巨大血小板对GEN.S血细胞分析仪白细胞计数及分类的影响



巨大血小板对GEN.S血细胞分析仪白细胞计数及分类的影响

李杰

(钟祥市人民医院 检验科， 湖北 钟祥431900)

目前血液常规分析主要使用各种血液分析仪完成，仪器均使用阻抗法原理进行细胞计数，对于白细胞分类则采用各种光、电、化学染色技术手段。贝克曼- 库尔特GEN.S血液分析仪(简称GEN.S)利用VCS技术同时对单个白细胞进行细胞体积(V)，高频电流传导(C) 及激光散射(S)的分析，从而得到白细胞五分类的结果。当血液中出现巨大血小板(giant platelet)时会干扰阻抗法仪器的血小板计数结果，导致计数结果降低。对于此类标本，国际血液学专家委员会及国内专家提出应进行显微镜镜检以避免巨大血小板对血小板计数的干扰[1,2]，但巨大血小板对白细胞计数及分类的干扰则未见报道。本研究对GEN.S血液分析仪巨大血小板报警标本进行显微镜检复核，发现巨大血小板除对血小板计数有干扰外尚可干扰白细胞计数及分类结果，有效的显微镜检可保证结果的准确性。

1材料与方法

1.1仪器与试剂研究使用仪器为贝克曼- 库尔特GEN.S血液分析仪，试剂为原装配套试剂，双目显微镜(Olympus公司生产)，瑞氏染液(贝索公司生产)，牛鲍氏血细胞计数板，按全国临床检验操作规程配制白细胞计数稀释液。

1.2标本来源湖北省钟祥市人民医院检验科临检室2015年3月-6月住院病人血常规标本，其中经GEN.S检测后有巨大血小板阳性提示的血液标本共200例(占同期标本总数约2%)。

1.3方法及判断标准抽患者静脉血2 ml于EDTA.K2抗凝管中送检，在2小时内进行血液分析后取血样制备血涂片，瑞氏染色后由经过细胞形态学专业培训的主管技师按全国临床检验操作规程进行显微镜镜检白细胞分类，总共观察200个白细胞，同时对血液样本进行手工法白细胞计数。人工镜检阳性标准为整张涂片中巨大血小板占血小板总数的比例大于15%[1]。以手工镜检结果为标准，与仪器结果进行对比。

1．4统计学处理使用SPSS19.0统计软件包进行统计学分析，定量数据使用t检验进行组间比较，P<0.05为差别具有显著性。

2结果

2.1对200例仪器巨大血小板提示阳性的标本按文献标准进行血涂片瑞氏染色显微镜镜检，200例标本巨大血小板提示阳性标本中发现195例(97.5%)巨大血小板比例增高的现象。

2.2将仪器巨大血小板提示阳性的标本进行手工法白细胞及血小板计数，在200例标本中，经人工复核，170例结果仪器测定与人工镜检之间差异无显著性。30例标本提示“Cellular Interference”，检测结果中白细胞计数结果及淋巴细胞计数结果偏高，30例标本人工与仪器白细胞计数及分类结果的比较见表1。

2.3对影响白细胞计数及分类的30例标本进行巨大血小板数量(占总数的百分比)与白细胞计数受干扰程度(增高幅度百分比)的相关性分析，发现巨大血小板数量与白细胞计数受干扰程度呈正相关，y=0.76x+18.2，r2=0.74。

表1　受干扰标本人工与仪器检测白细胞计数及淋巴细胞

3讨论

目前已经证实血液分析时有核红细胞、难溶性红细胞等存在可影响白细胞计数的准确性，巨大血小板对血小板计数产生的影响也多见报道[3，4]。但巨大血小板对其它血细胞计数尤其是白细胞计数及分类的干扰则未见报道。本研究主要观察其对白细胞计数与分类的影响。GEN.S使用经典的电阻抗法进行白细胞计数，全血样本经溶血素作用后，红细胞破坏而保留白细胞进行电阻抗法计数。在溶血素的作用下时血小板并未被破坏，但在正常情况下血小板、红细胞碎片等非WBC颗粒体积在35fl以下，由于仪器定义大于35fl的颗粒为WBC并进行计数，故正常情况下血小板体积与白细胞差别较大，进行电阻抗法计数时产生信号不同，仪器可将其与白细胞准确区分而不干扰白细胞计数。在出现巨大血小板且比例增高时，由于巨大血小板与白细胞体积接近且不能被溶血素破坏，进行电阻抗法计数时产生信号相似，故对白细胞计数产生干扰(仪器提示“Cellular Interference”)并导致计数结果偏高。目前在高档的仪器如LH750血液分析仪上仪器具有白细胞计数自动纠正功能，可以排除大部分此类干扰，但部分标本仪器仍旧会受到干扰而导致计数结果偏高[5]。巨大血小板的数量越高，体积越大，白细胞计数与分类受干扰的程度越大，与本研究结果证实巨大血小板的数量与白细胞计数受干扰的程度呈正相关相符，故对此类结果应予以人工纠正以保证其准确性。

GEN.S在白细胞分类中使用VCS技术同时对白细胞进行三种不同的参数分析从而得到白细胞五分类的结果。其原理为在分析前使用溶血素(ERYTHROLYSE REAGENT)破坏红细胞，然后使用稳定剂(STABILYSE REAGENT)中和溶血素并保证白细胞接近于自然状态，此时五类白细胞大小(V)，电导率(C)，光散射(S)不同，仪器通过收集8192个白细胞的VCS参数以进行VCS分析分类。巨大血小板的VCS各参数接近于淋巴细胞，当其比例增高时仪器将其分类为淋巴细胞，故结果提示淋巴细胞比例增高。由于部分血小板被仪器误认为白细胞，故仪器进行白细胞分类时分析的白细胞数量不足，分类结果会受到干扰而不可信。人工显微镜检时，可在显微镜下通过细胞大小、颗粒、折光性、染色等特性不同而对白细胞与血小板进行区分，故可准确计数并分类。

目前各医院血液分析均使用各类仪器进行，仪器进行细胞计数均使用经典的电阻抗法，干扰因素较多。从本研究结果可以看出，血液分析标本巨大血小板报警阳性率约2%，其中有97.5%证实为真阳性标本。在真阳性标本中有15%的标本对除血小板计数产生干扰外也对白细胞计数与分类产生干扰。使用GEN.S进行血液分析时，对于仪器如出现巨大血小板报警阳性的标本，在进行人工镜检复核血小板数量时，必须注意血小板对白细胞数量与分类的干扰，进行人工白细胞计数及分类才能保证结果的准确性。某些血小板系统疾病会出现血小板数量及形态的改变，人工显微镜检除了保证结果的准确性以外也是血小板系统疾病诊断的标准之一[6,7]。故人工显微镜镜检仍然是对仪器结果进行复核的金标准。

参考文献：

[1]尚红，王毓三，申子喻．全国临床检验操作规程[M]．第4版．北京：人民卫生出版社，2014：22-23.

[2]Patrizia Noris,Ginevra Biino,Alessandro Pecci,et al.Platelet diameters in inherited thrombocytopenias:analysis of 376 patients with all known disorders[J].Blood,2014,124(6):e4.

[3]薛飞平，孙瑞雪，吴礼峰．三种方法对巨大血小板的检测分析[J].检验医学,2010，25：398.

[4]杨学敏，李光迪.未成熟血小板比率、平均血小板体积与血小板计数方法比较研究[J].国际检验医学杂志,2012，33:867.

[5]方美容，陈效黎．BECKMAN COULTER LH750血液分析仪“WBC correct”功能评估[J]．检验医学,2014，29:337.

[6]Roy AD,Choudhury N,Ray D.Giant Platelets in Platelet Donors-A Blessing in Disguise? [J].J Clin Diagn Res,2015,9(6):1.

[7]Naina HV,Harris S.Platelet and red blood cell indices in Harris platelet syndrome[J].Platelets,2010,21(4):303.

(收稿日期：2015-09-06)

文章编号：1007-4287(2016)03-0480-02