HPLC波长切换法测定复方红根草片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量

唐德智

南宁食品药品检验所，广西　南宁　530001



HPLC波长切换法测定复方红根草片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量

唐德智

南宁食品药品检验所，广西南宁530001

【摘要】目的： 建立HPLC波长切换法同时测定复方红根草片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的测定方法。方法：采用Waters SunFire C18(4.6mm×250mm，5μm) 色谱柱；流动相：甲醇-水(52∶48)；流速：1.0ml/min；检测波长：225nm(0~10min，穿心莲内酯)，254nm(10~30min)。结果：穿心莲内酯在0.031～0.553μg范围内线性关系良好(r=0.9999，n=6)，平均回收率为99.95%，RSD为1.5%(n=9)；脱水穿心莲内酯在0.049～0.887μg范围内性关系良好(r=0.9998，n=6)，平均回收率为99.31%，RSD为1.1%(n=9)。结论：该方法简便、快捷、准确，可用于该制剂的质量控制。

【关键词】复方红根草片；穿心莲内酯；脱水穿心莲内酯；波长切换

复方红根草片是由金银花、穿心莲、红根草、鱼腥草、野菊花5味中药制成的中药制剂，具有清热解毒的功效，临床用于急性咽喉炎、扁桃体炎、肠炎、痢疾等。原质量标准简单，仅规定常规检查，无定性定量检测指标，不能有效控制药品质量[1]。方中穿心莲具有清热解毒、凉血、消肿的功效，而穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯是穿心莲药材的主要有效成分。《中国药典》2010年版一部将穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯作为穿心莲药材的含量测定质量控制指标[2]。研究参考有关文献 [3-5]，采用HPLC波长切换法同时测定复方红根草中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，方法准确，操作简便，可用于该制剂的质量控制。

1仪器与试药

1.1仪器Waters 2695高效液相色谱仪，2489UV检测器(美国沃特斯公司)；UV-2550型紫外可见分光光度计(日本岛津公司)；S180H型超声波清洗器(德国Elma公司)；XS205DU型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。

1.2试药穿心莲内酯对照品(批号：110797-200307)、脱水穿心莲内酯对照品(批号：110854-201007)均购于中国食品药品检定研究院；复方红根草片(市售药品，每片重0.31g，批号：130109、130307、130501、130904、131106)；甲醇、磷酸为色谱纯，水为超纯水。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：Waters SunFireTM C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-水(52∶48)；检测波长：0~10min 225nm(穿心莲内酯),10~30min 254nm(脱水穿心莲内酯)；流速：1.0ml·min-1；柱温：30℃；进样量：10μl。

2.2溶液制备

2.2.1对照品溶液制备分别精密称取干燥至恒重的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品各适量，置同一50ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，配制成1ml含穿心莲内酯61.4μg 、脱水穿心莲内酯98.6μg的混合对照品储备溶液，备用。

2.2.2供试品溶液的制备取本品内容物，混匀，取0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，称定重量，浸渍30min，超声处理30min(功率300W，频率40kHz)，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

2.2.3阴性样品溶液的制备按处方比例及工艺制备缺穿心莲药材的阴性样品，再按“2.2.2”项下方法制备阴性样品溶液。

2.3方法学考察

2.3.1专属性试验分别精密吸取供试品溶液、阴性样品溶液和混合对照品溶液的稀释液各10μl，在上述色谱条件下，注入液相色谱仪，记录液相色谱图，结果见图1。由色谱图可见，在与对照品色谱峰相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，阴性样品对测定无干扰。

2.3.2线性关系考察精密吸取“2.2.1”项下混合对照品储备溶液0.5、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0ml分别置于10ml量瓶中，加甲醇至刻度，制成系列浓度混合对照品溶液，取上述对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，记录峰面积。以进样量x(μg)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，进行线性回归，绘制标准曲线。穿心莲内酯回归方程：Y=2.45×106x+8.39×103，r=0.9999，脱水穿心莲内酯回归方程：Y=1.72×106x+1.61×104，r=0.9998。结果表明穿心莲内酯在0.031～0.553μg、脱水穿心莲内酯在0.049～0.887μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系。

2.3.3精密度试验精密吸取“2.3.2”项下中间质量浓度的混合对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，每次10μl，记录色谱峰峰面积，结果穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯峰面积的RSD分别为1.1%、0.7%。

2.3.4稳定性试验取同一供试品溶液(批号：130501)，按上述色谱条件，分别于1、2、4、8、12、24h进样分析，记录色谱峰面积，结果表明穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯峰面积的RSD分别为1.2%、1.5%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.3.5重复性试验称取同一批样品(批号：130501)0.5g，平行称取6份，按“3.2”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下测定，测得穿心莲内酯平均含量为1.48mg/g，RSD为1.5%，脱水穿心莲内酯平均含量为2.42mg/g，RSD为1.3%，。

2.3.6加样回收率试验精密称取已知含量的同一批号样品(批号：130501)约0.25g，平行称取9份，置具塞锥形瓶中，分别加入穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液, 按上述色谱条件测定,计算回收率。结果穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的回收率分别为：99.95%(RSD=1.5%，n=9)；99.31%(RSD=1.1%，n=9)。结果表明，采用本方法测定复方红根草片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，方法回收率良好。

2.4样品测定取5批复方红根草片，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，每批平行制备3份，按上述色谱条件测定，每份样品重复测定2次，以外标法计算样品中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，结果见表1。

表1　样品含量测定结果　(n=3)

3讨论

3.1在供试品溶液制备过程中，分别考察了不同浓度乙醇、甲醇等溶剂进行超声提取，结果以50%甲醇超声提取效率较好。同时比较超声提取法与回流法，结果表明，超声提取法提取的含量高于回流法提取的含量，故选择超声提取法制备供试品溶液。

3.2取穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品溶液，置UV-2550紫外可见分光光度计下于190～400nm波长范围内进行紫外光谱扫描，结果穿心莲内酯在225nm处有最大吸收，脱水穿心莲内酯在254nm处有最大吸收。为保证各成分在检测波长处有最大吸收，根据穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯在色谱图中出现顺序的不同，依次改变检测波长，来达到同时测定复方红根草片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的目的。

3.3未见同时测定复方红根草片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的报道，实验采用HPLC切换波长的方法，同时测定复方红根草片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，该方法简便、准确，可用于该制剂的质量控制。

参考文献

[1]卫生部药品标准.中药成方制剂(第2册)[S].1990:170.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部) [S].北京:中国医药科技出版社，2010:205.

[3]钟名诚.复方红根草片质量标准的研究[J].中国药品标准，2006,7(5):25-29.

[4]姚洁，陈健文.HPLC法测定玉叶清火胶囊中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量[J].中国民族民间医药杂志，2012,10(6):35-36.

[5]张若良，钟国庆，刘小玉.HPLC法测定穿黄清热胶囊中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量[J].江西中医药大学学报，2014,26(5):64-70.

(收稿日期：2015.12.20)

【中图分类号】R284.1

【文献标志码】A

【文章编号】1007-8517(2016)04-0045-02

作者简介：唐德智，男，副主任中药师。E-mail：tangdz7497@163.com