蒽酮-硫酸法测定地笋多糖含量的研究

王玉玺，胡 欣

（贵州工程应用技术学院化学工程学院，贵州毕节 551700）

蒽酮-硫酸法测定地笋多糖含量的研究

王玉玺，胡 欣

（贵州工程应用技术学院化学工程学院，贵州毕节 551700）

采用蒽酮-硫酸法测定地笋多糖含量并对其测定条件进行研究。实验结果表明：使用蒽酮-硫酸试剂在430～800 nm扫描地笋多糖的最大吸收波长为625nm，蒽酮试剂的最佳浓度为4g/L，最佳加热时间为8min，最佳显色时间4min，精密度实验RSD值为2.31%。平均回收率为92.99%，RSD 为3.60%。

地笋多糖；蒽酮-硫酸法；测定

1 研究材料及方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 材料

地笋（产地贵州威宁）、蒽酮、浓硫酸、葡萄糖、三氯甲烷、正丁醇；蒽酮-浓硫酸（2g/L）：称取0.2g蒽酮，溶于100mL浓硫酸中（现配现用）；葡萄糖标准样液（100mg/L）：称取1g葡萄糖标准品于烧杯内，搅拌溶解，完全溶解后，移入100mL容量瓶内，定容；葡萄糖工作样液（100µg/L）：精确吸取1mL葡萄糖标准样液于100mL容量瓶内，用超纯水定容至刻度线。

1.1.2 仪器

分光度计、恒温水浴锅、控温，微波消解/萃取仪、紫外分光光度计、真空抽滤器、磁力搅拌器、移液管、可调试移液器（10mL 5mL）、量筒、烧杯、250mL容量瓶、100mL容量瓶、离心管。

1.2 实验方法

1.2.1 地笋多糖样液的制备

称取已经研磨好的、干燥的地笋粉末0.5g，置于消解仪中，加入20mL超纯水，放入已经调好的微波消解仪中（80℃，8min）提取，待时间到达后，趁热移入真空抽滤瓶中进行抽滤。将滤液移入100mL烧杯中，加入15mLSevage试剂（注意尽量每次冲洗的量最好保持一致），放在磁力搅拌机上搅拌15min。15min后将溶液移入分液漏斗中进行分液，取上清液移入250mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度线（样液1）。再从样液1中取5mL样液定容至100mL（样液2），待测。

1.2.2 确定蒽酮-浓硫酸的最大吸收波长

分别吸取1mL葡萄糖工作样液和地笋多糖样液2于25mL离心管中，在冰水浴中加入4mL 2g/L蒽酮-浓硫酸溶液，放入80℃的恒温水浴锅中恒温10min后，取出含有待测样液的离心管，将其放入冰水中，待冷却至室温后，将样液倒入比色皿中，在紫外分光光度计中进行扫描（根据文献设置紫外分光光度计的扫描范围为430～800nm），以确定其最大吸收波长。

1.2.3 确定蒽酮-浓硫酸的最佳用量

分别称取0.01g、0.02g、0.025g、0.03g、0.04g、0.05g、0.06g蒽酮溶于10mL浓硫酸溶液中，准确吸取7份1mL地笋多糖样液于编好号的25mL离心管内，再分别加入不同浓度的4mL蒽酮-浓硫酸溶液，放入80℃的恒温水浴锅中恒温10min后，取出含有待测样液的离心管，将其放入冰水中，待冷却至室温后，将样液倒入比色皿中，再在可见分光光度计中测定其吸光度。

1.2.4 确定蒽酮-浓硫酸的最佳加热时间

配制由1.2.3方法得出的蒽酮-浓硫酸最佳的用量，准确吸取6份1mL地笋多糖样液于编好号的25mL离心管内，再加入4mL配制好的蒽酮-浓硫酸，放入80℃的恒温水浴锅中，分别水浴恒温2min、4min、6min、8min、10min、15min、20min，取出离心管并放入冰水中，待冷却至室温后，再在可见分光光度计中测定其吸光度。

1.2.5 确定蒽酮-浓硫酸的最佳显色时间

准确吸取1mL地笋多糖样液于25mL离心管中，再加入4mL蒽酮-浓硫酸，放入80℃的恒温水浴锅中水浴恒温一定时间，取出离心管后，立即将管中的待测样液倒入比色皿内，隔2min就测一次，直到数据稳定为止。

1.2.6 精密度实验

准确吸取6份1mL地笋多糖溶液于编好号的25mL离心管内，再加入4mL蒽酮-浓硫酸溶液，放入80℃的恒温水浴锅中恒温一定后，取出含有待测样液的离心管，将其放入冰水中，再在可见分光光度计中测定其吸光度，计算出标准偏差，以确定本实验方法的精密度。

1.2.7 样品的测定

用1.2.1的方法且用测出的最佳条件分别提取试样1和试样2中的多糖溶液，提取后的样液分别为样液1和样液2，用地笋多糖样液为原液，用蒽酮-浓硫酸法测定它们的吸光度。

2 结果与讨论

2.1 蒽酮-浓硫酸最大吸收波长的确定

通过研究可知，地笋多糖溶液的最大吸收波长在614～625nm，且此时的吸光度达到最大值；葡萄糖标准溶液的最大吸光度值的扫描波长在595～624nm，由于扫描时扫描过快，导致波长在630nm时的数值下降太快，依据相关文献和各方面的综合考虑，选用625nm作为本实验的测定波长比较合适。

2.2 确定蒽酮-浓硫酸的最佳用量

不同蒽酮-硫酸溶液的浓度对其吸光度的影响很大，当蒽酮-硫酸溶液的浓度在4g/L时，其吸光度值最大，这是因为浓硫酸与多糖水解反应时需要一定的浓度：浓度大，强酸会破坏多糖的分子结构，吸光度减小：浓度小，反应不完全，吸光度偏小。因此蒽酮-浓硫酸的最佳使用浓度为4g/L。

2.3 确定蒽酮-浓硫酸的最佳加热时间

当地笋多糖样液加热8min后吸光度达到最大值，到10min 后吸光度值明显下降且缓慢上升至平缓；这是由于浓硫酸与多糖水解反应时需要一定的时间，加热时间过短，反应不完全，显色强度不强，吸光度则偏小。

2.4 确定蒽酮-浓硫酸的最佳显色时间

地笋多糖样液反应放置4min后，其吸光度基本稳定，在4-20min内其吸光度总是在0.415、0.416、0.417这三个数值上有所波动，但是吸光度在20min以后就一直保持在0.415这个数值上。这可能是因为可见分光光度计本身就存在误差，且误差在0.002以内，故选用4min为蒽酮-浓硫酸的最佳显色时间，且实验中反应后冷却放置4min以后就可以进行测定。

3 结束语

采用蒽酮-硫酸法测定地笋多糖时，在比较好的测定条件下测定地笋多糖，即：加入4g/L 蒽酮-硫酸溶液，置于80℃的恒温水浴锅中恒温8min，放入冰水中冷却4min，于波长625nm 范围内测定吸光值，可提高样品中地笋多糖测定的准确度。蒽酮-硫酸法测定地笋多糖具有稳定、精准、重复性好的优点，是一种快速、简便测定地笋多糖的方法。

Anthrone-Sulfuric Acid Method To Study Bamboo Polysaccharide Content

Wang Yu-xi，Hu Xin

Anthrone-Sulfuric Acid Method To Shoot Polysaccharide Content And Study Its Measurement Conditions.The Results Show That：The Use Of Anthrone-Sulfuric Acid Reagent In The 430-800 Nm Scan To Shoot Polysaccharide Maximum Absorption Wavelength Of 625nm，The Optimum Concentration Anthrone Reagent Is 4g/L，The Optimum Heating Time Of 8min，The Best Coloration Time 4min，Precision Experiments RSD Is 2.31%.The Average Recovery Rate Was 92.99%，RSD 3.60%.

ground shoots polysaccharide；anthrone-sulfuric acid method；Determination

R284

B

1003–6490（2016）04–0154–02

2016–04–06

王玉玺（1993—），男，贵州贵阳人，本科，主要研究方向为应用化学。