苯丙烯类葡萄糖氧苷的合成及其抗缺氧活性

马　臣， 张文彬， 李　霞， 李灵芝,*， 吴宇强， 张永亮， 葛肖健,3

(1. 天津医科大学 药学院，天津　300070； 2. 武警后勤学院 a.药物化学教研室；

b. 天津市职业与环境危害防制重点实验室，天津　300309； 3. 天津中医药大学 药学院，天津　300193)



·研究论文·

苯丙烯类葡萄糖氧苷的合成及其抗缺氧活性

马臣1,2a， 张文彬1,2a， 李霞2a， 李灵芝2a,2b*， 吴宇强1,2a， 张永亮2b， 葛肖健2a,3

(1. 天津医科大学 药学院，天津300070； 2. 武警后勤学院 a.药物化学教研室；

b. 天津市职业与环境危害防制重点实验室，天津300309； 3. 天津中医药大学 药学院，天津300193)

摘要：以取代苯甲醛(1a～1t)为原料，通过Knoevenagel缩合、酯化和LiAlH4还原等反应制得苯丙烯醇衍生物(3a～3t)；以取代肉桂醛(1u～1x)为原料，经NaBH4还原制得苯丙烯醇衍生物(3u～3x); 3a～3x与全乙酰化溴代葡萄糖经Koenigs-Knorr偶联反应及MeONa/MeOH体系脱除乙酰保护基反应，合成了24个苯丙烯类葡萄糖氧苷(5a～5x)，其中5c， 5f～5x为新化合物，其结构经1H NMR和ESI-MS表征。采用MTT法测定了5对缺氧损伤的内皮细胞(EA.hy926)的抗缺氧活性。实验结果表明： 5b， 5e， 5g， 5p， 5q， 5s， 5t和5y对EA.hy926的抗缺氧活性均高于红景天苷。

关键词：苯丙烯类； 红景天苷； 合成； 内皮细胞； 抗缺氧活性

红景天是目前应用较为普遍的抗高原反应植物药。红景天苷(Chart 1)是红景天的主要活性成分，具有抗缺氧、抗疲劳、抗肿瘤、抗衰老、抗病毒等广泛的生物活性[1-5]。但由于合成困难[6]、稳定性差[7]和生物利用度低[8]等缺点限制了其临床应用。

为了获得活性高且便于合成的红景天苷类似物，本课题组曾考察了糖基、苯环侧链及糖苷键对化合物抗缺氧活性的影响[9]。研究发现，糖基类型对该类化合物活性影响不大；将红景天苷双碳侧链缩短为一碳侧链时，化合物的抗缺氧活性无明显影响；当将分子中的氧苷键以生物电子等排体氮苷键置换时，化合物的抗缺氧活性普遍得到改善；此外苯环上存在给电子取代基时也有助于增强化合物活性[9]。Menezes J C等[10]报道取代肉桂酸酯类化合物具有较好的抗氧化和清除自由基活性，可能是因为结构中存在羟基肉桂酸片段。因此，本研究以丙烯侧链替代红景天苷结构中的双碳侧链，设计并合成了一系列苯丙烯类葡萄糖氧苷，期望得到抗缺氧活性更好且易于合成的化合物。

本文以取代苯甲醛(1a～1t)为原料，通过Knoevenagel缩合、酯化反应和LiAlH4还原制得苯丙烯醇衍生物(3a～3t)；以取代肉桂醛(1u～1x)为原料，经NaBH4还原制得苯丙烯醇衍生物(3u～3x); 3a～3x与全乙酰化溴代葡萄糖(4， Chart 1)经Koenigs-Knorr偶联反应及MeONa/MeOH体系脱除乙酰保护基反应，合成了24个苯丙烯类葡萄糖氧苷(5a～5x, Scheme 1)，其中5c， 5f～5x为新化合物。

同时，为了比较苯环侧链的改变对抗缺氧活性的影响，以4-羟基苯甲醛为原料，按文献[9]方法经羟基乙酰化保护反应，NaBH4还原反应，成苷反应及脱乙酰化反应制得侧链为一碳的葡萄糖氧苷(5y， Chart 2)；以4-羟基苯丙酸为原料，经酯化反应[11]、羟基苄基保护反应[12]、还原反应[13]、成苷反应、脱乙酰化反应及脱苄基保护反应[14]等6步反应制得侧链为饱和三碳链的葡萄糖氧苷(5z，Chart 2)。所得26个化合物的结构经1H NMR和ESI-MS表征。并以内皮细胞(EA.hy 926)为靶细胞建立细胞缺氧模型，采用MTT法检测细胞代谢活力，测定了5a～5z的抗缺氧活性。

Chart 2

CompabcdefghR2-OMe3-OMe2-Cl3,4-2OMe4-OMe4-OEt3-OMe,4-OEt3,4-2OEtCompijklmnopR4-OBn2,3-2OMe2-OEt,3-OMe2-OMe,5-Br2-OEt,5-Br2,4-2OMe2,4-2OEt3,4-二氧亚甲基CompqrstuvwxR2,3,4-3OMe2-OMe,5-Cl2-OEt,5-Cl4-OHH2-Br4-NO24-F

Scheme 1

1实验部分

1.1仪器与试剂

X-5型显微熔点仪(温度未校正)；Bruker AVANCE 400 MHz型核磁共振仪；Bruker Maxis型质谱仪；Thermo Scientific 3111型CO2培养箱；Bio-Rad 680型全波长酶标仪；TS100型倒置相差显微镜。

1a～1x，天津希恩思化学试剂有限公司；柱层析硅胶(100～200目)，GF254硅胶板，山东青岛海洋化工公司；人脐静脉内皮细胞株(EA.hy926)，中国科学院细胞库；其余所用试剂均为色谱纯或分析纯。

1.2合成

(1) 2a～2t的合成(以2a为例)

在反应瓶中加入2-甲氧基苯甲醛(1a)2.72 g(20 mmol)和DMF 20 mL，搅拌使其溶解；加入丙二酸6.24 g(60 mmol)，二甲氨基吡啶(DMAP)0.25 g及哌啶1 mL，缓慢升温至65 ℃，反应12 h(TLC监测)。反应液冷却至室温，倒入冰水(200 mL)中，用稀盐酸调至pH 3，析出白色絮状固体。减压抽滤，滤饼用冰水(100 mL)反复洗涤，干燥得白色固体2-甲氧基苯丙烯酸(2a)，收率73%。

用类似方法合成类白色固体2b～2t，收率70%～80%。

(2) 3a～3t的合成(以3a为例)

在反应瓶中加入2a 2.68 g(15 mmol)和无水甲醇20 mL，搅拌使其溶解；于-5 ℃缓慢滴加二氯亚砜5 mL，滴毕，于室温反应30 min；于30 ℃(浴温)反应2 h(TLC监测)。减压蒸除溶剂及过量的二氯亚砜，加入无水THF 20 mL，降温至-40 ℃，缓慢加入LiAlH40.76 g(20 mmol)，加毕，N2保护下同温反应2 h(TLC监测)。缓慢滴加冰水(0.76 mL)淬灭过量的LiAlH4，依次加入10%NaOH溶液0.76 mL和冰水2.28 mL，缓慢升温至0 ℃;加入无水硫酸镁2 g，反应30 min。用硅藻土减压助滤，滤饼用乙酸乙酯反复洗涤；滤液中加入蒸馏水200 mL，用乙酸乙酯(3×200 mL)萃取，合并有机相，依次用饱和食盐水和蒸馏水洗涤，无水硫酸镁干燥，减压蒸除溶剂得淡黄色油状液体3a，收率82%。

用类似方法合成淡黄色油状液体3b～3t，收率75%～85%。

(3) 3u～3x的合成通法(以3u为例)

在反应瓶中加入反式肉桂醛(1u)0.79 g(6 mmol)和无水甲醇10 mL，降温至0 ℃，缓慢加入NaBH40.34 g(9 mmol)，加毕，反应2 h(TLC监测)。倾入冰水(200 mL)中，用稀盐酸调至pH<7，用乙酸乙酯(3×200 mL)萃取，合并有机相，依次用饱和食盐水和蒸馏水洗涤，无水硫酸镁干燥，减压除去溶剂得淡黄色油状物，真空干燥得粗品3u(直接用于下一步)。

用类似方法合成淡黄色油状液体3u～3x。

(4) 5a～5x的合成(以5a为例)

在反应瓶中加入3a 0.66 g(4 mmol)和无水二氯甲烷10 mL，搅拌使其溶解；依次加入4 2.05 g(5 mmol)和4Å分子筛2 g，于室温反应30 min。加入碳酸银1.38 g， N2保护下于室温反应20 h(TLC监测)。用硅藻土减压助滤，滤饼用二氯甲烷反复洗涤；合并滤液和洗液，减压蒸除溶剂得黄色油状物A。

将A溶于无水甲醇10 mL中，加入甲醇钠0.1 g(1.85 mmol)，于室温反应30 min(TLC监测)。用稀盐酸调至pH 7，减压蒸除溶剂后经硅胶柱(100～200目)色谱[梯度洗脱剂：V(二氯甲烷) ∶V(甲醇)=30 ∶1～20 ∶1]纯化得白色固体5a。

用类似方法合成白色固体5b～5x。

(E)-3-(2-甲氧基苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5a)： 收率30%， m.p.110.3～113.7 ℃；1H NMRδ： 2.95～3.21(m， 4H)， 3.41～3.50(m， 1H)， 3.63～3.73(m， 1H)， 3.80(s， 3H)， 4.16～4.24(m， 2H)， 4.44～4.87(m， 4H)， 5.01(d，J=5.2 Hz， 1H)， 6.28～6.37(m， 1H)， 6.84(d，J=16.0 Hz， 1H)， 6.92(t，J=14.8 Hz， 1H)， 7.00(d，J=8.4 Hz， 1H)， 7.25(t，J=5.7 Hz， 1H)， 7.46(d，J=7.6 Hz， 1H)； ESI-MSm/z： 349.2{[M+Na]+}。

(E)-3-(3-甲氧基苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5b)： 收率33%， m.p.117.5～119.5 ℃；1H NMRδ： 2.98～3.17(m， 4H)， 3.42～3.47(m， 1H)， 3.64～3.70(m， 1H)， 3.76(s， 3H)， 4.13～4.28(m， 2H)， 4.40～4.91(m， 4H)， 5.03(d，J=5.2 Hz， 1H)， 6.30～6.45(m， 1H)， 6.63(d，J=16.0 Hz， 1H)， 6.82(dd，J=7.2 Hz， 2.4 Hz， 1H)， 7.00(t，J= 5.4 Hz， 2H)， 7.24(t，J=7.8 Hz， 1H)； ESI-MSm/z： 349.3{[M+Na]+}。

(E)-3-(2-氯苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5c)： 收率28%， m.p.124.6～125.7 ℃；1H NMRδ： 2.88～3.01(m， 4H)， 3.45～3.81(m， 2H)， 4.12～4.94(m， 4H)， 4.17～4.31(m， 2H)， 5.02(d，J=5.2 Hz， 1H)， 6.28～6.47(m， 1H)， 6.96(d，J=16.0 Hz， 1H)， 7.32～7.36(m， 2H)， 7.58(d，J=7.2 Hz， 1H)， 7.70(dd，J=7.6 Hz， 1.7 Hz， 1H)； ESI-MSm/z： 355.2{[M+Na]+}。

(E)-3-(3，4-二甲氧基苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5d)： 收率34%, m.p.107.3～110.3 ℃；1H NMRδ： 2.95～3.21(m， 4H)， 3.45～3.72(m， 2H)，3.75(s， 3H)， 3.78(s， 3H)， 4.15～4.24(m， 2H)， 4.50～4.94(m， 4H)， 5.05(d，J=4.8 Hz， 1H)， 6.25～6.30(m， 1H)， 6.59(d，J=15.6 Hz， 1H)， 6.92(m， 2H)， 7.06(s， 1H)； ESI-MSm/z： 379.3{[M+Na]+}。

(E)-3-(4-甲氧基苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5e)： 收率29%， m.p.102.1～105.4 ℃；1H NMRδ： 2.96～3.20(m， 4H)， 3.42～3.50(m， 1H)， 3.64～3.72(m， 1H)， 3.75(s， 3H)， 3.90～4.33(m， 2H)， 4.38～4.90(m， 4H)， 5.03(d，J=4.8 Hz， 1H)， 6.15～6.25(m， 1H)， 6.60(d，J=16.0 Hz， 1H)， 6.90(d，J=8.0 Hz， 2H)， 7.38(d，J=8.4 Hz， 2H)； ESI-MSm/z： 349.2{[M+Na]+}。

(E)-3-(2-乙氧基苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5f)： 收率25%， m.p.127.9～130.1 ℃；1H NMRδ： 1.32(t，J=4.6 Hz， 3H)， 2.96～3.18(m， 4H)， 3.40～3.51(m， 1H)， 3.62～3.75(m， 1H)， 3.97～4.07(m， 2H)， 4.14～4.24(m， 2H)， 4.38～4.87(m， 4H)， 5.02(d，J=5.8 Hz， 1H)， 6.09～6.28(m， 1H)， 6.59(d，J=16.0 Hz， 1H)， 6.88(d，J=8.4 Hz， 2H)， 7.36(d，J=8.4 Hz， 2H) ； ESI-MSm/z： 363.2{[M+Na]+}。

(E)-3-(3-甲氧基-4-乙氧基苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5g)： 收率20%， m.p.128.1～130.2 ℃；1H NMRδ： 1.31(t，J=4.7 Hz， 3H)， 2.96～3.13(m， 4H)， 3.42～3.47(m， 1H)， 3.69(d，J=11.4 Hz， 1H)， 3.78(s， 3H)， 3.93～4.02(m， 2H)， 4.14～4.25(m， 2H)， 6.17～6.32(m， 1H)， 6.57(d，J=14.0 Hz， 1H)， 6.90(q，J=8.4 Hz， 2H)， 7.06(s， 1H)； ESI-MSm/z： 393.3{[M+Na]+}。

(E)-3-(3，4-二乙氧基苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5h)： 收率23%， m.p.120.6～124.5 ℃；1H NMRδ： 1.21～1.36(m， 6H)， 2.97～3.18(m， 4H)， 3.44～3.49(m， 1H)， 3.69(d，J=11.6 Hz， 1H)， 3.92～4.10(m， 4H)， 4.13～4.25(m， 2H)， 6.22(dt，J=15.9 Hz， 6.0 Hz， 1H)， 6.55(d，J=16.0 Hz， 1H)， 6.79～6.96(m， 2H)， 7.04(s， 1H)； ESI-MSm/z： 407.2{[M+Na]+}。

(E)-3-(4-苄氧基苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5i)： 收率30%， m.p.128.7～129.9 ℃；1H NMRδ： 2.96～3.18(m， 4H)， 3.45(dt，J=11.5 Hz， 5.6 Hz， 1H)， 3.66～3.72(m， 1H)， 4.12～4.26(m， 2H)， 4.40～4.95(m， 4H)， 5.06(d，J=4.8 Hz， 1H)， 5.11(s， 2H)， 6.21(dt，J=16.0 Hz， 6.0 Hz， 1H)， 6.60(d，J=16.0 Hz， 1H)， 6.98(d，J=8.4 Hz， 2H)， 7.31～7.36(m， 7H)； ESI-MSm/z： 425.3{[M+Na]+}。

(E)-3-(2，3-二甲氧基苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5j)： 收率34%， m.p.131.7～133.8 ℃；1H NMRδ： 2.99～3.17(m， 4H)， 3.45(dd，J=11.2 Hz， 5.3 Hz， 1H)， 3.63～3.69(m， 1H)， 3.70(s， 3H)， 3.80(s， 3H)， 4.24(dd，J=12.6 Hz， 7.0 Hz， 2H)， 4.42～4.96(m， 4H)， 5.09(d，J=4.8 Hz， 1H)， 6.35(dt，J=16.1 Hz， 5.9 Hz， 1H)， 6.86(d，J=16.0 Hz， 1H)， 6.95(d，J=9.2 Hz， 1H)， 7.04(t，J=6.7 Hz， 1H)， 7.14(d，J=8.8 Hz， 1H)； ESI-MSm/z： 379.2{[M+Na]+}。

(E)-3-(3-甲氧基-2-乙氧基苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5k)： 收率31%， m.p.114.2～116.0 ℃；1H NMRδ： 1.28(t，J=4.7 Hz， 3H)， 2.97～3.19(m， 4H)， 3.41～3.50(m， 1H)， 3.64～3.73(m， 1H)， 3.78(s， 3H)， 3.91(q，J=7.0 Hz， 2H)， 4.24(dd，J=12.2 Hz， 7.1 Hz， 2H)， 4.42～4.96(m， 4H)， 5.08(d，J=4.8 Hz， 1H)， 6.34(dt，J=16.1 Hz， 6.0 Hz， 1H)， 6.87(d，J=16.4 Hz， 1H)， 6.94(dd，J=8.4 Hz， 1.2 Hz， 1H)， 7.02(t，J=5.3 Hz， 1H)， 7.14(dd，J=9.2 Hz， 1.2 Hz， 1H)； ESI-MSm/z： 393.2{[M+Na]+}。

(E)-3-(2-甲氧基-5-溴苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5l)： 收率21%， m.p.115.8～117.4 ℃；1H NMRδ： 3.03～3.10(m， 4H)， 3.44～3.68(m， 2H)， 3.68(s， 3H)， 4.21(t，J=8.5 Hz， 2H)， 6.28～6.50(m， 1H)， 6.80(d，J=15.2 Hz， 1H)， 7.29～7.64(m， 3H)； ESI-MSm/z： 443.1{[M+K]+}。

(E)-3-(2-乙氧基-5-溴苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5m)： 收率33%， m.p.122.1～125.3 ℃；1H NMRδ： 2.09(t，J=10.2 Hz， 3H)， 3.03～3.11(m， 4H)， 3.43～3.45(m， 1H)， 3.67～3.69(m， 1H)， 3.79～3.81(m， 2H)， 4.18～4.25(m， 2H)， 4.34～4.90(m， 4H)， 6.28～6.46(m， 1H)， 6.78(d，J=16.4 Hz， 1H)， 6.99～7.62(m， 3H)； ESI-MSm/z： 441.2{[M+Na]+}。

(E)-3-(2，4-二甲氧基苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5n)： 收率35%， m.p.99.3～111.9 ℃；1H NMRδ： 2.98～3.15(m， 4H)， 3.40～3.46(m， 1H)， 3.69～3.72(m， 1H)， 3.77(s， 3H)， 3.80(s， 3H)， 4.10～4.26(m， 2H)， 4.39～4.94(m， 4H)， 5.05(d，J=5.2 Hz， 1H)， 6.15～6.24(m， 1H)， 6.52(d，J=15.0 Hz， 1H)， 6.55(d，J=2.0 Hz， 1H)， 6.74(d，J=16.0 Hz， 1H)， 7.39(d，J=8.8 Hz， 1H)； ESI-MSm/z： 379.2{[M+Na]+}。

(E)-3-(2，4-二乙氧基苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5o)： 收率30%， m.p.108.9～120.7 ℃；1H NMRδ： 1.31～1.35(m， 6H)， 3.00～3.15(m， 4H)， 3.43～3.48(m， 1H)， 3.65～3.71(m， 1H)， 4.00～4.05(m， 4H)， 4.11～4.24(m， 2H)， 4.37～4.94(m， 4H)， 5.04(d，J=5.2 Hz， 1H)， 6.16～6.24(m， 1H)， 6.45(d，J=14.0 Hz， 1H)， 6.51(d，J=2.0 Hz， 1H)， 6.74(d，J=16.0 Hz， 1H)， 7.37(d，J=8.4 Hz， 1H)； ESI-MSm/z： 407.3{[M+Na]+}。

(E)-3-(3，4-二亚甲氧基苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5p)： 收率35%， m.p.112.6～114.8 ℃；1H NMRδ： 2.98～3.16(m， 4H)， 3.45(dt，J=11.6 Hz， 5.7 Hz， 1H)， 3.65～3.72(m， 1H)， 4.13～4.22(m， 2H)， 4.40～4.96(m， 4H)， 5.06(d，J=4.9 Hz， 1H)， 6.01(s， 2H)， 6.22(dt，J=15.9 Hz， 6.0 Hz， 1H)， 6.58(d，J=16.0 Hz， 1H)， 6.87(s， 2H)， 7.11(s， 1H)； ESI-MSm/z： 363.2{[M+Na]+}。

(E)-3-(2，3，4-三甲氧基苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5q)： 收率30%， m.p.113.5～117.9 ℃；1H NMRδ： 2.95～3.17(m， 4H)， 3.45(dt，J=11.5 Hz， 5.6 Hz， 1H)， 3.69(dd，J=10.8 Hz， 6.6 Hz， 1H)， 3.74(s， 3H)， 3.75(s， 3H)， 3.80(s， 3H)， 4.21～4.27(m， 2H)， 4.41～4.95(m， 4H)， 5.07(d，J=5.2 Hz， 1H)， 6.24(dt，J=16.1 Hz， 6.1 Hz， 1H)， 6.74(d，J=16.0 Hz， 1H)， 6.81(d，J=8.8 Hz， 1H)， 7.23(d，J=8.4 Hz， 1H)； ESI-MSm/z： 409.2{[M+Na]+}。

(E)-3-(2-甲氧基-5-氯苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5r)： 收率34%， m.p.129.1～135.2 ℃；1H NMRδ： 3.03～3.19(m， 4H)， 3.43～3.47(m， 1H)， 3.68(dd，J=11.4 Hz， 5.9 Hz， 1H)， 3.81(s， 3H)， 4.20(dd，J=11.0 Hz， 7.0 Hz， 2H)， 4.42～4.96(m， 4H)， 5.07(d，J=5.2 Hz， 1H)， 6.42(dt，J=16.1 Hz， 5.8 Hz， 1H)， 6.80(d，J=16.0 Hz， 1H)， 7.03(d，J=8.8 Hz， 1H)， 7.28(dd，J=8.8 Hz， 2.4 Hz， 1H)， 7.50(d，J=2.8 Hz， 1H)； ESI-MSm/z： 383.2{[M+Na]+}。

(E)-3-(2-乙氧基-5-氯苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5s)： 收率30%， m.p.112.9～114.1 ℃；1H NMRδ： 1.35(t，J=4.7 Hz， 3H)， 3.02～3.19(m， 4H)， 3.43～3.48(m， 1H)， 3.68(dt，J=13.4 Hz， 6.8 Hz， 1H)， 4.02～4.08(m， 2H)， 4.16～4.27(m， 2H)， 4.41～4.96(m， 4H)， 5.05(d，J=5.2 Hz， 1H)， 6.43(dt，J=16.1 Hz， 5.8 Hz， 1H)， 6.82(d，J=16.0 Hz， 1H)， 7.01(d，J=8.8 Hz， 1H)， 7.24(dd，J=11.2 Hz， 2.4 Hz， 1H)， 7.50(d，J=2.8 Hz， 1H)； ESI-MSm/z： 397.2{[M+Na]+}。

(E)-3-(4-羟基苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5t)： 收率36%， m.p.115.0～116.3 ℃；1H NMRδ： 3.02～3.19(m， 4H)， 3.45(dt，J=11.4 Hz， 5.6 Hz， 1H)， 3.64～3.71(m， 2H)， 4.12～4.21(m， 2H)， 4.36～4.95(m， 4H)， 5.05(d，J=5.2 Hz， 1H)， 6.12(dt，J=16.0 Hz， 6.1 Hz， 1H)， 6.53(d，J=16 Hz， 1H)， 6.71(d，J=8.8 Hz， 2H)， 7.26(d，J=8.4 Hz， 2H)， 9.51(s， 1H)； ESI-MSm/z： 335.2{[M+Na]+}。

(E)-3-苯基-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5u)： 收率27%， m.p.124.3～125.2 ℃；1H NMRδ： 3.05～3.19(m， 4H)， 3.44～3.48(m， 1H)， 3.65～3.71(m， 1H)， 4.18～4.26(m， 2H)， 4.47～4.91(m， 4H)， 5.04(d，J=4.8 Hz， 1H)， 6.36(dt，J=16.0 Hz， 5.8 Hz， 1H)， 6.67(d，J=16.0 Hz， 1H)， 7.25(dd，J=7.2 Hz， 3.2 Hz， 1H)， 7.34(t，J=5.1 Hz， 2H)， 7.44(d，J=7.6 Hz， 2H)； ESI-MSm/z： 319.3{[M+Na]+}。

(E)-3-(2-溴苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5v)： 收率42%， m.p.134.2～137.4 ℃；1H NMRδ： 3.01～3.19(m， 4H)， 3.47(dd，J=11.6 Hz， 5.5 Hz， 1H)， 3.70(d，J=11.4 Hz， 1H)， 4.22～4.31(m， 2H)， 4.45～4.77(m， 4H)， 5.10(d，J=5.2 Hz， 1H)， 6.39(dt，J=15.9 Hz， 5.7 Hz， 1H)， 6.90(d，J=16.0 Hz， 1H)， 7.22(t，J=8.8 Hz， 1H)， 7.38(t，J=7.2 Hz， 1H)， 7.62(dd，J=7.2 Hz， 0.8 Hz， 1H)， 7.68(dd，J=9.2 Hz， 1.2 Hz， 1H)； ESI-MSm/z： 398.3{[M+Na]+}。

(E)-3-(4-硝基苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5w)： 收率39%， m.p.94.8～100.3 ℃；1H NMRδ： 3.03～3.19(m， 4H)， 3.43～3.48(m， 1H)， 3.68(dt，J=15.0 Hz， 7.5 Hz， 1H)， 4.23(d，J=8.0 Hz， 1H)， 4.20～4.32(m， 2H)， 4.54(t，J=6.0 Hz， 1H)， 4.93(d，J=5.2 Hz， 1H)， 4.98(d，J=4.4 Hz， 1H)， 5.13(d，J=4.8 Hz， 1H)， 6.67(dt，J=15.3 Hz， 4.8 Hz， 1H)， 6.86(d，J=16.0 Hz， 1H)， 7.72(d，J=8.8 Hz， 2H)， 8.20(d，J=8.4 Hz， 2H)； ESI-MSm/z： 364.2{[M+Na]+}。

(E)-3-(4-氟苯基)-2-丙烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5x)： 收率38%， m.p.101.9～105.2 ℃；1H NMRδ： 3.00～3.18(m， 4H)， 3.46～3.71(m， 2H)， 4.23～4.30(m， 2H)， 4.41～4.75(m， 4H)， 5.01(d，J=5.2 Hz， 1H)， 6.33～6.42(m， 1H)， 6.67(d，J=16.0 Hz， 1H)， 7.17(t，J=8.8 Hz， 2H)， 7.50(t，J=8.8 Hz， 2H)； ESI-MSm/z： 337.3{[M+Na]+}。

2-(4-羟基苯基)甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5y)： 收率32%， m.p.96.3～100.1 ℃；1H NMRδ： 3.01～3.17(m， 4H)， 3.37(s， 2H)， 3.43～3.51(m， 1H)， 3.70(dd，J=11.4 Hz， 5.3 Hz， 1H)， 4.18(d，J=7.6 Hz， 1H)， 4.53(t，J=5.2 Hz， 1H)， 4.70(d，J=11.6 Hz， 1H)， 4.94(dd，J=14.4 Hz， 4.4 Hz， 1H)， 5.03(d，J=4.8 Hz， 1H)， 6.73(d，J=8.4 Hz， 2H)， 7.17(d，J=8.4 Hz， 2H)， 9.37(s， 1H)； ESI-MSm/z： 309.1{[M+Na]+}。

3-(4-羟基苯基)丙基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5z)： 收率37%， m.p.109.4～112.3 ℃；1H NMRδ： 1.64～1.84(m， 2H)， 2.52(t，J=7.6 Hz， 2H)， 2.90～3.15(m， 4H)， 3.39～3.44(m， 1H)， 3.65(dt，J=17.2 Hz， 9.4 Hz， 1H)， 3.70～3.80(m， 1H)， 4.10(d，J=8.0 Hz， 1H)， 4.47(t，J=6.0 Hz， 1H)， 4.90(d，J=4.4 Hz， 1H)， 4.93(d，J=4.4 Hz， 1H)， 5.00(d，J=4.8 Hz， 1H)， 6.65(d，J=8.4 Hz， 2H)， 7.00(d，J=8.4 Hz， 2H)， 9.12(s， 1H)； ESI-MSm/z： 337.3{[M+Na]+}。

1.3抗缺氧活性测定

取对数生长期的内皮细胞用胰酶消化并计数，调整细胞浓度(c)为5．0×104个·mL-1，在96孔培养板中每孔接种200 μL，在5%CO2环境下于37 ℃培养24 h。以高糖无血清DMEM代替正常培养基继续培养24 h。将细胞随机分为正常对照组、红景天苷对照组(c1．0×10-6mol·L-1)，同时设置缺氧模型组(不加药物，加等量的溶媒)、待测化合物组(c1．0×10-6mol·L-1)，每组设6个复孔。除正常对照组外其它各组均以D-Hank’s液替代培养基，置于混合气体(5%CO2+95%N2)培养箱中，于37 ℃培养2 h，正常对照组在5%CO2培养箱中于37 ℃同步培养2 h。

在缺氧培养结束后，每孔加入20 μL新配制的MTT溶液，在5%CO2环境下于37 ℃培养箱中继续培养4 h。弃去上清液，每孔加入150 μL DMSO使细胞内蓝紫色结晶充分溶解，用酶标仪测定各孔在波长492 nm处的OD值。

2结果与讨论

2.1合成

苯丙烯酸衍生物通常彩用Knoevenagel[11]反应合成制得。该方法以取代苯甲醛、丙二酸为原料，吡啶为反应溶剂，由哌啶催化合成苯丙烯类衍生物。所用吡啶的毒性较大，且反应需要高温回流，对一些含有活泼基团的底物并不适用[12]。Mcnulty J[13]和李娟[14]课题组分别采用超声波和碱性离子液体促进Knoevenagel反应的发生。也有采用新型催化剂如聚丙烯腈纤维[15]、相转移催化剂[16]等来改进反应条件的，但是这些催化剂大多较昂贵，且合成困难。

本文在合成3a～3t的路线中，避免了使用毒性较大的吡啶，以DMF为反应溶剂，DMAP联合哌啶为催化剂，于65 ℃反应，以较高收率合成苯环上有不同取代基的苯丙烯酸衍生物3a～3t；接着通过酯化、还原得到苯丙烯醇衍生物(5a～5t)。在合成3u～3x的路线中，由取代肉桂醛经还原反应一步制得苯丙烯醇衍生物；后者再与4通过Koenigs-Knorr偶联得到乙酰化苯丙烯类糖苷化合物，最后脱去糖基的乙酰保护基，即得5a～5x。

1a～1t较为易得，且价格低廉，但反应路线较为繁琐。1u～1x通过一步反应即可得3u～3x，操作简便，但1u～1x不易得到。

2.2抗缺氧活性

5的抗缺氧活性结果见表1。由表1可见，与正常对照组比较，缺氧模型组细胞代谢活力显著降低，经5b， 5e， 5g， 5p， 5q， 5s， 5t和5y干预后，细胞在缺氧状态下的代谢活力均高于红景天苷组，具有统计学差异。其中，苯环均为4-羟基取代但侧链分别为丙烯基(5t)、一碳(5y)及三碳(5z)的三个化合物的抗缺氧活性均高于红景天苷，且5t的活性最强。这表明侧链缩短或延长一个碳不降低化合物的抗缺氧活性，但侧链为丙烯基时可能会提高其活性。

由表1还可见，5a， 5b， 5d， 5e和5p较红景天苷的OD值升高，增长比例分别为1.9%， 21.5%，12.5%， 16.6%和33.5%。由此可见，苯环上3-位和4-位引入甲氧基能够增强该类化合物的抗缺氧活性。

表1　化合物的抗缺氧活性

#与缺氧模型组相比，P<0.05；*与红景天苷相比，P<0.05。

3结论

以苯丙烯醇衍生物为关键中间体，与溴代糖通过Koenigs-Knorr偶联偶联反应及脱乙酰基保护，合成了24个苯丙烯类葡萄糖氧苷。该合成方法具有条件温和，反应时间短，后处理简单且收率较高的优点。

抗缺氧活性研究结果显示，细胞在缺氧状态下，5b， 5e， 5g， 5p， 5q， 5s， 5t和5y处理的细胞的代谢活力均高于同浓度红景天苷组。其构效关系和进一步的抗缺氧活性研究正在进行中。

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Synthesis of Benzene PropyleneO-Glycosides and Their Anti-hypoxic Activities

MA Chen1,2a,ZHANG Wen-bin1,2a,LI Xia2a，LI Ling-zhi2a,2b*,WU Yu-qiang1,2a,ZHANG Yong-liang2b,GE Xiao-jian2a,3

(1. College of Pharmacy, Tianjin Medical University, Tianjin 300070, China; a. Pharmaceutical Chemistry Lab;b. Tianjin Key Laboratory for Prevention and Control of Occupational and Environmental Hazard,2. Logistics University of Chinese People’s Armed Police Forces, Tianjin 300309, China;3. College of Pharmacy, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China)

Abstract：Twenty four benzene propylene O-glycosides(5a～5x) were designed and synthesized by Koenigs-Knorr reaction of 3-phenyl-2-propen-1-ol derivatives (3a～3x) with bromo acetyl glucose and deacetylation. 3a～3x were prepared by two methods. 3a～3t were prepared by Knoevenagel condensation， esterification， and reduction from substituted benzaldehyde. And 3u～3x were prepared by reduction from cinnamic aldehyde derivatives. 5c， 5f～5x were new compounds. The structures were characterized by1H NMR and ESI-MS. The anti-hypoxic activities of 5 on hypoxia exposure endothelial cells(EA.hy926) were evaluated by MTT assays. The results indicated that 5b， 5e， 5g， 5p， 5q， 5s， 5t and 5y exhibited better anti-hypoxic activity than salidroside.

Keywords：benzenepropylene; salidroside; synthesis; endothelial cell; anti-hypoxia activity

中图分类号：O629.13； R914.5

文献标志码：A

DOI：10.15952/j.cnki.cjsc.1005-1511.2016.03.15374

作者简介：马臣(1989-)，男，回族，山东德州人，硕士研究生，主要从事药物合成的研究。 E-mail： 349878267@qq.com通信联系人： 李灵芝，教授，博士生导师， E-mail： 13682196000@163.com

基金项目：国家自然科学基金资助项目(81471823)； 天津市重点基金项目(12JCZDJC34700)； 武警后勤学院科研创新团队项目(WHTD210303)

收稿日期：2015-11-09