphatase in cervical carcinoma

ZHUANG Yongju.
The Fourth Hospital of Wuxi City，Affiliated Hospital of Jiangnan University，Jiangsu，Wuxi 214000，China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression and prognostic value of low molecular weight tyrosine phosphatase (LMW-PTP) in cervical squamous cell carcinoma (CSCC).Methods One hundred and sixty cases of paraffin specimens of our hospital from March 2008 to August 2014 were enrolled in the study.These paraffin specimens were divided into control group，cervical intraepithelial neoplasia phaseⅠgroup，phaseⅡ～Ⅲgroup and cervical squamous cell carcinoma group according to pathological changes degree.The levels of low molecular weight tyrosine phosphatase were detected by RT-PCR and immunohistochemistry.Results The expression levels of LMW-PTPmRNA in C33A，SiHa and CaSki cell lines were significantly higher than those in HaCaT cells (P＜0.05)，and the expression levels of LMW-PTP were the lowest in HaCat cells，as compared with those in the other groups (P＜0.05).The expression levels of LMW-PTP in C33A，SiHa and CaSki cell lines were increased，however，the expression of LMW-PTP in HaCaT cells was weakly positive，which in C33A cells，SiHa cells，CaSKi cells was obviously increased.The expression levels of LMW-PTP were gradually increased during the changes from normal cervical squamous epithelium to CSCC，moreover，the expression levels of LMW-PTPmRNA in moderately differentiated CSCC tissues were significantly higher than those in well differentiated CSCC tissues (P＜0.05)，furthermore，which in poorly differentiated CSCC tissues were significantly higher than those in moderately differentiated CSCC tissues (P＜0.05).Besides the expression levels of LMW-PTP in CSCC tissues were closely correlated to histological differentiation degree of patient with CSCC (P＜0.05).ConclusionThe low molecular weight tyrosine phosphatase plays an important role in the development of CSCC，which suggests that low molecular weight tyrosine phosphatase is helpful to improve prognosis of patients with CSCC.

【Key words】cervical squamous cell carcinoma; low molecular weight tyrosine phosphatase; immunohistochemistry

(收稿日期:2015－09－15)

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2016.04.006

【中图分类号】R 737.33

【文献标识码】A

【文章编号】1002－7386(2016) 04－0502－03

作者单位: 214000江南大学附属医院，江苏省无锡市第四人民医院