异位内膜氧化应激及雌激素受体水平与盆腔痛关系的研究

郭蕊萌，尹利荣



异位内膜氧化应激及雌激素受体水平与盆腔痛关系的研究

郭蕊萌，尹利荣△

摘要:目的探讨异位内膜氧化应激（OS）及雌激素受体（ER）水平与盆腔痛的关系。方法取轻、中、重度盆腔痛子宫内膜异位症（EMs）患者异位内膜作为轻度组（29例）、中度组（34例）及重度组（26例），取正常子宫内膜作为对照组（30例）。采用黄嘌呤氧化酶法检测和对比各组内膜中超氧化物歧化酶（SOD）水平；采用硫代巴比妥酸比色法检测和对比各组内膜中丙二醛（MDA）水平；采用免疫组化法检测和对比各组内膜中ER水平；分析3组异位内膜中MDA、SOD与ER水平相关性。结果3组异位内膜中SOD水平均低于对照组，MDA及ER水平均高于对照组（均P<0.05）；3组异位内膜中，随疼痛程度增加，SOD水平逐渐降低，MDA及ER水平逐渐升高（均P<0.05）；轻度组内膜中MDA水平与ER水平无相关性，中度及重度组内膜中MDA水平与ER水平呈正相关（P<0.05），3组异位内膜中SOD水平与ER水平均无相关性。结论异位内膜存在OS及ER过表达，二者参与EMs盆腔痛的发生并发挥协同作用。

关键词：子宫内膜异位症；氧化性应激；受体,雌激素；超氧化物歧化酶；丙二醛；盆腔痛

盆腔痛是子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）主要临床症状之一，其包括痛经、性交痛、排尿痛、排便痛、慢性盆腔痛，一直困扰着罹患妇女。EMs是一种雌激素依赖性疾病[1]，异位内膜中存在雌激素受体（ER）过表达[2]，可促进疾病的发展。雌激素亦被证实与痛觉有关[3]。氧化应激（oxidative stress,OS）是指体内氧化与抗氧化作用失衡，组织中活性氧大量产生并蓄积，激发链式脂质过氧化反应，导致脂质过氧化物增多，参与机体病理的过程。诸多报道已证明OS可参与疼痛发生[4]。丙二醛（malondialdehyde,mDA）是脂质过氧化物的最终代谢产物，超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）是体内抗氧化系统中存在的多种酶之一，二者是反映机体OS水平的标志物。本研究通过检测并对比不同程度盆腔痛患者异位内膜及正常内膜中OS及ER水平，探讨异位内膜中OS及ER水平与盆腔痛的关系，并通过分析异位内膜中MDA、SOD与ER相关性，探讨OS及ER水平在致EMs盆腔痛过程中的联系。

1　资料与方法

1.1一般资料选择2013年12月—2015年6月在我院行手术治疗轻度盆腔痛EMs患者29例，平均年龄（37.01± 4.78）岁，中度盆腔痛EMs患者34例，平均年龄（36.73±5.18）岁，重度盆腔痛EMs患者26例，平均年龄（35.11±3.98）岁，术中分别留取异位内膜作为轻、中、重度组。选择同期在我科行诊刮术患者30例，平均年龄（39.06±3.62）岁，留取内膜组织作为对照组（病理证实均为正常子宫内膜）。所有EMs患者均以痛经代表盆腔痛，并按照主诉疼痛程度（VRS）标准进行疼痛分级。所选患者术前3个月无激素治疗史，无内外科合并症。各组患者年龄比较差异无统计学意义(F=0.813，P > 0.05)。

1.2方法

1.2.1样本制备所有标本均一式2份。一份加入2.5mL PBS溶液，匀浆后放入4℃保存备用；一份制成石蜡切片，待行免疫组化染色。

1.2.2检测方法SOD活性测定采用黄嘌呤氧化酶法，MDA含量测定采用硫代巴比妥酸比色法。两种指标测定所用试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。ER检测行免疫组化染色，ER抗体及DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。ER为细胞核显示棕黄色颗粒。显色即记为阳性细胞，计算阳性细胞率（阳性细胞数/观察细胞数×100%）。标本均在低倍镜下（10×10）选取3个高密度区，再在高倍镜下（20×10）计数，最后取3个区域计数平均值。操作由3位病理科医师分别完成，最终结果取三者平均值。

1.3统计学方法采用SPSS 19.0进行分析，计量数据均以±s表示，多组间比较采用方差分析，多重比较采用q检验；相关性分析采用Pearson相关。P < 0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1各组内膜中SOD及MDA水平比较3组异位内膜SOD水平均低于对照组，MDA水平均高于对照组，差异均有统计学意义（P < 0.05）；3组异位内膜中，随疼痛程度增加，SOD水平逐渐降低，MDA水平逐渐升高，差异均有统计学意义（P < 0.05），见表1。

2.2各组内膜中ER水平比较3组异位内膜ER阳性细胞率均高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）；3组异位内膜中，随疼痛程度增加，ER阳性细胞率逐渐升高，差异有统计学意义（P < 0.05），见表1，图1～4。

Tab.1　Comparison of SOD,mDA and ER levels between four groups of endometrium表1　各组内膜SOD、MDA及ER水平比较　（±s）

Tab.1　Comparison of SOD,mDA and ER levels between four groups of endometrium表1　各组内膜SOD、MDA及ER水平比较　（±s）

＊P＜0.05,＊＊P＜0.01;a与对照组比较，b与轻度组比较，c与中度组比较，P＜0.05

对照组轻度组中度组重度组F 30 29 34 26 6.68±0.60 4.73±0.46a2.91±0.22ab1.23±0.41abc207.760＊＊41.98±8.87 194.76±22.18a385.07±31.07ab598.12±35.44abc693.857＊＊17.13±2.37 28.44±2.32a42.11±3.19ab57.58±4.84abc112.873＊

2.33组异位内膜中MDA、SOD水平与ER水平的相关性轻度组内膜中MDA水平与ER水平无相关性（r =0.202，P > 0.05）；中度组及重度组异位内膜中MDA水平与ER水平均存在明显正相关（r分别为0.870、0.681，均P < 0.05）。轻、中、重度组异位内膜中SOD水平与ER水平均不存在相关性（r分别为0.276、0.291、-0.198，均P > 0.05）。

3　讨论

大量研究表明，EMs盆腔痛与盆腔无菌性炎症、异位病灶内及周围神经异常生长、中枢及外周神经敏化有关[5]。OS与疼痛密切相关，抗氧化剂的应用可以减轻机体疼痛程度[6]。本研究发现，异位内膜存在OS，其与抗氧化系统中SOD的减少有关；且随盆腔痛程度增强，病灶内OS水平逐渐加剧。OS能够诱导巨噬细胞、细胞因子等多种致痛活性因子，并能够诱导多种炎症反应中介物[7]，致异位病灶内及周边环境产生无菌性炎症，触发神经异常生长，激活前列腺素信号共同途径[8-10]。OS导致异位病灶内所产生的毒性过氧化产物能够影响信号传导通路及疼痛相关离子通道，增强突触间神经递质的效能，调节疼痛相关蛋白激酶的活性，影响胶质细胞活性[11]。OS能够诱导异位病灶细胞变性或死亡而参与神经退行性病变。这些作用均可导致外周或中枢神经敏化，从而导致EMs盆腔疼痛的产生。

雌激素能够促进EMs的发生发展，其在疼痛产生中亦发挥着重要作用。本研究表明，EMs异位内膜ER表达水平随盆腔痛程度增加逐渐升高。雌激素与ER结合后参与神经纤维生长发育、神经元存活、神经递质合成以及髓鞘和轴突的再生过程[3]。雌激素与ER结合后从多个水平改变伤害性刺激信号传导通路，并作用于传导通路中多种神经递质，促进前列腺素F2α（PGF2α）的合成或抑制其分解[12]。这些均可导致外周及中枢神经敏化。此外，雌激素与ER结合后可通过刺激组织产生炎性因子，导致无菌性炎症，继而诱发疼痛[13]。

雌激素能够加剧组织内氧化应激状态[14]。本研究发现，在轻度盆腔痛的EMs患者异位内膜中，ER水平及OS各司其职，没有相关性。而当疾病发展到一定程度，异位内膜中ER上升到一定水平，异位内膜中OS状态随ER水平升高明显加剧，二者在EMs盆腔痛的产生中发生协同作用。而这个作用并不是雌激素通过降低异位内膜SOD水平来达到的，其可能与异位内膜活性氧产生增加或其他抗氧化酶活性受到影响有关，具体机制有待深入研究。此外，雌激素具有抗细胞凋亡的作用，而氧化应激具有促进细胞损伤、凋亡的作用[15]，ER过表达与OS同时存在于增殖能力极强的异位内膜中，并具有一定的相关性，说明雌激素在加剧组织OS状态的同时，其抗凋亡能力起主导作用，能够抑制OS造成的组织损伤、凋亡，仅保留氧化应激致痛、致炎作用，进而加重疾病发展。

综上所述，EMs患者异位内膜存在ER过表达及OS状态，二者均与EMs盆腔痛相关。随着EMs发展，当异位内膜ER水平升高到一定程度时，其能够加剧异位内膜OS状态，二者在致EMs盆腔痛中发挥协同作用，但具体机制有待进一步研究。

（图1～4见插页）

参考文献

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（2015-08-13收稿2015-09-22修回）

（本文编辑李国琪）

应用研究

The relationship between oxidative stress and estrogen receptor levels in ectopic endometrium and pelvic pain

GUO Ruimeng, YIN Lirong△
Department of Gynecology, The Secondhospital, Tianjinmedical University, Tianjin 300211, China
△Corresponding Author E-mail:yinlirongfk@sina.com

Abstract:Objective To discuss the role of oxidative stress (OS) and estrogen receptor (ER) levels in ectopic endome⁃trium in patients with pelvic pain.Methods The ectopic endometrium was taken from patients withmild,moderate and se⁃vere pelvic pain, and samples were divided intomild group (n=29),moderate group (n=34) and severe group (n=26).The nor⁃mal samples of endometrium (n=30) were used as control group.Xanthine oxidasemethod was used to detect the level of su⁃peroxide dismutase (SOD), thiobarbituric acid colorimetricmethod was used to detect the level ofmalondialdehyde (MDA) and immunohistochemistry was used to detect the level of estrogen receptor (ER).The correlation ofmDA, SOD and ER lev⁃els was analysed between three ectopic endometrium groups.Results The SOD levels were significantly lower andmDA and ER levels were significantlyhigher in three ectopic endometrium groups than those in control group (P <0.05).The SOD levels were decreased, whilemDA and ER levels were gradually increased with increased pain intensity in three groups of ec⁃topic endometrium (P < 0.05).There was no correlation betweenmDA level and ER level inmild group (P > 0.05).A posi⁃tive correlation was found betweenmDA and ER levels inmoderate and severe groups (P < 0.05).There was no relationship between SOD and ER levels in three ectopic endometrium groups (P > 0.05).Conclusion Over-expression of OS and ER presents in ectopic endometrium, and both participate in the occurrence of pelvic pain, and create synergies in pelvic pain of ectopic endometrium.

Key words:endometriosis; oxidative stress; receptors, estrogen; superoxide dismutase;malondialdehyde; pelvic pain

通讯作者△E-mail:yinlirongfk@sina.com

作者简介：郭蕊萌（1986），女，住院医师，硕士，主要从事子宫内膜异位症研究

中图分类号：R711.71

文献标志码：A

DOI:10.11958/20150114

作者单位：天津医科大学第二医院妇科（邮编300211）