生精功能障碍患者Y染色体AZF基因微缺失观察

孙思，李艳，吴薇

(武汉大学人民医院，武汉430060)



生精功能障碍患者Y染色体AZF基因微缺失观察

孙思，李艳，吴薇

(武汉大学人民医院，武汉430060)

摘要：目的观察生精功能障碍患者Y染色体无精子因子(AZF)基因微缺失发生情况。方法 选择380例生精功能障碍患者为病例组，选择50例健康男性志愿者为对照组。采用多重PCR技术检测两组Y染色体AZF基因6个序列标签位点，包括AZFa区的SY84、SY86，AZFb区的SY127、SY134，AZFc区的SY254、SY255。结果病例组Y染色体AZF基因微缺失23例(6%)，对照组无微缺失，两组相比，P<0.05。检出AZF基因微缺失的患者中，无精子症17例、严重少精子症5例、少弱精子症1例；20例为单位点微缺失，3例(均为无精子症患者)为多位点联合缺失；SY127缺失2例，SY134缺失1例，SY254缺失7例，SY255缺失16例。结论 部分生精功能障碍患者存在Y染色体AZF基因微缺失，以AZFb区及AZFc区位点缺失为主，其中SY255缺失较为多见。

关键词：Y染色体；无精子因子基因；生精功能障碍；无精子症；少精子症；弱精子症

研究[1]表明，精子的发生调控与Y染色体无精子因子(AZF)密切相关。AZF基因缺失引起的生精障碍是导致男性不育的重要原因，表现为原发性无精子症和少精症。其中AZFa区(SY84、SY86)缺失导致青春期前精子发生阻滞[2,3]；AZFb区(SY127、SY134)缺失导致减数分裂前期或减数分裂中精子发生阻滞；AZFc区(SY254、SY255)缺失可导致精液检查表现为无精、少精或弱精。本研究观察了生精功能障碍患者Y染色体AZF基因微缺失发生情况，现报告如下。

1资料与方法

1.1临床资料2011年7月~2015年7月就诊的生精功能障碍患者380例(病例组)，年龄24~51岁，无精子症122例、严重少精子症53例、少弱精子症205例。选择健康男性志愿者50例为对照组，年龄22~50岁。两组年龄资料具有可比性。

1.2Y染色体AZF基因检测以ZFY、SRY作为内参照；所测Y染色体基因位点包括SY84、SY86、SY127、SY134、SY254、SY255。用Primer Premier5软件设计引物，引物序列见表1。采用QIAGEN QIAcube全自动核酸纯化系统从全血中提取DNA。取 PCR反应管4支，在管壁上分别做好Ⅰ(ZFY)、Ⅱ(SRY)、Ⅲ(SY254、SY86、SY127)、Ⅳ(SY84、SY134、SY255)标记，各加入PCR反应液(2×premix)10 μL、DNA模板4 μL，加入相对应的PCR引物2 μL，最后加入无菌水4 μL至20 μL。PCR反应程序：50 ℃ 10 min；95 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，57 ℃ 90 s，72 ℃ 1 min，共35个循环；72 ℃ 10 min；4 ℃ 10 min。将PCR产物各上样10 μL，配制4%琼脂糖凝胶进行电泳，应用全自动凝胶成像系统分析结果。

1.3统计学方法率的比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

病例组Y染色体AZF基因微缺失23例(6%)，对照组无微缺失，两组相比，P<0.05。检出AZF基因微缺失的患者中，无精子症17例(17/122)、严重少精子症5例(5/53)、少弱精子症1例(1/205)；20例为单位点微缺失，3例(均为无精子症患者)为多位点联合缺失；SY127缺失2例，SY134缺失1例，SY254缺失7例，SY255缺失16例。

3讨论

目前认为Y染色体包含一些精子生成相关基因，Yq11同源染色体间大的重复序列发生重组会导致AZFa、AZFb、AZFc微缺失，进而引起无精子症或严重少精子症，导致原发性不育[4]。AZF基因区域6个序列标签位点SY84、SY86、SY127、SY134、SY254、SY255缺失导致的男性不育占95%[5~7]。

本研究选择了AZF基因区域6个特异位点，采用多重PCR检测，发现380例生精障碍患者中AZF基因微缺失率为6%，近年来国内外学者对Y染色体AZF基因微缺失检出率为2%~10%[7~9]，结果差异可能与研究对象选择标准及遗传背景不同、检测所用序列标签标记位点密度和位置不同、检测方法不同有关。病例组无精子症患者中，AZF基因缺失率为14%，高于相关报道；而少精子症患者缺失率为9%；少弱精子症缺失率为0.5%，与国内外报道结果相近[10]。无精子症患者中，AZFc区单位点缺失14例，AZFb区、AZFc区联合缺失3例，提示AZF基因区域大范围缺失(联合缺失)时可表现为无精子症，而AZFc区缺失表现为生精能力缺陷[11]。值得注意的是，本研究中AZFc区位点微缺失率高(87%)，AZFb区、AZFc区位点联合缺失率为13.0%，绝大多数AZFc区单位点微缺失患者生精过程受阻，因此有生育要求的患者需行卵泡胞质内单精子注射术辅助生育。

表1　待测基因位点引物序列

本研究未测得AZFa区位点微缺失，与先前报道有所差异[12]，可能是研究群体和遗传背景不同所致。病例组中大部分无精子症患者和少、弱精子症患者均未检测到AZF基因微缺失，AZF基因微缺失是否为这部分患者的直接病因尚不明了，可能还存在其他几类Y染色体缺失机制[13~15]，一些其他未知因素(如肥胖、精索静脉曲张等)也会影响精子生成从而导致不明原因的生精功能障碍[16]。

总之，部分生精功能障碍患者存在Y染色体AZF基因微缺失情况，Y染色体AZF基因相关位点检测对生精功能障碍的诊断有重要参考价值。

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(收稿日期：2015-10-08)

中图分类号：R715.5

文献标志码：B

文章编号：1002-266X(2016)07-0071-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.07.027

通信作者：李艳(E-mail: Yanlitf1120@163.com)