卡培他滨杂质ABC含量测定方法的选择

朱叶芬　胡婷霞　石玲玲

摘 要：目的：建立高效液相色谱法测定卡培他滨原料中杂质ABC含量。方法：色谱柱：Agilent ZORBAX SB-Aq柱（4.6×250mm，5mm）；流动相：A相0.1%醋酸：甲醇：乙腈65：30：5，B相0.1%醋酸：甲醇：乙腈15：80：5，梯度洗脱；检测波长： 250nm；流速：1.0ml/min；柱温：40℃。结果：卡培他滨杂质A的含量按外标法、自身对照法和加校正因子的自身对照法计算分别为 0.073%，0.078%，0.077%；杂质B的含量分别为0.034%、0.026%、0.033%；杂质C的含量分别为0.030%、0.029%、0.031%。结论：卡培他滨杂质A跟C的含量选择自身对照法，杂质B的含量选择加校正因子的自身对照法。

关键词：高效液相色谱方法；卡培他滨；杂质

市面上的卡培他滨是由罗氏生产的希罗达，用于联合化疗治疗晚期或转移性结直肠癌、晚期或转移性胃癌，也适用于紫杉醇和化疗方案治疗无效的晚期原发性或转移性乳腺癌的进一步治疗。本文在美国药典的基础上[1]优化色谱条件，建立了更合适的色谱条件对卡培他滨的杂质进行更好的控制。该方法简便，精确，对卡培他滨制剂的质量研究具有积极意义。

1 仪器、试剂与对照品

Agilent 1100高效液相色谱仪，紫外检测器；METTLER TOLEDO XS105 DualRange 电子天平

甲醇和乙腈，色谱纯；冰醋酸为分析纯；水为纯水

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-Aq （4.6×150mm，5μm）；流动相A：0.1%冰醋酸：甲醇：乙腈65：30：5，B相0.1%冰醋酸：甲醇：乙腈15：80：5，梯度洗脱。0～5min，A相100%；5～20min，A相100%～60%；20～30min，A相60%～50%；50min，A相50%；流速1ml/min，柱温40℃，波长250nm

2.2 对照品储备液的制备

分别取杂质ABC约11.25mg精密称定，至同一250ml容量瓶中，加水：甲醇：乙腈（65：30：5）的混合溶液振摇至完全溶解，再加水：甲醇：乙腈（65：30：5）的混合溶液稀释定容至刻度，作为对照品储备液。

2.3 线性范围考察

精密吸取上述对照品储备液0.2ml、0.5ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.5ml，分别加水：甲醇：乙腈（65：30：5）的混合溶液稀释至25ml，作为20%、50%、80%、100%、120%、150%对照品溶液，各进样10μl，按“2.1色谱条件”分析。以浓度（μg/ml）为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，结果见表1。试验结果表明在各自的线性范围内，三种杂质均有良好的相关性。

2.4 供试品溶液的制备

取卡培他滨原料适量，精密称定至25ml容量瓶中，加水：甲醇：乙腈（65：30：5）的混合溶液适量使溶解，再加水：甲醇：乙腈（65：30：5）的混合溶液稀释定容至刻度，制成约0.6mg/ml的溶液作为供试品溶液。

2.5 重复性试验

分别精密称取批号为110701的卡培他滨原料按“2.4”项下的方法制得6份供试品溶液，各进样10μl，按“2.1色谱条件”分析。按自身对照法、外标法、加校正因子的自身对照法以峰面积计算，比较三种方法，结果见表2

2.6 加样回收率实验

取“2.5”项下的卡培他滨原料（批号110701）约15mg量，分别精密称定，置25ml容量瓶中，分别加入“2.2”项下对照品储备液0.2ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml各3份，按“2.4”项下制得12份供试品溶液，各进样10μl；同时取“2.3”项下100%对照品溶液进样10μl，以“2.5 重复性试验”项下的测定结果（自身对照法、外标法、加校正因子的自身对照法）为批号110701的含量，按外标法以峰面积计算，结果见表3。

2.7 溶液稳定性试验

取“2.3”项下100%对照品溶液分别于0、2、4、6、8、10、12小时进样10μl。试验结果表明，溶液在12小时内稳定。

2.8 樣品含量测定

取卡培他滨原料3批（110701、110702、110703）各两份，按“2.4”项制得供试品溶液，各进样10μl；同时取“2.3”项下100%对照品溶液进样10μl，按外标法、自身对照法、加校正因子的自身对照法以峰面积计算，结果见表4。

3 讨论

本文用外标法、自身对照法、加校正因子的自身对照法三种方法对卡培他滨中三种杂质含量的测定方法进行了选择，杂质A跟C的含量用三种方法测得的结果一致，自身对照法最简便，故杂质A跟C的含量选择自身对照法；杂质B相对于卡培他滨的校正因子为0.78，故不能直接用自身对照法来计算，实验结果表明外标法及加校正因子的自身对照法计算结果一致，故杂质B的含量选择加校正因子的自身对照法。

参考文献

[1] 卡培他滨《美国药典》标准