大鼠血清低密度脂蛋白胆固醇直接测定与计算结果的比较

2016-04-08施嘉琛高文晖北京市疾病预防控制中心北京100013

实验动物与比较医学 2016年1期

李红，施嘉琛，高文晖（北京市疾病预防控制中心，北京 100013）

李红，施嘉琛，高文晖
（北京市疾病预防控制中心，北京 100013）

目的比较直接测定与公式计算大鼠血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）结果是否存在差异。方法用直接一步法检测大鼠血清中LDL-C；根据Friedewald公式，通过总胆固醇（TC）、血清甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量计算LDL-C，并将两组数据进行比较。结果直接测定大鼠血清和公式计算LDL-C结果差别无统计学意义（P＞0.05），两种结果相关性良好（相关系数为0.976 0）。结论在进行相关动物实验时，因血样采集或实验室检测条件有限时，可使用Friedewald公式计算LDL-C。

低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）； Friedewald公式计算法；大鼠血清；血脂

血脂常规检测包括血清总胆固醇（TC）、血清甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的测定。血脂测定结果的异常与人类健康息息相关，其中高TC血症就是冠心病的危险因素之一，TG的升高表明体内存在代谢异常，HDL-C水平与冠心病呈负相关，而LDL-C的异常更是造成体内动脉硬化发生发展的主要脂类危险因素。

动脉粥样硬化（AS）是指动脉内膜的脂质、血液成分的沉积，平滑肌细胞及胶原纤维增生，伴有坏死及钙化等不同程度病变的一类慢性进行性病理过程。AS是心脑血管系统中最常见的疾病，严重危害人类的健康。通过对实验动物建立高血脂模型，进行各种降脂研究来改善脂代谢异常［1-9］。提供准确的血脂检测数据是研究的基础，在动物血样采集、实验室检测条件以及项目经费发生问题时，LDL-C的直接测定是否可以改为使用公式计算，本文主要是比较直接测定与公式计算大鼠血清低密度脂蛋白胆固醇结果是否存在差异提供支持数据。

1 材料与方法

1.1 仪器设备

全自动生化分析仪日立- 7600P模块（日立高新技术有限公司，日本）。

1.2 试剂、血脂复合校准品和质控血清

TC，胆固醇氧化酶法； TG，去游离甘油法； HDL-C 和LDL-C使用一步法，均使用双试剂。血脂试剂、四项复合校准品，以及质控血清是由和光（和光纯药工业株式会社，日本）提供。血脂复合校准品TC、TG、HDL-C和LDL-C使用计量单位mmol/L的浓度。

1.3 大鼠血样

6～8 周龄清洁级Wistar大鼠70只（雌雄各半），由军事医学科学院实验动物中心提供［SCXK-（军）2012-0004］。戊巴比妥钠麻醉，腹主动脉取血，室温分离血清。

1.4 实验方法

在日立7600生化分析仪P模块上同时检测70例大鼠血清TC、TG、HDL-C和LDL-C，样品编号1、2放质控血清，3～72编号为大鼠血样，73、74号为质控血清。打开通讯实时监测将数据传入实验室信息管理系统。按照法定计量单位mmol/L，Friedewald公式计算法，LDL-C=TC-（HDL-C）-TG/ 2.2。在实验室信息管理系统LIMS（Laboratory Information Management System，LIMS）设置计算项目直接计算LDL-C输出结果。

1.5 统计方法

实验室信息管理系统输出的所有实验数据直接使用SPSS16.0软件包进行t检验和相关回归分析统计处理，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清血脂检测结果

TC=1.91±0.32 mmol/L， TG=0.62±0.16 mmol/L，HDL-C = 0.87±0.14 mmol/L，LDL-C = 0.77± 0.36 mmol/L。

2.2 计算结果

根据公式计算，大鼠血清低密度脂蛋白胆固醇为0.761±0.311 mmol/L，与实测结果（0.77± 0.36 mmol/L）差别无统计学意义（t=1.356， P=0.179）。

2.3 测定值与计算值的相关性

大鼠血清LDL-C直接测定与公式计算的结果线性回归方程y=0.854 4X+0.099 2，r2为0.954 6，相关系数r为0.976 0。

3 讨论

大鼠血清LDL-C直接测定与公式计算两种结果差别无统计学意义，根据美国临床实验室标准协会（CLSI）EP9-A2文件的要求r≥0.975（或r2≥0.95）［10］，两种结果有良好的相关性。这与相关文献报道的结果一致［11～14］。

血脂检测中TC和TG有完整的参考系统、决定性方法和参考方法。TC和TG决定性方法都是用同位素稀释-质谱法； TC参考方法为正己烷抽提L-B反应显色法（ALBK法）； TG参考方法为二氯甲烷抽提，变色酸显色法； TC常规方法为酶法（CODPAP法）； TG常规方法为酶法（GPO-PAP法）。HDL-C 和LDL-C没有决定性方法，只有参考方法，参考方法是超速离心结合选择性沉淀法［15］。LDL-C使用间接计算法，是Friedewald于1972年发明的一个经验式。运用时有一定条件，空腹血清不含乳糜微粒， TG浓度在4.60 mmol/L以下， Ⅲ型高脂血症除外。血清TG 含量2.26 mmol/L以下，计算的LDL-C与其实测值符合为90%， TG在2.26～4.50 mmol/L时，符合率是72%，TG在4.50～6.80 mmol/L，符合率只有39%±10%［16］。大鼠血清TG含量通常比人血清含量（TG=0.62±0.16 mmol/L）低，正好在实际测定值与计算值符合率90%的组内。大鼠血清LDL-C直接测定与公式计算两种结果得到了相关性良好和差别无统计学意义结论。

对于检测血脂标本采集和处理，测定人血样血脂时，在清晨空腹采血。因此建议采集大鼠血液时禁食采血。同时建议使用血清标本进行分析，肝素抗凝的血浆不影响血脂分析，EDTA抗凝血浆TC和TG含量比血清大约低3%［15］。血清密封4 ℃冰箱中可稳定4 d，确保血脂分析前的质量控制。

动物血样不易采集，一方面是采血部位问题，另一方面是采血量。各实验室采集大鼠标本部位差异很大，采用断头、麻醉采集腹主动脉、眼内眦动脉等。大鼠血样采集部位的不同也会导致某些项目检测结果的差异［17，18］，另外分析试剂和仪器也是保证质量的关键［19，20］。日常工作中多使用常规方法检测批量标本，实验中样品编号1、2放质控血清，3～72编号为大鼠血样，73、74号为质控血清，这样的编号顺序目的是用质控血清监控大鼠血样全部检测过程。在卫生部临床检验中心室间质量评价活动中获得合格的成绩［21］，与卫生部北京老年医学研究所、美国疾病预防控制中心进行的常规方法分析和参考物质比对都获得满意结果［22］。某些动物实验的实验室不具有生化分析的检测能力，可能使用手工或半自动分析设备。项目经费紧张是另一可能遇到的困难，当不能直接测定LDL-C时，在确保TC、TG、HDL-C检测准确的前提下，可用Friedewald公式计算低密度脂蛋白胆固醇。

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