卷柏总黄酮对D－半乳糖衰老模型小鼠的影响

2016-04-09丁云录张莲珠赵昱玮李晓兵陈声武长春中医药大学附属医院吉林长春3002

中国老年学杂志 2016年2期

丁云录　张莲珠　赵昱玮李晓兵　陈声武　(长春中医药大学附属医院，吉林　长春　3002)

丁云录张莲珠赵昱玮1李晓兵陈声武(长春中医药大学附属医院，吉林长春130021)

〔摘要〕目的研究卷柏总黄酮对D－半乳糖( D－gal)致衰老模型小鼠的影响。方法昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组(给予600 mg/kg复方吡拉西坦蛋白水解物片混悬液)、卷柏总黄酮高中低3个剂量组(分别灌服800、400和200 mg/kg的卷柏总黄酮混悬液)，除正常对照组外，其余5个试验组小鼠每日均颈背部皮下注射5% D－gal 0．25 ml/10 g，连续注射6 w建立衰老动物模型，正常对照组小鼠颈背部皮下注射等量生理盐水。于试验第3周开始给予供试品，各组小鼠均按20 ml/kg体积灌胃给药，正常对照组，模型组灌服蒸馏水，连续给药4 w。采用酶法测定脑组织匀浆的蛋白质含量、超氧化物歧化酶( SOD)活性及丙二醛( MDA)含量。结果卷柏总黄酮高、中剂量组均能明显增加衰老小鼠胸腺指数和脾脏指数( P＜0．01或P＜0．05)。卷柏总黄酮能够显著提高D－gal诱导的亚急性衰老小鼠机体组织SOD活性，降低MDA含量。结论卷柏总黄酮可显著改善D－gal衰老模型小鼠的衰老指征，能明显抵抗由D－gal所致衰老小鼠免疫器官的萎缩，使D－gal衰老模型小鼠大脑SOD活性增加、MDA含量下降，具有抗氧化、抗衰老作用。

〔关键词〕卷柏总黄酮; D－半乳糖;抗衰老

1吉林省中医药科学院

第一作者:丁云录( 1979－)，男，助理研究员，主要从事中药、天然药物的药理活性研究。

卷柏为卷柏科植物卷柏Selaginella tamariscina( Beauv．) Spring的干燥全草，又名不死草、长生草、回阳草等，其味辛、性平，归肝、心经，有破血散瘀、活血通经的独特功效，主要含黄酮、酚性成分、氨基酸、海藻糖等成分〔1〕，广泛应用于腹痛、便血、尿血等症。现代药理及临床研究表明卷柏具有抗炎、抗病毒、止血、镇痛、降血压、抗衰老和增强人体免疫功能等作用。本研究探讨卷柏主要活性成分卷柏总黄酮对D－半乳糖( D－gal)衰老模型小鼠的影响。

1材料与方法

1. 1实验动物昆明小鼠，雌雄各半，体重18～22 g。动物合格证号: SCXK－(吉) 2008－0005，购于吉林大学实验动物中心。

1. 2药品及试剂卷柏总黄酮，浅黄褐色粉末，吉林天药药物研发有限公司植物化学研究室提供;复方吡拉西坦蛋白水解物片，长春长庆药业集团有限公司产品; D－半乳糖，北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司产品;考马斯亮蓝试剂盒、超氧化物歧化酶( SOD)试剂盒、丙二醛( MDA)试剂盒均为南京建成生物研究所产品。

1. 3主要仪器酶标仪( Spectrafluor PLUS，奥地利TECAN公司)，可调高速匀浆器( FSH－2，江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)，低速自动平衡离心机( LDZ－2，北京医用离心机厂)。

1. 4方法

1. 4. 1 D－gal衰老小鼠模型的建立〔2～4〕试验动物购入后，适应环境3 d，随机分为6组:正常对照组，模型组，阳性对照组(药复方吡拉西坦蛋白水解物片组)，卷柏总黄酮高中低3个剂量组，每组10只小鼠。除正常对照组外，其余5个试验组小鼠每日按照0．25 ml/10 g剂量颈背部皮下注射5% D－gal，连续注射6 w建立衰老动物模型，正常对照组注射等量生理盐水。于试验第3周开始给予供试品，各组小鼠均按20 ml/kg体积灌胃给药，正常对照组，模型组灌服蒸馏水，阳性对照组灌服600 mg/kg剂量的复方吡拉西坦蛋白水解物混悬液，卷柏总黄酮高中低三个剂量组分别灌服800、400和200 mg/kg的卷柏总黄酮混悬液，连续给药4 w。

1. 4. 2检测指标末次给药1 h后，称体重，将小鼠脱臼处死，快速摘取脑、胸腺和脾脏，称重、记录数据，计算胸腺指数和脾脏指数。脾脏指数=脾脏重量( mg) /体重( g) ;胸腺指数=胸腺重量( mg) /体重( g)。脑组织生化指标的测定:按质量体积比加入生理盐水制成10%脑组织匀浆，离心后取上清液，按试剂盒说明进行脑组织蛋白质、SOD和MDA含量测定。

1. 5统计学方法采用SPSS11．5软件进行t检验。

2结果

2. 1各组小鼠体重的比较给予D－gal 6 w，各组小鼠体重均有增加，模型组小鼠略低于空白对照组，但组间比较无显著差异( P＞0．05)，见表1。

2. 2各组小鼠胸腺指数和脾脏指数比较与正常对照组比较，模型组小鼠的免疫器官萎缩，胸腺指数和脾脏指数均降低( P＜0．001)，表明皮下注射D－gal导致小鼠免疫器官萎缩是引起小鼠衰老的原因之一。卷柏总黄酮高、中剂量组及阳性对照组均能增加衰老小鼠胸腺指数和脾脏指数( P＜0．01或P＜0．05)。见表1。

2. 3各组小鼠组织蛋白质含各比较模型组小鼠的脑组织蛋白质含量与正常对照组比较，有所降低，但无统计学差异( P＞0．05)，各给药组与模型组比较，也无明显差异( P＞0．05)，表明卷柏总黄酮对小鼠脑组织蛋白质含量无明显的影响( P均＞0．05)，见表2。

2. 4各组小鼠脑组织MDA、SOD比较卷柏总黄酮能够显著提高D－gal诱导的亚急性衰老小鼠机体组织SOD活性，降低MDA含量( P＜0．05)，见表2。

表1各组小鼠体重、脾脏系数和胸腺系数的影响( n=10±s)

与模型组比较: 1) P＜0．05，2) P＜0．01，3) P＜0．001

组别　　体重( g)脾脏系数( mg/10 g)胸腺系数( mg/10 g)正常对照组　34．5±2．42　 44．54±6．093)　22．07±2．743)模型组　32．5±2．27　 32．60±6．22　 15．51±2．24阳性对照组　33．2±2．39　 38．35±5．071)　19．96±3．902)卷柏总黄酮高剂量组　33．8±2．70　 39．49±4．981)　18．18±2．481)卷柏总黄酮中剂量组　34．4±2．27　 40．48±4．472)　18．58±2．831)卷柏总黄酮低剂量组　34．0±2．05　 37．44±5．93　 17．44±2．15

表2各组小鼠脑组织蛋白质含量、MDA含量和SOD活性的影响( n=10±s)

与模型组比较: 1) P＜0．05，2) P＜0．01

组别　　蛋白质含量( g/L) SOD活性( U/mgprot) MDA含量( nmol/mgprot)正常对照组　2．96±0．49　 128．84±39．031)　1．97±0．691)模型组　2．59±0．51　 87．73±22．71　 3．14±1．19阳性对照组　2．81±0．30　 114．88±24．661)　2．06±1．041)卷柏总黄酮高剂量组　2．82±0．25　 125．49±32．502)　2．09±0．891)卷柏总黄酮中剂量组　2．88±0．24　 113．82±19．701)　2．16±0．661)卷柏总黄酮低剂量组　2．81±0．35　 111．97±23．551)　2．43±1．07

3讨论

动物长期注射D－gal会引起全身代谢紊乱，产生各器官衰退，这一过程与机体的自然衰老过程相似，是衰老研究中常用的一种衰老试验动物模型。自由基理论在衰老学说中占有重要地位，半乳糖衰模型也得到了自由基衰老学说的支持和验证。机体脂质过氧化反应随年龄而增加，同时伴有抗氧化系统功能下降，导致体内自由基浓度升高，超过机体的防御能力，造成细胞结构和功能损伤。D－gal可引起模型体内SOD活性下降、MDA增加、学习记忆障碍。氧自由基攻击生物大分子使SOD等合成减少，减弱了抗氧化酶清除氧自由基的能力。本试验表明卷柏总黄酮可显著改善D－gal衰老模型小鼠的衰老指征，能明显抵抗由D－gal所致衰老小鼠免疫器官的萎缩，使D－gal衰老模型小鼠大脑SOD活性增加、MDA含量下降，具有抗氧化、抗衰老作用，因此，卷柏总黄酮有望开发成防衰老、抗老年痴呆的植物源性药物。