固相萃取-高效液相色谱法测定食品中的诱惑红

□ 李小杏 广西玉林产品质量检验所



固相萃取-高效液相色谱法测定食品中的诱惑红

□ 李小杏 广西玉林产品质量检验所

本实验建立了固相萃取-高效液相色谱法测定食品中的诱惑红的方法，优化和改进了诱惑红测定样品前处理方法。结果表明，固相萃取法的前处理方法能更有效地将分析物与干扰组分进行分离，减少样品预处理过程，操作简单、省时、省力，同时，取得了良好的线性，回收率和精密度，适用于食品中诱惑红的测定。

人工合成色素与人们的生活息息相关，广泛应用于食品的生产、加工。人工合成色素一般色泽鲜艳、着色能力强、稳定性好，而且成本低廉，可以改善糖类、饮料等食品的色泽。但是一般合成色素有毒性，已成为影响食品安全的一个重要因素。诱惑红是偶氮类化合物，过多使用不仅影响儿童的生理和心理健康，使他们情绪失控，出现大哭大叫、失眠等状态，还会对某些过敏体质的成年人产生影响，使他们出现易怒等情绪不稳定的状况。因此，准确测定食品中的诱惑红对于食品安全有着重要意义。

目前，测定诱惑红的方法有纸层色谱光度法、示波极谱法、高效液相色谱法等，液相色谱法应用较为广泛。采用液相色谱处理法要对样品进行前处理，目前样品前处理方法有液液分配法、聚酰胺吸附法、固相萃取法等。本文将以聚酰胺吸附法和固相萃取法进行比较优化，以期找到高效测定诱惑红的检测方法。

实验部分

仪器设备

高效液相色谱仪：赛默飞U3000高效液相色谱（配紫外检测器）。

色谱柱：waters-C18（250 mmx4.6 mm，5 μm）。

试剂

诱惑红标准物质；

甲醇为色谱纯，经0.45μm滤膜过滤；

乙酸铵：取1.54 g乙酸铵，加水溶解并稀释至1 000 mL，经0.45 μm滤膜过滤。

固相萃取柱小柱（美国Phenomenex）。

色谱条件

柱温30℃；

检测波长254 nm；

梯度洗脱条件：甲醇15%～35%，5%/ min，35%～98%，9%/min，15%保持4.5 min。

实验方法

聚酰胺吸附法

称取液体饮料5 g，加水至50 mL，用柠檬酸溶液（200 g/L）调至PH=4后，加入（100～200目）聚酰胺粉，搅拌片刻，置于60℃水浴中加热，使色素完全吸附。用G3漏斗过滤，用PH=4的60℃热水洗涤3～5次，再用甲醇-甲酸混合液（60∶40）洗涤3～5次，蒸馏水洗至中性，最后用乙醇-氨水-水（70∶20∶10）洗脱。洗脱液蒸发浓缩后定容至5 mL，过0.45 μm滤膜后上机测定。

固相萃取法

称取液体饮料5 g，加水至20 mL，超声提取20 min，最后定容到25 mL，过滤提取液。

固相萃取小柱依次用5 mL甲醇活化，5 mL水平衡。将5 mL提取液至小柱上，流速低于1 mL/min。依次用5 mL水、5 mL甲醇冲洗小柱，冲洗后完全抽干小柱，弃去流出液。用2 mL 5%氨水甲醇溶液分两次洗脱小柱，全过程流速保持1 mL/min，收集洗脱液，用氮气吹干，加入0.02 mol/L乙酸铵定容至2 mL，过0.45 μm滤膜后上机测定。

结果与讨论

提取方法的选择

聚酰胺吸附法操作比较烦琐，费时，而且该方法对于糖量高、粘度大、含脂肪蛋白高的食品以及液态乳制品等的抽滤较为困难，检测也不够理想。

固相萃取法是一种应用比较广泛的前处理方法，能更有效地将分析物与干扰组分分离，减少样品预处理过程，操作简单、省时、省力。

对比两种方法处理结果得出，固相萃取法去除了大部分干扰色素测定的杂质峰，使检测更可靠。与聚酰胺吸附法比较，大大简化了操作，缩短了时间。

方法线性

在选定的色谱条件下，按配制好的标准系列进行实验，诱惑红标准物质（5～50μg/mL）线性范围内，以峰面积y为纵坐标，浓度（mg/mL）为横坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程，线性关系良好，相关系数＞0.999 0。

加标回收与精密度

取已知诱惑红空白的样品进行加标回收实验。称取样品5 g（精确到0.000 1 g），在样品中添加诱惑红标准溶液即样品加标量为10 μg/mL。按上述前处理方法，进行三水平测定。

分析物加标回收率在97.8%，具有较高的回收率，相对偏差为1.04，精密度较好。

结语

本文对诱惑红测定样品前处理方法进行优化和改进，采用固相萃取处理样品，能更有效地将分析物与干扰组分分离，减少样品预处理过程，操作简单、省时、省力，同时，取得了良好的线性、回收率和精密度。由此可见，在测定食品中诱惑红的含量时，固相萃取法满足食品中诱惑红的测定，并优于聚酰胺吸附法，具有较大的实际应用价值。