急性白血病患者骨髓CD47表达变化及意义

张睿，王娟，马洪玉，赵芳，许卫星，刘静，尹凤雷

(沧州市中心医院，河北沧州 061001)

急性白血病患者骨髓CD47表达变化及意义

张睿，王娟，马洪玉，赵芳，许卫星，刘静，尹凤雷

(沧州市中心医院，河北沧州 061001)

目的 观察CD47在急性白血病(AL)患者骨髓中的表达变化，并探讨其对患者疗效和预后的判断价值。方法 选择AL患者97例(观察组)，同期拟行骨髓检查的健康体检者32例(对照组)。采用流式细胞术检测两组入组时骨髓CD47阳性表达率，记录观察组治疗2个疗程的完全缓解(CR)率，以及出院1年疗效已达到CR患者的复发情况，分析CD47表达与患者疗效、复发情况的关系。结果 观察组与对照组治疗前CD47阳性表达率分别为71.13%(69/97)、3.57%(7/32)，两组比较P<0.05。治疗2个疗程，观察组CD47阳性表达者与阴性表达者CR率分别为43.48%(30/69)、71.43%(20/28)，CD47不同表达者比较P<0.05。出院1年，观察组CD47阳性表达者与阴性表达者复发率分别为63.33%(19/30)、35.00%(7/20)，CD47不同表达者比较P<0.05。结论 AL患者骨髓CD47表达升高，其表达情况检测有助于对患者疗效及预后的判断。

急性白血病；CD47；疗效；复发

急性白血病(AL)是一类造血组织的恶性肿瘤，发病原因是由于造血干细胞及祖细胞发生恶性病变，失去正常的增殖、分化及成熟能力，从而无限持续增长，逐步取代骨髓直至全身组织及器官[1]。随着生活环境的恶化和生活方式的变化，AL的发病率逐年上升[2]。临床上将AL分为急性淋巴细胞白血病(ALL)及急性髓系白血病(AML)两类[3]。AL发病原因尚未明确，研究证实白血病干细胞(LSC)可能与白血病的发生、发展及复发有关[4]。CD47是一种免疫球蛋白，广泛表达于不同组织的LSC细胞膜表面，具有黏附、吞噬、参与信号转导等多种生理功能[3,5]。本研究观察AL患者骨髓中CD47表达变化，并探讨其对患者疗效和预后判断的作用。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2013年6月～2015年5月我院血液科收治的AL患者97例(观察组)，男57例、女40例，年龄14～65(41.49±5.21)岁；FAB分型[3]：M0型12例，M1型11例，M2型10例，M2a型11例，M2b型12例，M3型11例，M4型12例，M5型11例，M6型7例；ALL 38例，AML 59例。纳入标准：①经骨髓和外周血细胞形态、免疫表型、染色体核型和白血病特异相关融合基因检测均确诊为AL；②均为初次治疗者，近1个月内未进行任何相关化疗；③临床资料保存完整；④患者及其家属均签署知情同意书。排除标准：①合并其他疾病者；②病理资料不完整者；③属于疾病晚期者。选取同期行骨髓检查的健康体检者32例(对照组)，男18例、女14例，年龄16～66(42.01±4.14)岁。两组性别、年龄具有可比性。

1.2 治疗方法 观察组除给予输血、抗感染及对症治疗外，AML患者采用IDA (去甲氧柔红霉素+阿糖胞苷)、DA(柔红霉素+阿糖胞苷)或 MA(米托蒽醌+阿糖胞苷)为主的方案进行诱导缓解化疗，ALL患者采用VDCP(长春地辛+柔红霉素+环磷酰胺+强的松)和VDLP(长春地辛+柔红霉素+左旋门冬酰胺酶+强的松)为主的方案进行诱导缓解化疗。疗程均为1个月，共2个疗程。

1.3 骨髓CD47表达检测 采用流式细胞术。观察组于治疗前、治疗后及出院后1年分别采集骨髓2～5 mL，对照组入组时采集等量骨髓，置于含有EDTA的试管中。取50 μL骨髓，加入3种荧光标记抗体[异硫氰酸荧光素(FITC)、藻红蛋白(PE)、PE-CY7标记的单克隆抗体]20 μL，涡旋混匀。4 ℃条件下反应20～30 min，加入2 mL红四宝溶解液，震荡后室温下放置10 min。1 000 r/min离心5 min，弃去上清液，使用1 mL PBS反复洗涤3次；加入PBS制成单细胞悬液，调整细胞浓度为1×105/mL，以CD45/SSc设门识别白血病幼稚细胞，以白血病细胞表面抗原表≥20%为CD47阳性。

1.4 疗效评价及随访 观察组治疗2个疗程，参照文献[3]方法评价临床疗效，计算完全缓解(CR)率。观察组出院1年，由至少两名专业医护人员进行随访，详细记录获得CR患者的复发情况。复发标准：白血病临床症状依然存在，血细胞检查不合格，外周血中依然存在白血病细胞，或存在骨髓外的白血病细胞浸润现象。

1.5 统计学方法 采用SPSS18.0统计软件。计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组骨髓CD47阳性表达率比较 观察组治疗前CD47阳性表达率为71.13%(69/97)，对照组为3.57%(7/32)，两组比较P<0.05。观察组中AML患者CD47阳性表达率为67.80%(40/59)，ALL患者为76.32%(29/38)，两者比较无统计学差异(P>0.05)。

2.2 观察组CD47表达与疗效的关系 治疗2个疗程，观察组CD47阳性表达者与阴性表达者CR率分别为43.48%(30/69)、71.43%(20/28)，CD47不同表达者比较P<0.05。AML患者中，CD47阳性表达者与阴性表达者CR率分别为45.00%(18/40)、63.16%(12/19)，CD47不同表达者比较P<0.05；ALL患者中，CD47阳性表达者与阴性表达者CR率分别为41.38%(12/29)、88.89%(8/9)，CD47不同表达者比较P<0.05；AML和ALL患者CD47阳性表达者或阴性表达者CR率比较均无统计学差异(P均>0.05)。

2.3 观察组CD47表达与复发的关系 出院1年，观察组CD47阳性表达者与阴性表达者复发率分别为63.33%(19/30)、35.00%(7/20)，CD47不同表达者比较P<0.05。AML患者中，CD47阳性表达者与阴性表达者复发率分别为55.56%(10/18) 、33.33%(4/12)，CD47不同表达者比较P<0.05；ALL患者中CD47阳性表达者与阴性表达者复发率分别为75.00%(9/12)、37.50%(3/8)，CD47不同表达者比较P<0.05；AML和ALL患者CD47阳性表达者或阴性表达者CR率比较均无统计学差异(P均>0.05)。

3 讨论

AL的发病受到各种因素的影响，涉及多种染色体异位和基因突变，其发病机制尚未明确[3]。临床上主要通过骨髓移植和化疗来缓解AL患者的病情，但大部分患者容易在CR后再次复发，最终导致死亡[6,7]。研究证实，AL的发生、发展、复发与免疫逃逸和LSC关系密切[3]，而细胞表面抗原的表达对于机体的免疫应答具有重要作用。CD47是一种广泛表达于细胞表面的膜蛋白(又称为整合素相关蛋白)，通常在正常细胞，如红细胞、巨噬细胞、树突细胞等表面表达[8,9]。CD47可以与巨噬细胞表面分子信号调节蛋白α(SIRPα)结合，通过抑制吞噬细胞内酪氨酸磷酶的活化和吞噬性突触的聚集，抑制吞噬泡的形成。正常细胞可以向吞噬细胞发出信号，避免被吞噬，从而维持机体的正常功能。

本研究结果表明，观察组CD47阳性表达率明显高于对照组，提示CD47可以作为诊断AL的指标之一。分析原因，可能是白血病细胞表面表达的CD47与SIRPα结合后可以产生抑制信号，从而躲避巨噬细胞的吞噬并大量增殖，最终导致病情恶化[3]。经过两个疗程的治疗，观察组CD47阳性表达者CR率显著低于CD47阴性表达者，AML和ALL患者也出现同样的情况，表明白血病细胞表面CD47的表达对于AL的治疗效果具有一定的影响。可能是由于CD47阳性表达患者可以利用CD47-SIRPα结合调节蛋白α链结合，抑制吞噬细胞的吞噬功能，逃避免疫系统对白血病细胞的清除，从而降低CR率[10,11]。CD47阴性表达患者体内过度增殖的白血病细胞被机体的免疫系统清除出体外，因此经过治疗后CR率明显升高。这也为临床上可以通过抑制CD47和SIRPα结合治疗AL提供了理论基础。AL患者病情较难获得缓解，且缓解后容易复发。本研究发现，获得CR的CD47阳性表达患者复发率显著高于CD47阴性表达患者，在AML和ALL患者中也是如此；可能是AL患者体内CD47的阳性表达可以激活CD47-SIRPα通路的负向调节，从而降低被吞噬的概率和机体固有免疫系统的清除作用[12,13]；证实CD47可以作为判断AL患者预后的指标之一。

综上所述，AL患者骨髓CD47表达升高，CD47可作为判断患者疗效及预后的指标之一，但是其具体机制仍需进一步探讨。

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