大柴胡颗粒治疗高脂饲料致豚鼠胆囊炎的机制

卢金福许惠琴张志芬王兆龙李　娟　喻　斌吕高虹(南京中医药大学药学院，江苏　南京　003)



大柴胡颗粒治疗高脂饲料致豚鼠胆囊炎的机制

卢金福1许惠琴1张志芬2王兆龙2李娟喻斌1吕高虹1
(南京中医药大学药学院，江苏南京210023)

〔摘要〕目的探讨大柴胡颗粒治疗慢性胆囊炎的机制。方法将豚鼠随机分为空白对照组、模型组、低、高剂量大柴胡颗粒组( 4、8 g/kg)组、消炎利胆片组( 1．2 g/kg)。采用饮饲法复制胆囊炎豚鼠模型，观察大柴胡颗粒对胆囊炎豚鼠血清内皮素( ET)、一氧化氮( NO)、肿瘤坏死因子( TNF)－α含量的影响。利用免疫组化的方法，观察胆囊组织肿瘤坏死因子( TNF)－α表达情况。结果大柴胡颗粒大剂量组可显著提高胆囊炎豚鼠血清ET含量( P＜0．01)，并可显著降低胆囊组织TNF－α表达( P＜0．05)。但大柴胡颗粒组对血清NO、TNF－α含量均未见明显影响。结论大柴胡颗粒对胆囊炎豚鼠的保护作用可能与提高血清ET水平及降低胆囊组织TNF－α表达有关，其他的相关机制有待进一步研究。

〔关键词〕大柴胡颗粒;慢性胆囊炎;高脂饲料

1江苏省中药药效与安全性评价重点实验室

2南通精华制药股份有限公司

第一作者:卢金福( 1964－)，男，副教授，博士，主要从事中药药理学研究。

大柴胡颗粒( DG)是在大柴胡汤基础上研制而成的现代中药复方制剂。大柴胡汤出自张仲景的《伤寒论》，具有外解少阳、内泻热结的功效，用于治疗少阳阳明合病。现代医学常用于胆囊炎、胆石症等疾病的治疗。前期研究发现DG能显著降低胆汁总胆红素水平，能明显减轻胆囊组织炎细胞的浸润、组织水肿等病变，显示其对实验性慢性胆囊炎有较好的治疗作用，但其详细的机制不甚清楚，本文从多种生化指标的变化及免疫组化的角度试图对大柴胡颗粒治疗慢性胆囊炎的机制作进一步的探索。

1材料与方法

1. 1药品与试剂胆囊炎饲料〔1〕:在普通饲料中加入酪蛋白1%、蔗糖1．5%、猪油1%、纤维素1%、胆酸0．02%、胆固醇0．05%，由南京青龙山实验动物养殖场提供。消炎利胆片( XYLD，惠州大亚制药股份有限公司)。DG南通精华制药有限公司。肿瘤坏死因子( TNF)－α、内皮素( ET)试剂盒(放免法)，北京华英生物技术研究所。一氧化氮( NO)试剂盒，南京建成生物工程研究所。

1. 2实验仪器DNA Expert GENios酶标仪，奥地利。r－911全自动放免计数仪，中国科技大学实业总公司生产。TP 1020自动脱水机:德国LEICA公司产品; RM2235型石蜡切片机:德国LEICA公司产品; CS－Ⅵ型摊片烤片机:湖北孝感宏业医用仪器有限公司。Tissue－Tek TEL组织包埋中心:日本SAKURA公司产品; LEICA DM 1000光学显微镜:德国Leica公司产品;隔水式电热恒温培养箱:上海市跃进医疗器械一厂; MiniSee图像采集系统。

1. 3动物豚鼠，普通级，350～450 g，雌雄兼用，由南京青龙山实验动物养殖场提供。

1. 4分组及给药方法取健康豚鼠，随机分组，即空白对照组、模型组、消炎利胆片组、低、高剂量大柴胡颗粒组。除空白对照组喂以普通饲料外，其余动物均喂以胆囊炎专用高脂饲料，空白对照组和模型组灌胃等体积的生理盐水，消炎利胆片组给予消炎利胆片1．2 g/kg，低、高剂量大柴胡颗粒组分别给予4 g/kg、8 g/kg，连续给药30 d，末次给药后禁食12 h后，豚鼠称重，颈总动脉取血，分离血清，测定血清中TNF－α、ET含量、NO。取胆囊用甲醛固定，石蜡包埋、切片，用免疫组化法检测胆囊组织TNF－α受体的表达。

1. 5统计学方法采用SPSS11．0软件进行t检验。

2结果

2. 1各组大鼠血清ET、NO、TNF－α水平检测胆囊炎豚鼠血清NO、TNF－α含量未见明显变化，但模型组ET有明显降低，大剂量大柴胡颗粒组给药后有显著提高。见表1。

表1各组大鼠血清ET、NO、TNF-α水平检测(±s，n=13)

表1各组大鼠血清ET、NO、TNF-α水平检测(±s，n=13)

与空白对照组比较: 1) P＜0．01，与模型组比较: 2) P＜0．05

组别　ET( pg/ml)　 NO(μmol/L)　 TNF－α( ng/ml)空白对照组　84．74±11．58　 3．18±1．33　 1．22±0．39模型组　73．63±9．221)　4．67±7．63　 1．17±0．45消炎利胆片组　89．74±14．112)　3．96±3．56　 1．28±0．48低剂量大柴胡颗粒组　71．04±10．51　 3．94±4．86　 1．14±0．38高剂量大柴胡颗粒组　84．93±10．942)　22．49±34．40　 1．26±0．23

2. 2大柴胡颗粒对高脂饲料致胆囊炎豚鼠胆囊组织TNF－α表达的影响根据病理组织检查半定量的结果进行赋值: +给予1分，⧺给予2分，⧻给予3分，并对赋值进行统计，结果发现，与空白对照组相比( 1．00±0)，模型组胆囊组织TNF－α阳性表达率显著提高( 2．29±0．49)，但高剂量大柴胡颗粒组给药后胆囊组织TNF－α阳性表达率显著下降( 1．71±0．49)。消炎利胆片组与小剂量大柴胡颗粒组胆组织，TNF－α〔( 2．43±0．53)、( 2．14±0．69)〕无明显差异( P＞0．05)，见图1。

图1各组大鼠胆囊组织TNF-α表达( DAB，×200)

3讨论

慢性胆囊炎从临床症状分析，其应归属于中医学的“胁痛”、“胆胀”范畴。唐孙思邈在《备急千金要方》胆腑论篇中也提到“病苦腹中气满，饮食不下，咽干，头痛，洒洒恶寒，胁痛，名曰胆实热也”。现代医学认为，本病多因结石刺激、细菌感染、病毒性肝炎、化学性损害、寄生虫及急性胆囊炎迁延等引起，一般采用解痉止痛、控制感染、利胆、手术等治疗〔2〕。目前，慢性胆囊炎的动物模型主要有饮饲法〔1〕、石胆酸型〔3〕等。中医认为，胆囊炎的发病与饮食不节、精神抑郁等多种因素相互作用有关，其发病机制与湿热内盛、肝胆气滞或气郁化热有关。因此本研究同样从饮食不节的角度采用饮饲法造模，以此观察药物的作用。ET不仅存在于血管内皮，也广泛存在于各种组织和细胞中，是调节心血管功能的重要因子，对维持基础血管张力与心血管系统稳态起重要作用。有关ET与胆囊炎的关系，McCartney等〔4〕用ELISA法对胆囊炎患者胆囊组织的ET含量进行测定，发现ET含量与胆囊炎炎症程度呈反比关系。本研究结果显示，模型组ET有明显的降低，给予大柴胡颗粒后有显著提高，参照佘靖等〔5，6〕的研究结果，大柴胡颗粒对胆囊炎的治疗作用较为肯定。然而，国内的文献报道与此不完全一致，有人认为ET含量与胆囊炎无明显关系，而NO随胆囊炎发展而升高，但也有人认为，胁肋疼痛较重者血浆ET水平明显高于胁肋疼痛较轻者及正常人，NO水平别无明显差异;脘腹痞满较重者血浆NO水平明显高于脘腹痞满较轻者，ET无明显差异。ET/NO是一对重要的由内皮细胞产生的细胞因子，具有多种生理效应，对两者在胆囊炎发生发展中的作用有待进一步深入研究。大柴胡颗粒的大剂量能显著抑制胆囊炎组织TNF－α含量的提高，提示大柴胡颗粒对慢性胆囊炎的治疗作用，然而TNF－α的血清水平未见升高，这可能与胆囊炎是局部炎症或炎症不够严重有关。

4参考文献

1王玉春，苏富琴，苗术，等．金茵颗粒剂抗豚鼠胆囊炎的实验研究〔J〕．医学研究杂志，2008; 37( 9) : 90－1．

2杨维建，李娟，汪佳明，等．慢性胆囊炎中医治疗研究进展〔J〕．西部中医药，2011; 24( 12) : 95－7．

3余成浩．清胆颗粒剂治疗胆囊炎的主要药效学实验研究〔D〕．成都:成都中医药大学，2003．

4 McCartney SA，Greaves RR，Warner TD，et al．Endothelin content，expression，and receptor type in normal and diseased human gallbladder〔J〕．Dig Dis Sci，2002; 47( 8) : 1786－92．

5佘靖，张炳厚，刘红旭，等．肝胆湿热型慢性胆囊炎一氧化氮、内皮素水平及中药治疗影响〔J〕．中国中医药信息杂志，2001; 8( 5) : 42－4．

6王华．慢性胆囊炎肝胆湿热证与客观指标关系的研究〔D〕．济南:山东中医药大学，2009．

〔2014－03－17修回〕

(编辑赵慧玲/曹梦园)

通讯作者:许惠琴( 1961－)，女，教授，博士，主要从事中药药理学研究。

基金项目:江苏省科技成果转化专项课题( BA2010094) ;江苏高校优势学科建设工程资助项目(中药学，2011)

〔中图分类号〕R575

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202( 2016) 02-0296-02;

doi:10. 3969/j. issn. 1005-9202. 2016. 02. 019