‘伏脆蜜’枣苗木脱毒快繁技术研究

梁　浩刘和风黄书涛黄宪怀李鲁涛

（1.枣庄市果树科学研究所，山东枣庄277117；2.枣庄市农业技术推广中心，山东枣庄277800；3.山东省航空护林站，山东济南250014；4.枣庄市市中区林木保护站，山东枣庄277102；5.枣庄市森林资源监测管理站，山东枣庄277800；6.山东省农业广播电视学校，山东济南250013）



‘伏脆蜜’枣苗木脱毒快繁技术研究

梁浩1,2刘和风3*黄书涛4黄宪怀5李鲁涛6

（1.枣庄市果树科学研究所，山东枣庄277117；2.枣庄市农业技术推广中心，山东枣庄277800；3.山东省航空护林站，山东济南250014；4.枣庄市市中区林木保护站，山东枣庄277102；5.枣庄市森林资源监测管理站，山东枣庄277800；6.山东省农业广播电视学校，山东济南250013）

摘要：栽植脱毒苗木是防止枣疯病发生和蔓延的主要方法。本实验对‘伏脆蜜’枣脱毒快繁的启动培养基、继代培养基和生根培养基的不同类型生长调节剂配比进行了筛选。结果表明，启动培养基、继代培养基和生根培养基分别以MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 1.0mg/L、MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 2.0mg/L及1/2MS+IBA 0.5mg/L+6-BA 0.01mg/L效果最好。同时笔者整合了已有的研究成果，制定了‘伏脆蜜’枣脱毒快繁技术流程。

关键词：‘伏脆蜜’枣；枣疯病；脱毒快繁

枣疯病（Jujube witches'broom）系由植原体（Phytoplasma）引起的危害枣树的毁灭性病害，在国内外所有枣树栽培区几乎均有分布，主要通过嫁接和虫媒传播，防治比较困难，一旦发病极易造成病情迅速蔓延，成为制约枣树发展的主要障碍。

‘伏脆蜜’枣是枣庄市果树科学研究所2002年从‘枣庄脆枣’中选出的早熟鲜食品种，2006年12月通过山东省林木品种审定。该品种单果平均质量16.2g，脆熟期含可溶性固形物29％，口感酥脆多汁，品质极佳，果实生育期85～92d。该品种早果、丰产、稳产、适应性强，是国内极具推广前景的早熟优质枣品种之一。但由于该品种对枣疯病抗性一般，在枣疯病疫区栽培容易遭受其侵染危害。为有效降低枣疯病对‘伏脆蜜’枣的危害，培育脱毒苗木就成为控制该病发生和蔓延的主要方法。

近期，笔者对‘伏脆蜜’枣脱毒快繁的启动培养基、继代培养基和生根培养基的不同类型生长调节剂配比进行了筛选试验，以期对枣疯病的防治提供理论依据，促进枣树产业的发展。

1　材料与方法

1.1材料与试剂

供试品种为‘伏脆蜜’枣，取自于枣庄市果树科学研究所采穗圃；MS和1/2MS培养基，北京华越洋生物有限公司生产；NAA、6-BA、IBA，美国Caisson Labs生产，分析纯；酒精，苏州市绿森化工有限公司生产，分析纯；氯化汞，沈阳化学试剂厂生产，分析纯；吐温-20，济宁百川化工有限公司生产，化学纯。

1.2方法

春季剪取枣头枝，截成20cm左右的小段，用自来水洗净。将枝条置于45～50℃的恒温水浴锅内热处理60min。然后以20根为一捆在30℃左右的恒温锅内水培，每天换水1次，一般10d左右芽体开始萌发。

1.3测定指标与方法

2　结果与分析

2.1不同类型生长调节剂浓度配比对启动培养的影响

水培芽萌动后切取刚萌发的嫩芽，进行消毒灭菌，即用70％的酒精消毒10s，再用0.1％的氯化汞添加2～3滴吐温-20浸泡消毒5～10min，用无菌水冲洗3次。然后在解剖镜下剖离0.5mm长（约带1～2个叶原基）的茎尖分生组织，接种到添加NAA和6-BA（浓度分别为0.05mg/L、0.10mg/L、0.15mg/L及0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L共9个组合，以不加入任何生长调节剂为对照）的MS培养基上培养（见表1）。

由表1可见，‘伏脆蜜’枣在MS培养基上都能分化出愈伤组织，当不添加任何生长调节剂时，启动率最低，且形成的愈伤组织易褐化，不能在下一步继代培养中使用，这说明植物生长调节剂在‘伏脆蜜’枣的启动培养中起着重要的作用。两种生长剂配合使用，以处理5效果最好，其次为处理4。因此，‘伏脆蜜’枣启动培养基以MS添加NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L效果最好。

表1　不同浓度生长调节剂对启动培养的影响

2.2不同类型生长调节剂浓度配比对继代培养的影响

将脱去植原体的愈伤组织接种到添加NAA和6-BA（浓度分别为0.1mg/L、0.2mg/L及1.0mg/L、2.0mg/L共4个组合）的MS培养基中，培养温度25～27℃，光照强度1000lx，光照周期24h。

表2　不同浓度生长调节剂对继代培养的影响

增殖系数的大小直接关系到快繁效率的高低。由表2可以看出，‘伏脆蜜’枣在不同的继代培养基中，生长和发育状况是不同的。其中以处理2效果最好，在继代培养10～15d后，在接种的愈伤组织上分化出芽点，25d后，长出黄绿色新梢，增殖系数达2.4％，35d左右即可形成3～4cm健壮的小植株；其次为处理4，生长情况大体相同，只是增殖系数稍低于处理2；处理3明显差于以上两处理，生长缓慢，长势一般；处理1表现最差，生长缓慢，逐渐死亡。综合来看，以处理2的MS+NAA 0.1mg/L +6-BA2.0mg/L培养基效果最好。

2.3不同类型生长调节剂浓度配比对生根培养的影响

选用继代培养基中长势良好，芽苗健壮的茎段进行切割，转移到生根培养基中。生根培养基以1/2MS为基本培养基，添加IBA和6-BA，IBA浓度分别为0.5mg/L、1.0mg/L和1.5mg/L，6-BA浓度分别为0.005mg/L、0.010mg/L和0.020mg/L，共有9个组合。

表3　不同浓度生长调节剂对生根培养的影响

表3显示，生根率以处理5最高，达85.3％；其次为处理4，为81.7％；而生根数则以处理4最多，为3.6条；其次为处理5，为3.3条，但两组数据均相差不大。从实践来看，处理4发根早，移栽后生长旺，因此以处理4的1/2MS+IBA 0.5mg/L+6-BA0.01mg/L为生根培养基为较佳选择。

3　‘伏脆蜜’枣苗木脱毒快繁技术流程

‘伏脆蜜’枣苗木脱毒的快繁技术大致包括枣头水培→启动培养→继代培养→生根培养→驯化→移栽等几个流程。

3.1枣头水培

春季剪取枣头，清洗后进行热处理钝化植原体，然后进行水培。

3.2启动培养

水培芽萌动后切取刚萌发的嫩芽，消毒灭菌后剖离0.5mm长的茎尖分生组织（若是材料取自已脱毒植株而用于快速繁殖苗木的，可取3～5mm长的茎尖以提高接种成活率），接种到添加NAA 0.1mg/L+6-BA 1.0mg/L的MS培养基上培养。待有一定生长量后反复切割接种培养，即可获得脱去植原体的愈伤组织。

3.3继代培养

由启动培养得到的芽数量较少，将启动培养获得的愈伤组织接种到MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 2.0mg/L培养基中进一步扩繁增殖。

3.4生根培养

当继代培养的苗高长至4～7cm时，可将丛生芽剪成1cm左右带1～2个腋芽的茎段接种到1/2MS+IBA 0.5mg/L+6-BA0.01mg/L生根培养基上培养。

3.5驯化及移栽

在生根培养基上培养30d左右，苗高达6～9cm，有3条以上根时进行移栽。移栽前，可在温室内炼苗，即将试管苗置于温室内，保持温度28～30℃，同时在大棚内采用弥雾装置或进行间歇喷雾，保持相对湿度80％以上，适当遮阴，保持光照强度最高不超过5000lx，炼苗2～3d后打开瓶盖再炼苗3～4d，当试管苗叶色变绿时，用镊子取出，用温水洗净根部培养基，移栽到装有培养基质的容器中培育，培养基为珍珠岩和营养土3:1的混合物。栽好后立即浇透水，增加喷雾次数，使相对湿度保持在95％ ～100％之间，并逐渐增加光照强度。

4　结论

启动培养基、继代培养基和生根培养基中不同生长调节剂的适宜配比是脱毒快繁技术的关键。本研究通过实验筛选出了‘伏脆蜜’枣三种培养基的适宜配比如下：MS+NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L、MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 2.0mg/L及1/2MS+IBA0.5mg/L+6-BA 0.01mg/L。这为快速生产‘伏脆蜜’枣脱毒优质苗木、扩大种植面积及提高其果实产量和品质奠定了理论基础。

参考文献：

[1]余贤美,王海荣,安淼,等.泰安枣疯病植原体的分子鉴定[J].微生物学通报,2012,(11):1653-1660.

[2]安广驰.枣新品种伏脆蜜的选育[J].中国果树,2003,(3):1-2.

[3]史秀兰.伏脆蜜枣在苏北的引种表现[J].中国果菜,2008,(6):16.

[4]吴海.小枣带来大产业[J].中国果菜,2005,(4):23.

[5]徐希玉,刘振田,亓振翠.伏脆蜜枣大棚栽培技术[J].中国果菜,2005,(6):16.

[6]王娜,赵锦,刘孟军,等.四倍体冬枣和酸枣组织培养的研究[J].河北农业大学学报,2005,(5):48-51.

[7]孙清荣,刘庆忠,赵红军.酸枣的组织培养与快繁[J].落叶果树,2001,(6):1-2.

[8]张健夫,赵忠伟.酸枣组织培养及快繁的研究[J].长春大学学报,2012,(12):1512-1514,1531.

[9]张晓申,王慧瑜,曹辉,等.灰枣脱毒试管苗无性系建立的研究[J].北方果树,2004,(15):12-13.

[10]徐宪斌,高凤菊,朱金英.乐陵无核金丝小枣组培快繁技术体系的研究[J].山东农业大学学报（自然科学版）,2008,(2): 195-202.

Study on the Rapid Propagation of'Fucuimi'Jujube Seedlings

LIANG Hao1,2LIU He-feng3*HUANG Shu-tao4HUANG Xian-huai5LI Lu-tao6
(1.Zaozhuang Fruit Science Research Institute,Zaozhuang 277117,China;2.Zaozhuang Agriculture Technology Extension Centre,Zaozhuang 277800,China;3.Shandong Aviation Ranger Station,Jinan 250014,China; 4.Shizhong District Ranger Station in Zaozhuang,Zaozhuang 277102,China;5.Zaozhuang Forest Resources Monitoring and Management Station,Zaozhuang 277800,China;6.Shandong Agriculture Broadcasting and Television School,Jinan 250013,China)

Abstract:Planting virus-free seedlings is the main method to prevent the occurrence and spread of jujube witches'broom. The different ratio of growth regulators in rapid propagation media of'Fucuimi'were screened in these experiments.The results showed that the effect of MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 1.0mg/L,MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 2.0mg/L and 1/2MS+IBA 0.5mg/L+6-BA 0.01mg/L were the best in initiation medium,subculture medium and rooting medium respectively.At the same time,the author integrated the existing research results and formulated the technological process of rapid propagation of'Fucuimi'jujube.

Key words:'Fucuimi'jujube;jujube witches'broom;rapid propagation

*通讯作者：刘和风（1968—），男，高级工程师，主要从事林木种苗管理工作

作者简介：梁浩（1972—），男，高级农艺师，现从事果树技术研究与推广工作

基金项目：国家级星火计划（特早熟优质枣新品种—枣庄脆枣优系1号产业化，项目编号：2003EA740076；伏脆蜜枣标准化生产关键技术集成与示范，2014GA740026）；山东省农业科技成果转化资金项目（大枣新品种伏脆蜜中试与示范，鲁科农字[2010]79号）；山东省科技发展计划（大枣新品种伏脆蜜标准化生产技术研究与示范，2011GNC21301），山东省西部经济隆起带基层科技人才支持计划（枣庄地方枣良种产业提升关键技术集成与示范，XB2014FW030），枣庄市科学技术发展计划（枣庄市枣良种工程技术研究中心，201212）

收稿日期：2015-10-08

中图分类号：S665.1

文献标志码：A

文章编号：1008-1038(2016)02-0059-03