有益微生物制剂对凡纳滨对虾育苗的应用效果

李高俊++佟延南++符一凡++蒲利云++杨明秋

摘要：研究百安威、乐多源活菌、EM菌等3种有益微生物剂与凡纳滨对虾育苗效果的关系，筛选育苗使用效果最佳的微生物制剂种类以及科学的使用方法。结果显示：百安威最佳投放浓度为6 mg/L，成苗率达到28.0%；乐多源最佳投放浓度为7 mg/L，成苗率达到24.8%；EM菌最佳投放浓度为7 mg/L，成苗率达到23.3%；而对照组成苗率仅为12.5%。与对照组相比，投喂百安威、乐多源活菌、EM菌等3种有益微生物剂的凡纳滨对虾成苗率分别提高15.5%、12.3%、10.8%。其中，投喂百安威的育苗效果最好。3种微生物生物制剂在对虾育苗过程中投放3～4次效果较佳。

关键词：凡纳滨对虾；育苗；有益微生物制剂；百安威；乐多源活菌；EM菌；成活率

中图分类号：S968.22+9.12 文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）02-0288-03

收稿日期：2014-12-29

基金项目：海南省科学事业费项目（编号：KYYS-2014-51、KYYS-2013-23）；海南省重大科技项目。

作者简介：李高俊（1982—），男，海南万宁人，硕士，助理工程师，主要从事水生动物增养殖研究。E-mail：tyn171575140@163.com。

通信作者：佟延南，硕士，工程师，主要从事水生动物增养殖、病害研究。E-mail：150599790@qq.com。凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）别称南美白对虾，具有适应环境能力强、营养要求低、生长速度快、出肉率高、营养丰富和养殖产量高等优点。凡纳滨对虾苗种是海南省海水养殖的主要产业，2012年产凡纳滨对虾苗种约599.79亿尾，年产值约6亿元，其中50%苗种供应省外养殖场，经济社会效益十分显著。

有益微生物物制剂的应用，不仅能保护沿海海洋环境，而且能大幅提高对虾养殖经济效益。因此，国家大力提倡水产品的绿色无公害养殖，随着宣传力度的加大，健康养殖的理念已深入人心，由此涌现出生态养殖、生态控制、生物防治等一批新技术和新理念，这其中使用最广泛的就是利用有益微生物制剂特别是有益微生物的一系列特性，将其应用于水产养殖中的水质调控、营养添加、疾病防治等方面取得了显著效果[1-2]。

当前，海南省绝大多数对虾育苗场采用定期泼洒有益微生物调控水质，但是使用有益微生物制剂种类多样化，并且投放浓度与时间均不一致，尚无标准化的使用方法。本研究选择当前较普遍使用的百安威、乐多源活菌、EM菌等3种有益微生物剂，分别观察不同浓度对育苗效果的影响，筛选出每次泼洒的最佳浓度；筛选3种有益微生物制剂最佳使用浓度之后，在对虾育苗过程中使用最佳浓度进行不同投放次数比较试验，探索有益微生物制剂的最佳使用次数。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1凡纳滨对虾幼体来源亲虾为从美国夏威夷引进后繁育的子1代虾苗养成，体长18～20 cm、体质量37～41 g/尾。雌虾采取切除右侧眼球催熟，催熟期间以沙蚕、鱿鱼和牡蛎为饵料，调控水温为30～32℃，每天投饵2次、换水1次。当雌性背部出现桔黄色生殖腺，雄性第5步足基部出现乳白色精荚时，傍晚把雌虾与雄虾放进同一个交配池进行交配，然后将已交配雌亲虾放于产卵池产卵，受精卵孵化的无节幼体经抽样计数后，放养于育苗水槽中育苗。幼体为从美国夏威夷引进亲虾的子2代无节幼体。

1.1.2有益微生物制剂来源选择当前海南省凡纳滨对虾育苗最常用的百安威活菌、乐多源活菌和EM菌等3种有益微生物制剂为试验材料。其中，百安威为固体颗粒状，主要成分以芽孢杆菌及其代谢物为主；乐多源活菌为固体粉状，主要成分为乳酸杆菌、枯草杆菌、乳酸球菌；EM菌为稀释液体，主要成分为双岐菌、乳酸菌、芽孢杆菌、光合细菌、酵母菌、放线菌、醋酸菌等。

1.1.3育苗设施蓝色不透光的孵化桶为育苗容器，容积约为0.5 m3。孵化桶上方有塑料板顶棚遮雨设施，每个孵化桶放置1个散气石充气。

1.1.4育苗用水水源水质应符合GB11607—1989《渔业水质标准》的规定，育苗使用的海水应经沉淀、沙滤净化处理后使用。海水盐度2.8%～3.5%，pH值7.8～8.5，化学耗氧量1 mg/L以下，氨态氮含量0.05 mg/L以下，溶解氧含量 5 mg/L 以上。

1.2试验方法

1.2.1试验分组

1.2.1.1不同浓度微生物制剂对凡纳滨对虾育苗效果试验3种有益微生物制剂各设立4、5、6、7、8 mg/L等5个试验浓度，每个浓度设2组平行试验组，以未投放微生物制剂为对照组。微生物制剂在育苗阶段投放3次[试验组投放微生物制剂的是根据虾苗变态来决定的，投放时间是在幼体入池前、蚤状幼体Ⅲ期（Z3）和糠虾幼体Ⅲ期（M3）]。观察各试验组对虾各个发育阶段的成活率，培育仔虾5期（P5）成苗数量。

1.2.1.2不同投放次数微生物制剂对凡纳滨对虾育苗效果试验以筛选出的3种微生物制剂最佳使用浓度为投放浓度，设立3种不同的投放次数[试验1是育苗过程中幼体入池前和蚤状幼体Ⅲ期时投放微生物制剂，共2次；试验2是育苗过程中幼体入池前、蚤状幼体Ⅲ期和糠虾幼体Ⅲ期时投放微生物制剂，共3次；试验3是育苗过程中幼体入池前、蚤状幼体Ⅲ期、糠虾幼体Ⅲ期及仔虾Ⅰ期（P1）时投放微生物制剂，共4次]，每种投放次数设2组平行试验。

1.2.2苗种培育方法

1.2.2.1育苗水槽消毒育苗水槽采用60 mg/L 高锰酸钾消毒，然后用干净淡水洗干净。

1.2.2.2育苗用水育苗用水为沙滤池过滤的海水，海水盐度3.2%。

1.2.2.3温度调控育苗水体用加热棒控温，无节幼体（N期）调控水温30.0～30.5℃，蚤状幼体期（Z期）30.5～31.0℃，糠虾幼体期（M期）31.0～32.0℃，仔虾期（P期）31.0～32.0℃。

1.2.2.4充气无节幼体培育充气状态水体呈微波状，蚤状幼体培育充气状态水体呈弱沸腾状，糠虾幼体培育充气状态水体呈沸腾状，仔虾培育充气状态水体呈强沸腾状。

1.2.2.5光照条件采用遮阳网调节光照度，无节幼体和蚤状幼体平共处阶段调控光照度为500 lx，糠虾幼体光照度为1 000 lx，仔虾为5 000 lx。

1.2.2.6水质调控无节幼体、蚤状幼体、糠虾幼体不加水、不换水，仔虾Ⅰ期（P1）加水10 cm，仔虾Ⅱ期（P2）开始换水，每天换水1次，每次换10%左右。育苗期间水质指标变化情况：氨态氮（NH3-N）浓度0.7～3.2 mg/L，亚硝态氮（NO2-N）浓度0.06～0.16 mg/L，pH值7.4～8.2，溶氧量6～9 mg/L。

1.2.2.7饵料及其投喂蚤状幼体Ⅰ期开始投饵，每天分别于00：00、06：00、11：00、15：00、19：00投饵5次。（1）蚤状幼体投饵。以螺旋藻为主，虾片、黑粒、ZM（海水类蛋白质和脂类）和BP为辅。每次投饵量如下：蚤状幼体Ⅰ期，螺旋藻1 mg/L，虾片、黑粒、ZM各0.5 mg/L；蚤状幼体Ⅱ期，螺旋藻 2～3 mg/L，虾片和黑粒各1 mg/L，ZM和BP各0.5 mg/L；蚤状幼体Ⅲ期，螺旋藻2～3 mg/L，虾片1 mg/L，黑粒、ZM和BP各0.5 mg/L。（2）糠虾幼体投饵。当蚤状幼体变态为糠虾幼体后停止投喂螺旋藻，改为以虾片、车元（日本对仔虾配合饲料）、ZM和BP等为饵料，投喂过程中逐步增加虾片、车元和BP的投喂量，ZM则减少。每次投饵量如下：糠虾幼体Ⅰ期，虾片、车元和ZM各2 mg/L，BP 1 mg/L；糠虾幼体Ⅱ期，虾片和BP各2 mg/L，车元2～3 mg/L，ZM 1 mg/L；糠虾幼体Ⅲ期，虾片3 mg/L，BP 2 mg/L，车元2～4 mg/L，ZM 1 mg/L。（3）仔虾投饵。从糠虾变态为仔虾后停止投喂ZM，以虾片、车元、BP和卤虫无节幼体为饵料，仔虾时的虾苗已经具备了成虾的基本特征，可以自主游动和用附肢抓住食物觅食，每天 09：00、21：00投喂活体卤虫无节幼体。每次投饵量如下：仔虾期，虾片4～6 mg/L、车元3～5 mg/L、BP 2 mg/L及卤虫无节幼体6～10 mg/L。

1.2.3幼体、对虾成活率的计算方法计算各阶段幼体、仔虾成活率时，在育苗水槽中稍加大充气量，使幼体或仔虾均匀分布于水槽中，用250 mL烧杯在水槽不同位置取样5次，计算平均数量，然后根据育苗水体计算出成活率：成活率=成活幼体或仔虾数量/投放幼体数量×100%。

2结果与分析

2.1不同浓度微生物制剂对凡纳滨对虾育苗效果

由表1可以看出，使用百安威微生物制剂后，试验组的对虾仔虾（P5期，下同）成活率比对照组都有不同程度的提高，且差异显著（P<0.05）。因为百安威的主要成分是芽孢杆菌，试验的结果与Rengpipat等在斑节对虾（Penaeus monodon）饵料中添加芽孢杆菌制剂，提高其成活率的结果[3]一致。其中，浓度为4、5 mg/L 的仔虾成活率较对照组分别提高12.4、13.3百分点，但2个浓度之间的成活率差异不显著（P>0.05）；浓度为6、7、8 mg/L 仔虾成活率较对照组分别提高15.5、15.3、15.6百分点，但3个浓度之间的成活率差异不显著（P>0.05）。建议选用浓度为6 mg/L 百安威。

使用乐多源微生物制剂后，试验组的对虾仔虾成活率比对照组都有不同程度的提高，且差异显著（P<0.05）。乐多源的主要成分是乳酸杆菌、枯草杆菌等，而朱学芝等发现，在饵料中添加乳酸杆菌、枯草杆菌等制剂均可促进对虾显著生长（P<0.05）[4-5]。在本试验中，浓度为4、5 mg/L仔虾成活率较对照组分别提高5.3、5.4百分点，但2个浓度之间差异不显著（P>0.05）；浓度为6 mg/L的仔虾成活率较对照组提高8.4百分点；浓度为7、8 mg/L仔虾成活率较对照组分别提高12.3、12.1百分点，2个浓度之间差异不显著（P>0.05）。建议凡纳滨对虾育苗过程投放浓度为7 mg/L的乐多源较适宜。

使用EM菌微生物制剂后，试验组的对虾仔虾成活率比对照组都有不同程度的提高，且差异显著（P<0.05）。肖珊等在饲料中添加EM菌，使有益菌定植在对虾消化道内并形成优势种群，排斥病原菌，降低发病率，提高仔虾成活率[6]。在本试验中，浓度为7、8 mg/L的仔虾成活率提高率较大，较对照组分别提高10.8、10.7百分点，但2个浓度之间差异不显著（P>0.05）。建议选用浓度为7 mg/L的EM菌。

2.2不同投放次数微生物制剂对凡纳滨对虾育苗效果观察

由表2可以看出，在投喂不同次数的试验中，3种微生物制剂的试验2和试验3较试验1差异显著（P<0.05），但试验2和试验3差异不显著（P>0.05）。建议凡纳滨对虾育苗过程投放微生物制剂3～4次较适宜，可达到提高幼体育苗成苗率的目的。

3结论与讨论

3.1有益微生物制剂有利于减少对虾育苗的病害

微生物制剂的成分包含蛋白质、多种氨基酸、维生素及一些微量元素，本身就具有对虾幼体所需的很高的营养价值。投放有益微生物制剂，由于有益微生物与病原体间有拮抗作用，一方面有益微生物在育苗水体中大量繁殖，可有效抑制病原体的繁殖；另一方面虾苗摄取了水体中的微生物制剂后，有益微生物在对虾幼体、仔虾消化道中繁殖，可抑制幼体、仔虾体内的有害菌群的繁殖，从而减少和预防疾病的发生。

众所周知，在水产养殖中水质的好坏严重影响水产生物的成活率，而幼体在变态成长过程中一定会有相当的代谢物，而且投喂饵料的过程中也会有一定的饵料残留，这些都会对水体造成一定程度上的污染，使水环境恶化（最基本和常见的就是pH值和NH3-N浓度），导致对虾幼体、仔虾出现病害甚至死亡。而投放有益、有利于分解育苗水体有机物，缓解了pH值的降低，有效地抑制了NH3-N浓度升高。可见，对虾对减少对虾育苗病害和提高虾苗质量具有积极作用。

3.2 微生物制剂对保护海洋生态与提高养殖效益的作用

对虾育苗泼洒有益微生物制剂，利用有益微生物分解育苗水体的残饵、粪便等有机物，净化育苗水体质量，大量减少对虾育苗的换水量，从而大幅减少育苗废水排入海区。泼洒有益微生物对育苗水体病原细菌繁殖具有较好的抑制作用，减少育苗病害的发生，提高对虾幼体培育成活率和虾苗质量，为海南省内外对虾养殖户提供优质养殖苗种，大量减少养殖病害，同时大幅减少因对虾养殖病害的发生而造成的“排塘”现象，对保护海洋生态与提高养殖效益均具有积极作用。

参考文献：

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[6]肖珊，彭敏，李咏梅. BLCS、EM对南美白对虾养殖池塘水质的调控效应及生长的影响[J]. 中国水产，2010（8）：50-52.吴永洁，张俞，池永宽，等. 贵州省岩溶地区野生白三叶形态多样性[J]. 江苏农业科学，2016，44（2）：291-296.