香芹中总黄酮提取工艺

2016-03-27孙威振南阳理工学院生化学院

食品安全导刊 2016年24期

□孙威振南阳理工学院生化学院

香芹中总黄酮提取工艺

□孙威振南阳理工学院生化学院

黄酮类化合物作为一种作用十分明显的自由基清除剂，能够抑制细菌生长，保持维生素C在人体内含量的稳定性，在医药、保健、食品方面中有着广泛的应用。本研究通过设计香芹黄酮类化合物提取实验，研究香芹叶中黄酮类化合物的提取方法，并测定其含量，探讨香芹的利用价值。

香芹是伞型的草本植物，在全国各地广泛种植，是居民日常生活常用的食材，也是世界上用的最广的一种草药。香芹中所含的黄酮类化合物具有降血压、防止动脉硬化、抗衰老等作用。

实验原料的准备

本实验所用的香芹由辅导老师臧晋陪同采购自于南阳市农贸市场，用自来水清洗，取叶片，经60 ℃烘干后，粉碎过40目，贮存于棕色玻璃干燥器中，备用。

香芹叶中总黄酮提取的工艺流程

原料的预处理

从棕色瓶取出经过粉碎后的香芹叶，用一定量的石油醚进行脱脂，倒出滤液，晾干，保存于干燥瓶中，备用。

总黄酮的测定

1 绘制标准曲线

用万分之一电子天平精确称量0.015 0 g芦丁标准品，倒入50 mL烧杯中，加入一定量的60%乙醇，将烧杯置于超声波仪中使其快速溶解，使用冷水对目标溶液进行冷却，将目标溶液转移到50 mL容量瓶中进行定容，充分混匀，该标准贮备溶液浓度0.3 mg/mL。

用同一支吸量管吸取0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL标准溶液分别移入7只25 mL容量瓶中,每瓶中加入一管胶头滴管的30%乙醇，摇匀后用移液管分别准确加入5% NaNO20.75 mL，充分震荡，静置6 min后用移液管分别滴加0.75 mL 10%硝酸铝溶液，充分震荡，静置6 min后，再分别加入10mL 4%氢氧化钠溶液，充分震荡，最后用乙醇定容7只容量瓶，充分震荡后静置12 min，在波长为510 nm处进行不同浓度溶液的吸光度测量并记录。建立平面直角坐标系，吸光度为横坐标，浓度为纵坐标横坐标，将测定的数据进行绘制标准曲线。得到标准方程为y=12.375x-0.001 9,根据标准方程绘制当R2=0.999 7的标准曲线。

总黄酮的提取

用万分之一电子天平准确称取香芹叶粉末1.000 0 g倒入50 mL圆底烧瓶中，加入一定浓度的乙醇，放到设置好指定温度的水浴锅中，回流，一段时间后，取出，等溶液冷到室内温度，把回流液抽滤，再把抽滤后的溶液过滤，用玻璃棒引流到100 mL容量瓶中，并加入同样浓度的乙醇定容。

单因素实验

1 乙醇浓度对香芹叶总黄酮得率的影响

用万分之一电子天平准确称取香芹叶粉末1.000 0 g置入5O mL圆底烧杯中，然后用不同浓度的乙醇溶液，以10%为基础进行递增,分别配置40%～80% 5种不同浓度的乙醇，然后将这5种不同浓度的乙醇每次用一种浓度加入到70 ℃的水浴锅中，在回流装置下提取时间为1 h结束后取出，冷却到室内温度后，抽滤再过滤,将过滤操作后得到的溶液置入100 mL容量瓶中，再使用同浓度的乙醇溶液对其进行定容。将该容量瓶内的溶液取1 mL置入25 mL容量瓶中，根据试验的相关要求对这1 mL溶液也进行试剂添加并进行吸光度数值测定。

2 提取时间对香芹叶总黄酮得率的影响

用万分之一电子天平准确称取香芹叶粉末1.000 0 g置入5O mL圆底烧杯中，向其中加入60 mL浓度为60%的乙醇溶液，并在水温为70 ℃的水浴锅中进行回流操作，在操作过程中需要按照不同的时间进行提取，以0.5 h为基础进行递增，从0.5～2.5 h中选择5个时间点进行回流，回流结束后取出，冷却到室内温度后抽滤再过滤,过滤操作后得到的溶液置入100 mL容量瓶中，再使用同浓度的乙醇溶液对其进行定容。将该容量瓶内的溶液取1 mL置入25 mL容量瓶中，根据试验的相关要求对这1 mL溶液也进行试剂添加并进行吸光度数值测定。

3 提取温度对香芹叶总黄酮得率的影响

用万分之一电子天平准确称取香芹叶粉末1.000 0 g倒入50 mL圆底烧杯中，加入60 mL 60%乙醇，具体来讲以10 ℃为基础进行递增，分别在50～90 ℃ 5个不同环境下的水浴锅中进行回流，在对其进行1 h的处理之后完成回流操作，并且将其取出，冷却到室内温度后抽滤再过滤，过滤操作后得到的溶液置入100 mL容量瓶中，再使用同浓度的乙醇溶液进行定容。将该容量瓶内的溶液取1 mL置入25 mL容量瓶中，根据试验的相关要求对这1 mL溶液也进行试剂添加并进行吸光度数值测定。

正交实验

通过单因素实验确定较为合理的因素范围，比较各单因素条件影响，从提取温度、提取时间、乙醇浓度3个单因素条件中，分别选取3组较优数据条件。设计L9（33）正交实验，探究芹菜叶中乙醇回流提取工艺，获得最优工艺条件，并验证最佳工艺提取条件。