月饼中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的HPLC法测定

□ 戴桂梅 黄智明 广西玉林市产品质量检验所



月饼中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的HPLC法测定

□ 戴桂梅 黄智明 广西玉林市产品质量检验所

采用直接进样方法同时快速测定月饼中苯甲酸、山梨酸、糖精钠，并对色谱条件进行选择，选用了230nm为检测波长，甲醇+乙酸铵（0.02mol/L）（体积比：5：95）做为实验的流动相，流速为1.0mL/min。实验结果显示：三种分析物的浓度与峰面积之间呈现良好线性，相关系数＞0.9990， 加标回收率在90%-101%之间，相对偏差分别为1.04，1.59，1.80。实际样品测定中，相对标准偏差RSD范围为0.63%-0.89%。该方法具有线性关系良好、回收率高、精密度好，快速等优点，可用于日常测定月饼中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠。

目前，食品安全问题频现，添加剂问题管理愈加严格。苯甲酸、山梨酸、糖精钠是常用的食品添加剂，对人体的健康有不同程度的危害。苯甲酸的代谢产物结构稳定，在人体中难以分解，过量摄入会对人体产生一定的危害。山梨酸超标严重，消费者长期服用，在一定程度上会抑制骨骼生长，危害肾、肝脏的健康。糖精钠的甜度是蔗糖的300-500倍，是一种较多用于果脯、蜜饯行业的甜味剂，但其在人体内不分解，当使用较多的糖精钠时，会影响肠胃消化酶的正常分泌，降低小肠的吸收能力，使食欲减退。食品添加剂使用卫生标准规定对食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的使用范围和用量有严格的限定。但仍然有些厂商违法添加，因此，准确快速检测食品中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠具有非常重要的意义，尤其是中秋月饼质量狠抓期。

实验部分

仪器和试剂

高效液相色谱仪：Agilent 1200高效液相色谱

甲醇：色谱纯，经0.45μm滤膜过滤

乙酸铵：取1.54g乙酸铵，加水溶解并稀释至1000mL，经0.45μm滤膜过滤

苯甲酸、山梨酸、糖精钠（1.00mg/ mL）标准品：中国计量科学研究院

样品前处理

准确称取已经粉碎的样品10.0g（准确到0.0001g）准备好的样品于25mL带刻度具塞比色管中，加入10mL的纯净水，摇匀，超声提取10min，分别加入亚铁氰化钾和硫酸锌溶液各4mL，定容，混合均匀。过滤，经0.45um滤膜过滤后，进样分析。

色谱分析条件

色谱柱：Thermo C18

柱温：30℃

流动相：甲醇+乙酸铵（0.02mol/L）（体积比：3：97）

流速；1.0mL/min

波长：230nm

标准曲线的绘制

苯甲酸、山梨酸、糖精钠标准溶液混合液的配制。准确吸取苯甲酸、山梨酸、糖精钠标准储备液，配制系列浓度分别为0.010、0.020、0.040、0.080、0.160、0.032mg/mL的混合标准溶液，按选定的色谱条件，各吸取10uL进样分析。根据各组分的响应峰面积与相应的浓度金相线性回归，绘制标准曲线。

样品测定

取经0.45滤膜过滤后试液10uL进样分析，以外标法为依据进行定量分析。

结果与讨论

色谱条件的选择

由于苯甲酸在230nm波长处有较大吸收，大于254nm波长时苯甲酸的吸收过低而山梨酸的吸收过高，但在230nm时三者均有较理想的吸收，故选用了230nm为检测波长。

根据苯甲酸、山梨酸、糖精钠的性质，并参考文献，选定甲醇+乙酸铵（0.02mol/L）（体积比：5：95）做为实验的流动相时，山梨酸和糖精钠的分离度不好，为较好分开山梨酸和糖精钠，调整流动相比例，选定为峰形较好，基线较平，分离度较好时的甲醇+乙酸铵（0.02mol/L）（3+97）为本实验研究的流动相比例。

为避免流速过快过慢造成的分析时间长和分离度小的问题，选定1.0mL/ min做为流速。

线性关系与检出限

在选定的色谱条件下，按配制好的标准系列进行实验，苯甲酸、山梨酸、糖精钠标准曲线在（0.010-0.032mg/ mL）线性范围内，以峰面积y为纵坐标，浓度（mg/mL）为横坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程分别为∶y=35386x-2.09617， y=60136x-2.3259，y=22483x+0.5263，相关系数分别为：1，0.9998，0.9990。

可见，三种分析物的浓度与峰面积之间呈现良好线性，相关系数＞0.9990。

加标样品回收率与精密度

取已知苯甲酸、山梨酸、糖精钠空白的样品进行加标回收实验。称取样品10g（精确到0.0001g），在样品中添加苯甲酸、山梨酸、糖精钠标准溶液即样品加标量为0.02mg/mL。按上述前处理方法，进行三水平测定。

三种分析物加标回收率在90%-101%之间，具有较高的回收率，相对偏差分别为1.04，1.59，1.80，精密度较好。

实际样品测定

采用本方法，分别对五仁叉烧月饼、莲蓉月饼、哈密瓜月饼实际样品进行测定，采用三水平平行测定两个样品。测定结果相对标准偏差RSD范围为0.63%-0.89%（n=3），可见，该方法测定实际样品的精密度较高。

小结

本方法具有线性关系良好、回收率高、精密度好等优点，能快速测定月饼中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠，适用于月饼季节的高效检测工作。