红细胞保存液混悬洗涤红细胞的制备及质量控制

庄运芳

红细胞保存液混悬洗涤红细胞的制备及质量控制

庄运芳

目的探讨红细胞保存液(MAP)混悬洗涤红细胞的制备及其质量控制。方法选取已制备的MAP混悬洗涤的红细胞，将其置入4℃冰箱中保存，分别储存14、21、35 d后取样，检测其溶血率。于储存35 d测定上清液蛋白含量、血红蛋白含量，并进行无菌试验。结果21 d溶血率与14 d比较差异有统计学意义(P＜0.05);35 d溶血率与21 d比较差异有统计学意义(P＜0.05);MAP洗涤红细胞在制备、洗涤中各项指标均符合国家质量标准。结论MAP混悬洗涤红细胞35 d后其质量控制符合《全血及成分血质量要求(GB18469-2012)》，但随着储存时间的延长，其溶血率会逐渐升高，建议临床使用在保存期21 d内的洗涤红细胞效果更佳。

红细胞保存液;洗涤红细胞;制备;质量控制

洗涤红细胞是由全血、悬浮红细胞、浓缩红细胞等血液制品经加工而成的血液成分，主要应用于临床自身免疫性溶血性贫血、高钾血症、血浆蛋白过敏以及阵发性睡眠性血红蛋白尿的患者。近年，随着输血技术的不断提高，洗涤红细胞的应用，已受到临床医师的高度认可与关注。由于洗涤红细胞的制备工艺较复杂，主要是经洗涤加入生理盐水混悬而成，保存期仅为24 h，临床应用较局限。而MAP混悬洗涤红细胞的保存期为35 d，通过保持一定的库存量，可满足其临床需求。本研究就对MAP混悬洗涤的红细胞的制备及质量控制项目进行分析，旨在制定科学、合理的库存量。

1 材料与方法

1.1 仪器及材料

采集400mL全血制备的红细胞20袋，选择迈瑞BS-420全自动生化分析仪(测定氰化高铁血红蛋白吸光度值)、迈瑞BC-300全自动血细胞分析仪、日立CR7低温离心机、费森尤斯卡比COMPODCK无菌接合机、SYSMEXKX-21N血细胞计数仪以及四联洗涤袋250mL;选择上海光谱仪器有限公司提供的752型可见分光光度计、瑞尔达生物科技有限公司提供的血浆游离血红蛋白试剂盒，选择便诊生物技术有限公司提供的培养基。

1.2 洗涤红细胞制备方法

采集第2天后，将检验合格的红细胞悬液用作制备洗涤红细胞悬液的起始血液，无破损渗漏，血液外观正常，在有效期内。待用洗涤溶液联袋提前放置冷藏保存，无破损渗漏，溶液外观正常，在有效期内。

取待洗涤的悬浮红细胞血袋，通过无菌接合机将其与洗涤溶液联合袋进行连接，检查该袋红细胞悬液确定无渗漏情况后，将洗涤溶液移至红细胞袋内，每单位红细胞(1个单位红细胞指200mL全血制备的红细胞)中加入的液体量约为100mL，夹紧导管，混匀。按制备洗涤红细胞的操作程序，在4℃条件下，以速度3900 r/min离心10min，离心后将血袋取出，避免震荡，垂直放入分浆夹中，把上清液转移至空袋内，夹紧导管。重复上述步骤3次，向洗涤结束的红细胞中加入适量溶液(50mL/u)，充分混匀。

本研究共制备20袋MAP混悬洗涤红细胞，通过无菌链接方式，将原洗涤红细胞袋中分装到3个转移袋中，并置于4℃冰箱保存，分别于存储14、21、35 d取样检测，采取自然沉降的方法，取的血浆，测定其溶血率，并于储存35 d测定上清蛋白含量、血红蛋白含量，严格按试剂盒操作说明书进行。

1.3 质量检测

血液外观检查:肉眼观察色泽是否出现异常、溶血、凝块、气泡等情况。

上清液蛋白含量测定:利用自然沉降的原理，经离心后，取上清液1mL，并加入磺基水杨酸3mL中充分混匀，应用可见分光光度计测定其吸光度，并与标准液吸光度进行比较，计算出上清液蛋白含量。

血红蛋白的测定:取样2～3mL，通过 SYSMEXKX-21N血细胞计数仪进行血常规检测，根据血红蛋白浓度，计算出血红蛋白含量。而无菌试验则应用全自动血液培养系统进行厌氧培养［1］。

溶血率的计算工式:测定管氰化高铁血红蛋白吸光度值×(1-红细胞比积)×100%/(全溶血对照管氰化高铁血红蛋白吸光度值×4)，无菌实验:无细菌生长。

1.4 国家质量标准

按《全血及成分血质量要求(GB18469-2012)》中关于洗涤红细胞质量标准:溶血率 ＜0.8%，血红蛋白含量≥18.0 g，上清液蛋白含量＜0.5 g［2］。

1.5 统计学处理

选取版本为SPSS19.0的统计学软件对本组计算机统计的数据结果进行分析处理，经检验，完成组间计数资料的分析比较，采取t检验，完成组间相关临床指标的比较，以±s表示，设P＜0.05时为组间比较差异明显，确定为组间存在统计学意义。

2 结果

2.1 不同储存时间溶血率分析

经统计分析，21 d溶血率与14 d比较差异有统计学意义(P＜0.05);35 d溶血率与21 d比较差异有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

2.2 MAP洗涤红细胞质量检测分析

经分析，MAP洗涤红细胞在制备、洗涤中各项指标均符合国家质量标准。

表1 不同储存时间溶血率分析 (%)

表1 MAP洗涤红细胞质量检测分析 (n=20)

3 讨论

洗涤红细胞的制备，去除了大部分血浆、白细胞、血小板、抗凝剂、乳酸、微小凝块等，可明显降低输血反应，易被患者接受。现阶段，洗涤红细胞主要应用于:①肝肾功能障碍、高钾血症等需要输血的患者;②输入全血后发生血管神经性水肿、荨麻疹及过敏性休克等疾病患者;③因反复输血产生血小板抗体，引起输血发热反应的患者;④自身免疫性溶血性贫血患者。近年，随着输血医疗技术的不断发展，生理盐水悬浮洗涤红细胞的制备方法，已难以满足临床需求。按《全血及成分血质量要求(GB18469-2012)》中关于洗涤红细胞保存期的制定，增加了使用MAP混悬洗涤红细胞，保存期为35 d。洗涤红细胞保存期的延长，血站可根据临床对洗涤红细胞的需求，建立洗涤红细胞储备库，可为临床及时提供所需产品。同时，在质量控制方面，蛋白清回收率的检测使用上清蛋白质含量取代，红细胞回收率的检测使用血红蛋白含量取代，取消白细胞清除率检测，同时增加无菌试验检测以及保存期溶血率检测。在检测方法上，应用四联洗涤血袋，可减少接管次数;应用无菌接合机进行接管，保证洗涤红细胞的制备过程在全密闭环境进行，可保证其安全性。

本研究显示，储存末期洗涤红细胞中溶血率、上清蛋白含量、血红蛋白含量及无菌试验检测结果均及外观检测均符合质量标准，同时随着保存时间的延长，其溶血率逐渐提高，这与文献报道结果相似［3］。因此，我站向临床建议使用洗涤红细胞的库存上限为21 d的血液效果更佳。本研究选用的洗涤红细胞，均为采集第2天以后血液。近年，国内外文献报道，采集第2天全血制备的洗涤红细胞合格率较当日血制备的洗涤红细胞合格率提高45%［4］。主要原因在于:血液保存期间，各成分含量有所不同，各成分含量会自然沉降，上层为淡黄色血浆，中间层为血小板和白细胞，下层为红细胞。全血保存1～2后，血液中含有的血小板、白细胞功能丧失，细胞裂解，经离心后，更容易将其洗去。同时，库存的全血由于黏稠度较高，红细胞难以悬浮，可提高血小板、白细胞的清除率，同时可提高红细胞回收率。故库存全血的洗涤效果较好。但在洗涤红细胞制备过程中，因机械操作，红细胞易遭到破坏，易发生溶血。因此，洗涤红细胞制备过程中，所选标本尽可能不采取离心的方法进行血浆分离，可采取自然沉降的方法。有试验研究表明，温度对红细胞渗透脆性有较大影响，在低温环境下，红细胞脆性较高，溶血率也较高［5-7］。而所选标本在低温环境下保存时间越短，可减少红细胞的损失。总的来说，MAP混悬洗涤红细胞的制备，可有效弥补生理盐水混悬洗涤红细胞制备存在的不足，既能满足临床需求，同时也可减少工作量，减少人力、资源的浪费，具有良好的临床效果。由于本研究所选标本均来源于400mL全血，缺乏200mL全血相关数据的分析，还需作进一步研究和完善。

综上所述，随着近年输血医疗技术的不断提高，为更好地满足临床用血需求，减少输血不良反应以及减少资源费用，开展MAP混悬洗涤红细胞的制备工艺具有重要的临床意义，按《全血及成分血质量要求(2012版)》中规定，在封闭无菌环境中制备且以MAP混悬洗涤红细胞，其保存期与洗涤前的红细胞悬液相同。由于MAP混悬洗涤红细胞的保存期较长，因此血站可常规制备或按批量制备，既满足了国家质量标准，同时也提高了工作效率，为临床需紧急输血的患者赢得了宝贵的时间，值得临床应用。

［1］叶汉泉，刘志泉，梁丽雯，等.红细胞保存液混悬洗涤红细胞质量控制动态观察［J］.长江大学学报(自科版)医学下旬刊，2013，10(8):85-86.

［2］高春芳，刘亚欣，金 花，等.红细胞保存液(MAP)混悬洗涤红细胞的制备及其质量控制［J］.中国民康医学，2015，27(4):3-4，7.

［3］张玉春，周克礼，关晓梅，等.MAP红细胞保存液对洗涤红细胞血浆蛋白清除率的影响［J］.临床输血与检验，2012，14(1):82.

［4］冀 慧.红细胞保存液梯度添加法在不足量血制备去白悬浮红细胞中的应用［J］.临床输血与检验，2014，16(3):253-256.

［5］钟 锐，刘 华，王 红，等.添加不同比例的MAP保存液对拉萨地区悬浮红细胞保存质量的影响［J］.中国输血杂志，2015，28(7):780-783.

［6］何锐洪，袁文声，易 峰.以MAP为洗液的洗涤红细胞可行性研究［J］.现代医院，2011，11(1):23-24.

［7］沈爱文.自动血液洗涤仪制备冰冻保存红细胞的方法评价［J］.现代医院，2010，10(6):90-91.

R457.1+2

:Adoi:10.3969/j.issn.1671-332X.2016.08.032

庄运芳:河源市中心血站 广东河源 517001