类风湿关节炎血清植物性食物过敏原特异性IgG和IgE检测

谭　宁，贺守第，倪慧婕，杨平常，刘志刚，黄胜光，吉琼梅

(深圳市第六人民医院中医风湿科，深圳 518060)

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种由多种因素诱发的常见、多发的自身免疫性疾病，病因涉及遗传、感染、精神、神经、内分泌、外界环境刺激等多个方面[1]。研究发现，食物过敏与RA发病具有一定相关性，Haugen等[2]研究表明，接近1/3的包括RA在内的自身免疫性疾病患者的病情与食物过敏有密切联系。目前国内关于RA食物过敏因素的临床研究报道甚少，因此本研究旨在观察临床RA患者血清多种食物过敏原IgG、IgE水平，研究其与食物过敏的相关性。

资料与方法

一般资料

50例处于疾病活动期的RA患者均来自2013年9月至2014年5月深圳市第六人民医院中医风湿科住院部，其中男12例，女38例；平均年龄52岁。疾病诊断均符合2010年ACR/EULARRA诊断标准[3]，活动期评估按照疾病活动(disease activity score，DSA)28评分：根据人体28个关节压痛指数、肿胀计数、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)水平以及患者自身情况评估，其中压痛或者有肿胀的关节1分，压痛同时有肿胀的关节2分，然后将所有数据加起来，代入公式计算，DAS28评分将疾病活动分为四级：缓解(DSA28<2.6)、轻度活动(2.6≤DSA28<3.2)、中度活动(3.2≤DSA28<5.1)和重度活动(DSA28≥5.1)。将DSA28≥2.6疾病活动患者纳入该研究，45例正常人来自深圳市第六人民医院体检科，其中男14例，女31例；平均年龄45岁。

材料

4种植物性食物过敏原粗蛋白(花生、大豆、榛子、小麦)由深圳大学医学院过敏免疫变态反应室提供，HRP-山羊抗人IgG(Santa cruz)，HRP-鼠抗人IgE(Santa cruz)，酶标分析仪(Thermo Fisher)，TMB(阿拉丁公司)。

方法

空腹静脉抽血，3 500 r/min离心10 min，分离血清，-80 ℃保存，采用酶联免疫吸附(ELISA)间接法测量血清8种食物过敏原OD值。

血清食物过敏原IgG检测：以花生、大豆、小麦、榛子等4种植物性食物过敏原粗蛋白5 μg/ml(稀释于碳酸盐)37 ℃包被3 h，用5%的BSA/PBS于4 ℃封闭过夜，以1%的BSA/PBST稀释血清(1∶200)，37 ℃孵育2 h，PBST洗板5次，加入二抗HRP-山羊抗人IgG(1∶5 000稀释于PBST)，37 ℃孵育2 h，PBST洗板5次，经TMB显色后H2SO4终止反应，酶标仪读取A450OD值。

血清食物过敏原IgE检测：以花生、大豆、小麦、榛子等4种食物过敏原粗蛋白5 μg/ml(稀释于碳酸盐)37 ℃包被3 h，用1%的BSA/PBS于4 ℃封闭过夜，以1%的BSA/PBST稀释血清(1∶10)，37 ℃孵育2 h，PBST洗板3次，加入二抗HRP-鼠抗人IgE(1∶1 500稀释于PBST)，37℃孵育2 h，PBST洗板3次，TMB显色后H2SO4终止反应，酶标仪读取A450OD值。

统计学处理

结　　果

RA组与正常组食物过敏原特异性IgG比较

RA组与正常组血清花生、大豆特异性IgG比较差异有统计学意义(P<0.01)，血清榛子、小麦特异性IgG比较差异无统计学意义(P>0.05)(表1)。

RA组与正常组食物过敏原特异性IgE比较

RA组与正常组血清花生、大豆、榛子、小麦特异性IgE比较差异无统计学意义(P>0.05)(表2)。

老年性类风湿关节炎组与非老年性类风湿关节炎组食物过敏原比较

老年性(≥60岁)与非老年性(<60岁)类风湿关节炎患者血清花生、大豆、榛子、小麦特异性IgG、IgE比较差异无统计学意义(P>0.05)(表3、4)。

分组例数食物过敏原花生大豆榛子小麦正常组451.08±0.351.07±0.321.17±0.411.31±0.39RA组501.31±0.36*1.22±0.33*1.12±0.391.24±0.38

*与正常组相比，P<0.01

分组例数食物过敏原花生大豆榛子小麦正常组450.13±0.050.11±0.050.11±0.060.12±0.04RA组500.12±0.050.10±0.030.10±0.060.11±0.05

分组例数食物过敏原花生大豆榛子小麦NERA组381.34±0.341.22±0.321.14±0.401.26±0.40ERA组121.20±0.381.20±0.341.07±0.331.17±0.29

NERA: 非老年性类风湿关节炎；ERA:老年性类风湿关节炎

分组例数食物过敏原花生大豆榛子小麦NERA组380.13±0.050.09±0.020.11±0.050.12±0.04ERA组120.12±0.040.10±0.030.11±0.040.12±0.03

NERA: 非老年性类风湿关节炎；ERA:老年性类风湿关节炎

讨　　论

近年来，随着社会发展，食物过敏成为人们日益关注的问题。研究报道，食物过敏能诱发或加重自身免疫性疾病，如复发性风湿病[4]、炎症性肠病[5]、幼年特发性关节炎[6]。早在1979年和1986年，Skoldstam等[7- 8]通过试验证实饮食控制可以减轻RA患者疾病活动度和症状。2006年，Karatay等[9]通过食物饮食结构控制对比20例食物过敏阳性RA患者和食物过敏阴性RA患者发病情况，发现个人食物膳食能影响RA疾病活动度。2010年Liden等[10]报道33%RA患者的病情与食物过敏有密切联系，摄入某些食物过敏原，如小麦、玉米、牛奶、牛肉等可加重RA病情，食物过敏可能是RA疾病的影响因素。

食物过敏主要包括IgE介导的速发型过敏反应和IgG介导的迟发型过敏反应，本研究检测了50例RA患者血清花生、大豆、榛子、小麦特异性IgG、IgE，结果发现RA患者血清花生、大豆IgG明显高于正常人(P<0.01)，而特异性IgE无明显差异。又通过比较老年、青年型RA 4种食物过敏原特异性IgG、IgE，发现年龄间无明显差异。根据试验结果，可知食物不耐受与RA有一定的相关性，本文检测到花生、大豆特异性IgG与RA相关性较大。目前广泛认可的食物不耐受机制是德国科学家Fooker博士阐述的食物进入肠道，由于肠道缺乏某种酶类或者功能紊乱产生食物特异性的IgG抗体，IgG抗体和食物分子结合形成免疫复合物进入血液循环而引起的免疫反应。RA也属于一种以免疫复合物沉积为特征的自身免疫性疾病。猜测食物不耐受诱发RA的机制可能是产生的食物特异性IgG免疫复合物与RA免疫复合物存在某种相似性，能够沉积于关节，诱发RA疾病产生；或者是花生、大豆中含有某种特征性抗原决定簇与RA患者体内免疫复合物表面抗原决定簇相似，被人体免疫系统识别，引起自身免疫性疾病。综上，到食物过敏与RA疾病具有相关性，将来可进一步深入研究RA患者体内食物相关性免疫复合物的种类和含量，为RA的预防和治疗提供新的方法。

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