超声聚焦治疗对外阴营养不良组织中VEGR、Ang-Ⅱ及MMP-2表达的影响

范红伟　白凤楼　李清雪　郝国荣

050011　河北省石家庄市第四医院妇一科



·论著·

超声聚焦治疗对外阴营养不良组织中VEGR、Ang-Ⅱ及MMP-2表达的影响

范红伟白凤楼李清雪郝国荣

050011河北省石家庄市第四医院妇一科

【摘要】目的探讨超声聚焦治疗外阴营养不良的机制。方法采用免疫组化SABC法研究20例外阴营养不良患者超声治疗前治疗后1、3个月外阴组织中血管内皮生长因子(VEGF)、血管紧张素-Ⅱ (Ang-Ⅱ)和基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2，MMP-2)的表达。结果患者治疗后1、3个月外阴白色病变组织中VEGF、Ang-Ⅱ和MMP-2阳性率与治疗前比较，差异有统计学意义(P<0.05)，但治疗后1、3个月比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论聚焦超声治疗可使外阴营养不良组织中VEGF、Ang-Ⅱ和MMP-2的表达升高，其机制可能是通过改变外阴营养不良局部神经微血管结构和功能使外阴营养不良组织恢复正常。

【关键词】超声聚焦；外阴营养不良；VEGR；Ang-Ⅱ；MMP-2

外阴营养不良又称为外阴白色病变,以外阴组织颜色减退及外阴奇痒为主要临床特征。外阴营养不良疾病依据其病理类型不同可分为:外阴硬化性苔藓(LS)型、外阴鳞状细胞增生(SH)型及外阴硬化性苔藓合并外阴鳞状细胞增生型三种类型。外阴白色病变在临床上，主要以外阴奇痒及灼痛、色素减退、皮肤黏膜萎缩变薄及粗糙增厚为其特征性表现[1]。此疾病晚期多数伴有外阴表面皮肤的萎缩、阴道口的狭窄、性交不适等症状，甚至癌变。截止目前，外阴白色病变的病因和发病机制尚不完全明了，研究证实，具可能与微血管障碍、胶原纤维生成障碍、神经变性及病毒感染等诸多因素有密切关联[2]。外阴营养不良疾病，应用普通的外用药物效果欠佳，外阴聚焦超声治疗作为一种新兴的治疗手段，具有起效速度快、创面恢复快、外阴创伤小、有效、安全等诸多优点，可以仅作用于治疗区，并且不损伤治疗区邻近的皮肤组织。极少数患者发生皮肤的浅二度烧伤、水泡及溃疡，但经过抗炎治疗后均达到痊愈，损伤皮肤没有形成瘢痕。外阴聚焦超声作为一种新兴技术，在临床工作中，对外阴营养不良的治疗效果已得到一定的证实，且取得了显著成果，但其作用机制至今仍未完全明了。本研究采用免疫组织化学法，检测经过外阴聚焦超声治疗前后，外阴营养不良疾病组织中的血管内皮生长因子(VEGF)、血管紧张素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在外阴营养不良疾病组织中表达的变化情况，用以探讨外阴聚焦超声治疗外阴营养不良的机制。

1资料与方法

1.1一般资料收集2008年3月至2014年3月在石家庄市第四医院住院的外阴营养不良患者，进行外阴超声聚焦治疗后的20例患者，年龄22～59岁，平均年龄(44±10)岁。每例患者分别于治疗前及治疗后1、3个月，无瘙痒症状，经过患者知情同意情况下，对其原病变部位各取材1次。

1.2主要试剂与方法试剂选取：免疫组化法成套免疫组组织化学试剂盒、鼠抗人血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体-天津中平科技有限公司；鼠抗人血管紧张素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)免疫组化试剂盒-北京中山生物制品有限公司；鼠抗人MMP-2免疫组化试剂盒-北京中山生物制品有限公司。方法：采用SP法，免疫组化程序按试剂盒说明进行，采用免疫组织化学法进行检测，甲醛固定以后石蜡包埋切片，每种病理切片5张。

1.3结果判断VEGF、Ang-Ⅱ和鼠抗人MMP-2阳性反应为细胞浆内出现棕黄至深棕色颗粒。采用双盲方法进行，采用高倍显微镜(×400)随机选取10个高倍视野，每个视野均计数100个细胞。无阳性细胞的视野计为阴性(-)，根据选取视野中阳性细胞的百分率判断分为：<5% (+)，5～15% (++)，>15% (+++)。

1.4统计学分析用计算机图像分析系统对实验结果进行定量分析，应用SPSS 13.0统计软件。VEGF、Ang-Ⅱ和鼠抗人MMP-2在外阴白色病变中的表达采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1治疗前后外阴白色病变组织中VEGF的表达情况VEGF表达于外阴的表皮及真皮的成纤维细胞、上皮细胞及血管内皮细胞的胞浆和包膜中。治疗前外阴白色病变组织共20例，VEGF表达阳性者1例，阳性率5%；治疗后1个月获取标本10例，VEGF表达阳性者8例(+者4例，++者4例)，阳性率80%，两者阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)；治疗后3个月获取标本10例，VEGF表达阳性者9例(+者4例，++者5例)，阳性率90%，与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05)；与治疗后1个月比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1　治疗前后外阴白色病变组织中VEGF的表达情况　例

注：与治疗前比较，*P<0.05

2.2治疗前后外阴白色病变组织中Ang-Ⅱ的表达情况Ang-Ⅱ表达于血管内皮细胞的胞膜和胞浆。治疗前外阴白色病变组织共20例，Ang-Ⅱ表达阳性者2例，阳性率10%；治疗后1个月获取标本10例，Ang-Ⅱ表达阳性者9例(+者5例，++者4例)，阳性率90%，两者阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)；治疗后3个月获取标本10例，Ang-Ⅱ表达阳性者9例(+者4例，++者5例)，阳性率90%，与治疗前比较,差异有统计学意义(P<0.05)；与治疗后1个月比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

2.3治疗前后外阴白色病变组织中MMP-2的表达情况MMP-2表达于外阴组织血管内皮细胞的胞浆和

表2　治疗前后外阴白色病变组织中Ang-Ⅱ的表达情况　例

注：与治疗前比较，*P<0.05

胞膜之上。治疗前外阴白色病变组织共20例，鼠抗人MMP-2表达阳性者1例，阳性率5%；治疗后1个月获取标本10例，鼠抗人MMP-2表达阳性者9例(+者4例，++者5例)，阳性率90%，两者阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)；治疗后3个月获取标本10例，鼠抗人MMP-2表达阳性者9例(+者4例，++者5例)，阳性率90%，与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05)；与治疗后1个月比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3　治疗前后外阴白色病变组织中MMP-2的表达情况　例

注：与治疗前比较，*P<0.05

3讨论

外阴白色病变是指外阴组织受到外部刺激、自身免疫因素、过敏、局部营养失调、代谢因素，慢性损伤、感染及遗传因素导致的外阴皮肤、黏膜失去正常色泽、局部瘙痒或外阴及肛周皮肤萎缩变薄、出现灼热疼痛等[3]。外因鳞状上皮细胞增生型为表皮层角化过度和角化不全，棘细胞层过度增厚；外因硬化性苔藓早期为真皮乳头层水肿、血管扩张，进一步可发展为表皮层角化，毛囊角质栓塞，基底细胞液化变性，黑色素细胞减少，极少可以发展为浸润癌。近年，外阴聚焦超声治疗广泛应用于临床。外阴聚焦超声具有可穿透生物组织，作用于组织内部，焦点处可集中大部分能量，使焦点及周围组织迅速升温，最终使病变组织变性，促进组织重建和微循环改善，同时其具有热效应、机械效应和生物效应。相关病理研究发现，在治疗初期病变部位可出现充血水肿、表皮保持完整，治疗后外阴上皮组织结构恢复[4]。

研究发现，外银白色病变患者经外阴聚焦超声治疗后，患者临床症状具有明显改善，同时外阴外观、组织结构得到恢复[5]。赵建武等[5]发现，聚焦超声治疗兔外阴皮肤，病理和组织学改变如下：外阴表皮和真皮层充血水肿，乳头层轻度充血水肿；外阴水肿逐步消退、组织充血水肿消退，伴有炎性细胞浸润；外阴组织恢复正常，可见新生毛细血管。进行超微结构观察，未见细胞不可逆损伤本研究结果表明：外阴白色病变组织中VEGF、Ang-Ⅱ和MMP-2，在经过外阴聚焦超声治疗1个月及3个月后，表达较治疗前明显升高。聚焦超声治疗后外阴皮肤病理恢复正常。

VEGF是1989年在牛垂体滤泡星状细胞培养物中，纯化分离到的一种肝素结合因子[6]，已被认为是现今作用最强、特异性最高的调控因子之一，VEGF主要作用于血管内皮细胞，与内皮细胞上的受体高亲和力结合后，能够作为内皮细胞特异性有丝分裂原，促进血管内皮细胞增生、毛细血管袢形成；与此同时，可增加微血管的通透性，通过诱导细胞间质产生，从而促进体内新生血管的生成[7]。许多研究都证实VEGF还具有保护神经与营养神经的作用，并且能够促进神经元细胞的生长及雪旺细胞的分裂[8]。本研究证实，VEGF在外阴超声聚焦治疗后的外阴营养不良组织中的表达较未治疗的外阴营养不良组织明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。

Ang-Ⅱ可以在细胞间及细胞内发挥促进血管内皮细胞生长的作用[9]。Ang-Ⅱ促进血管生成机制如下：当Ang-Ⅱ与血管内皮细胞的表面相结合时,Ang-Ⅱ与细胞表面的肌动蛋白(actin)相结合,从而进一步激发血浆纤溶酶原的活性,刺激细胞中相关的蛋白水解酶(cell associated proteolytic)活性,溶解细胞间基质,使内皮细胞连接蛋白活化,进而引导细胞的侵袭及迁移[10],另外,Ang-Ⅱ能够刺激血管内皮细胞增殖、调节血管内皮细胞内有丝分裂原的活性、使细胞发生增生、形成管腔结构等一系列改变[11]。本研究证实，Ang-Ⅱ在外阴超声聚焦治疗后的外阴营养不良组织中的表达较未治疗的外阴营养不良组织明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。

MMPs与肿瘤恶性细胞的迁移、侵袭相关的ECM降解过程有着不可分割的密切关联[12]，MMPs是一组锌离子依赖性内肽酶，，其中明胶酶有两种，明胶酶A(MMP-2)可以降解Ⅳ胶原、明胶、基底膜以及多种其他类型的胶原、层粘连蛋白、纤维连接蛋白，它的活性可以被金属蛋白酶组织抑制剂(TIMPs)和巨球蛋白所抑制[13]。MMPs的活性调节组织生成过程中，扮演重要作用，其在加快血管内皮细胞形成新生的血管，同时可以通过与整合素的相互活化增强细胞间的黏附，组织重建、炎症及在血管生成中起很强的促进作用[14,15]。MMP-2有促进血管生成和降解细胞外基质中的成分等作用。本研究证实，MMP-2在外阴超声聚焦治疗后的外阴营养不良组织中的表达较未治疗的外阴营养不良组织明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。

综上所述，外阴聚焦超声治疗外阴营养不良组织后，可使内源性VEGF、Ang-Ⅱ及MMP-2的表达较前明显升高，从而使外阴营养不良组织恢复正常，经本研究证实：外阴聚焦超声治疗外阴营养不良组织后，使正常的神经、血管的结构及功能得以维持，使外阴组织结构恢复正常。以上研究初步证实了，在外阴聚焦超声治疗外阴营养不良疾病后，外阴组织存在大分子表达水平的变化，这些理论的最终证实，也使得外阴营养不良疾病的发病机制进一步明确。

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(收稿日期：2015-09-08)

【中图分类号】R 711.72

【文献标识码】A

【文章编号】1002-7386(2016)06-0893-03

通讯作者：郝国荣，050011河北省石家庄市第四医院妇一科；

doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2016.06.031

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