绵马贯众石油醚提取物化学成分研究

袁丽鹏，邓国彤，贾小舟，刘海燕，杨雄辉，沈志滨

(1.广东药学院 中药学院，广东 广州 510006； 2.国药集团德众(佛山)药业有限公司，广东 佛山 528000)



绵马贯众石油醚提取物化学成分研究

袁丽鹏1，邓国彤1，贾小舟1，刘海燕1，杨雄辉2，沈志滨1

(1.广东药学院 中药学院，广东 广州 510006； 2.国药集团德众(佛山)药业有限公司，广东 佛山 528000)

摘要:目的 研究绵马贯众Dryopteris crassirhizoma Nakai石油醚部位的化学成分。方法 采用硅胶柱色谱、凝胶Sephadex LH-20柱色谱和半自动制备液相色谱等手段进行分离纯化，通过理化性质及光谱分析方法鉴定化合物的结构。结果 从绵马贯众石油醚提取物中分离得到5个化合物，经鉴定分别为胆甾-4-烯-3-醇(1)、海绵甾醇(2)、木栓内酯(3)、β-谷甾醇(4)、西瑞香素(5)。结论 化合物1、2、3、5为首次从该植物中分离得到。

关键词:绵马贯众； 化学成分； 结构鉴定； 甾体

绵马贯众DryopteriscrassirhizomaNakai为鳞毛蕨科植物粗茎鳞毛蕨的干燥根茎及叶柄残基，别名贯众、东北贯众等，始载于《神农本草经》，味苦、微寒，有小毒，具有治疗风热头痛、温毒发斑、疮疡肿毒的功效，作为常用中药被收录在2010年版《中国药典》[1]，主产于黑龙江、辽宁、吉林和河北北部地区[2]。现代临床中常见绵马贯众单用或复方治疗癌症、流感病毒、真菌原虫感染等疾病。迄今为止，已从绵马贯众中分离或鉴定出间苯三酚类、黄酮类、萜类、甾类、苯丙素类、苷类、脂肪烃类、芳香烃类、糖类等多种类型化合物，其中多聚间苯三酚类衍生物为绵马贯众的主要活性成分，主要分为二环、三环、四环、五环四大类；黄酮类化合物的报道较少；萜类化合物大多数为五环三萜类苷元[3]。本实验室前期已对绵马贯众乙酸乙酯提取部位化学成分进行了分离，本文对绵马贯众的石油醚提取部位进行分离，得到5个化合物，经鉴定分别为胆甾-4-烯-3-醇(1)、海绵甾醇(2)、木栓内酯(3)、β-谷甾醇(4)、西瑞香素(5)，其中化合物1、2、3、5均为首次从该植物中分离得到。

1仪器与试药

Acquity UPLC H-Class超高效液相色谱仪(美国Waters公司)；XBridgeTMBEH C18柱 (100 mm×4.6 mm，2.5 μm)分析色谱柱(美国Waters公司)；LC-6AD型半制备液相色谱仪(日本岛津公司)；ZORBAX StableBond C18柱(250 mm×9.4 mm，5 μm) 制备色谱柱(美国Agilent公司)；Hei-VAP旋转蒸发仪(德国Heidolph公司)；DLSB型低温冷却循环泵(郑州长城科工贸有限公司)；AGX1-2001-P型艾科浦(Aquapro)超纯水系统(重庆颐洋企业发展有限公司)。

AVANCE AV500型核磁共振仪(瑞士Bruker公司)；Zf20D暗箱式紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)；YOKO-XR显色加热器(武汉药科新技术开发公司)；X-5显微熔点测定仪(巩义市科瑞仪器有限公司)。

绵马贯众采自黑龙江北部地区，购于河北金木药业集团有限公司，经广东药学院中药学院刘基柱副教授鉴定为鳞毛蕨粗茎鳞毛蕨(DryopteriscrassirhizomaNakai)的叶柄残基和干燥根茎。

硅胶(青岛海洋化工厂，批号：130560)；Sephadex LH-20凝胶(Pharamacia公司，批号：051219)；乙腈、甲醇(色谱纯，瑞典Oceanpak)；石油醚、丙酮、甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、乙酸等均为分析纯。

2提取与分离

取绵马贯众粗粉30 kg，加入10倍量的石油醚浸泡1 h后，70 ℃回流提取3次，每次3 h，回收石油醚得到浸膏(2.1 kg)。取浸膏(2.1 kg)上硅胶(200～300目)柱色谱以石油醚-丙酮梯度洗脱(体积比100∶0→100∶1→50∶1→25∶1→10∶1)，TLC检测合并相同的流分，得到5个主要部位Fr.1～Fr.5。Fr.3(石油醚-丙酮，体积比50∶1)部分，经过多次硅胶柱色谱分离得到化合物1(20 mg)。Fr.4(石油醚-丙酮，体积比25∶1)部分，经过反复的硅胶柱色谱和Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离，配合甲醇重结晶得到化合物2(18 mg)。Fr.5(石油醚-丙酮，体积比10∶1)部分，经过多次硅胶柱色谱和Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离，TLC检测合并相同组分再借助半自动制备液相色谱(乙腈-蒸馏水，体积比85∶15；流速8 mL/min)制备，分离得到化合物3(12 mg)、4(8 mg)、5(10 mg)。

3结构鉴定

化合物1：白色粉末(三氯甲烷)，mp：148～150 ℃，易溶于三氯甲烷，不溶于甲醇、水和丙酮。三氯甲烷-乙酸乙酯(体积比10∶1)条件下TLC检识，碘蒸气显色，Rf值0.4处有斑点，但254 nm紫外照射下无此斑点，提示此化合物无长共轭结构。样品溶于三氯甲烷，加入浓H2SO4后，H2SO4层显血红色，三氯甲烷呈现绿色荧光，显示Salkowski反应呈阳性。另外样品溶于三氯甲烷，加入醋酐-浓H2SO4(体积比20∶1)，产生红→紫→蓝→绿等一连串的颜色变化，最后褪色，显示Liebermann-Burchard反应呈阳性，推测此化合物为甾体类化合物。样品中加入浓H2SO4,再加入α-萘酚，无紫色环出现，Molish反应呈阴性，表明此化合物可能为苷元型化合物。1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ：1.01(3H，s，19-CH3),0.68(3H，s，18-CH3),0.93(3H，d，J=7.5 Hz，27-H),0.82(3H，d，J=5 Hz，26-H),3.53(1H，m，3-CH),5.36(1H，brs，4-H)。13C-NMR(125 MHz，CDCl3)δ：141.1(C-5),121.9(C-4),72.1(C-3),57.1(C-14),56.5(C-17),50.5(C-9),46.3(C-13),42.7(C-4),40.1(C-12),37.6(C-1),36.8(C-10),32.3(C-8),32.2(C-7),32.0(C-2),28.5(C-16),24.6(C-15),21.4(C-11),36.4(C-20),34.3(C-22),29.6(C-25),23.6(C-23),19.6(C-21),19.4(C-26),19.1(C-27),20.0(C-19),12.3(C-18)。以上数据与文献[4-5]报道基本一致，故鉴定化合物1为胆甾-4烯-3醇(Cholesta-4-en-3-ol)。

化合物2：白色针状晶体(三氯甲烷)，mp：148～150 ℃，易溶于三氯甲烷，不溶于甲醇、水和丙酮。三氯甲烷-丙酮(体积比15∶1)条件下TLC检识，碘蒸气显色，Rf值0.4处有斑点，但254 nm紫外照射下无此斑点。样品Liebermann-Burchard反应呈阳性，Salkowski反应呈阳性，Molish反应呈阴性。1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ：0.68(3H，s，18-CH3),1.01(3H，s，19-CH3),0.92(3H，d，J=6.5 Hz，27-CH3),0.84(3H，d，J=6.5 Hz，26-CH3),3.52(1H，m，3-CH),5.35(1H，brs，6-H)。13C-NMR(125 MHz，CDCl3)δ：140.8(C-5),121.7(C-6),121.6(C-24),116.4(C-28),71.8(C-3),56.8(C-14),56.1(C-17),50.1(C-9),45.8(C-13),42.3(C-4),39.8(C-12),37.3(C-1),36.5(C-10),34.0(C-8),31.7(C-7),31.9(C-2),28.3(C-16),24.3(C-15),21.1(C-11),36.1(C-20),23.1(C-22),29.2(C-25),33.9(C-23),19.4(C-21),19.1(C-26),18.8(C-27),19.8(C-19),12.0(C-18)。以上数据与文献[6-7]报道基本一致，故鉴定化合物2为海绵甾醇(Chalinasterol)，又名5,24(28)-二烯麦角甾-3-醇[ergosta-5,24(28)-dien-3-ol]。

化合物3：无色针晶(三氯甲烷)，mp：286～288 ℃，易溶于三氯甲烷，不溶于甲醇、水和丙酮。1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ：0.80(3H，s，25-CH3),0.82(3H，s，26-CH3),0.84(3H，s，24-CH3),0.84(3H，s，27-CH3),1.21(3H，s，28-CH3),1.38(3H，d，J=6.3 Hz，23-CH3),4.11(1H，q，J=6.6 Hz，4-CH)。13C-NMR(125 MHz，CDCl3)δ：175.4(C-3),87.0(C-4),56.8(C-10),51.8(C-8),51.8(C-18),42.2(C-5),37.5(C-13),36.2(C-9),36.9(C-14),36.6(C-17),37.3(C-6),36.8(C-19),32.4(C-2),32.4(C-11),32.1(C-22),32.0(C-15),31.8(C-12),29.8(C-16),29.8(C-21),29.6(C-20),18.2(C-1),18.0(C-7),36.8(C-29),32.1(C-30),31.9(C-28),22.2(C-26),19.9(C-27),19.3(C-25),14.3(C-23),14.2(C-24)。以上数据与文献[8-10]报道基本一致，故鉴定化合物3为木栓内酯(Friedelan-3,4-lactona)。

化合物4：无色针晶(石油醚-乙酸乙酯)，mp：137～138 ℃，三氯甲烷-甲醇(体积比30∶1)条件下TLC检识，H2SO4乙醇溶液显色，Rf值0.4处有紫红色斑点。样品Liebermann-Burchard反应呈阳性，提示存在甾体母核。与β-谷甾醇对照品对照，多个展开系统下TLC检识，二者色谱行为和显色表现一致，混合熔点不下降，与文献[11]报道基本一致，故确定化合物4为β-谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物5：淡黄色无定形粉末(乙酸乙酯)，mp：250～252 ℃，三氯甲烷-乙酸乙酯(体积比15∶1)条件TLC检识，碘蒸气显色，Rf值0.4处有斑点，在365 nm紫外照射下斑点呈亮蓝色，FeCl3试管中反应呈阳性。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：10.29(1H，s)；8.05(1H，d，J=9.5 Hz，H-4′),6.38(1H，d，J=9.5 Hz，H-3′),7.87(1H，s，H-4),7.71(1H，d，J=8.5 Hz，5′-CH3),7.18(1H，d，J=2.5 Hz，6′-CH2),7.12(1H，dd，J=8.5，2.5 Hz，8′-CH3),7.20(1H，s，5-H),6.86(1H，s，8-H),3.81(3H，s，—OCH3)。13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：160.0(C-2),159.6(C-2′),157.0(C-7),155.0(C-7′),150.3(C-9),147.4(C-9′),145.6(C-6),144.0(C-4′),135.7(C-3),130.9(C-5′),129.9(C-4),114.4(C-10′),113.9(C-6′),113.4(C-3′),110.2(C-10),109.4(C-5),104.0(C-8′),102.7(C-8),56.0(OCH3)。以上数据与文献[12]报道基本一致，故鉴定化合物5为西瑞香素(Daphnoretin)。

参考文献:

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版一部[M].北京:中国医药科技出版社,2010:310.

[2] 高增平,马秉智,陆蕴如.绵马贯众的化学成分研究[J].北京中医药大学学报,2004,27(1):52-53.

[3] 张鹏,宋盼红,付深圳,等.绵马贯众化学成分和药理作用的研究进展[C]//中华中医药学会中药化学分会第九届学术年会论文集：第一册.中华中医药学会,2014:20.

[4] 傅宏征,张晓威,张礼和,等.黄海葵的化学成分研究(Ⅰ)[J].中国海洋药物,1998，17(1):13-16.

[5] 李莉娅,邓志威,李军,等.中国南海海绵Cinachyrellaaustraliensis化学成分研究[J]. 北京大学学报(医学版),2004,36(1):12-17.

[6] VIEGELMANN C,JENNIFER P,THENGTHENG O,et al. Isolation and identification of antitrypanosomal and antimycobacterial active steroids from the spongeHaliclonasimulans[J].Marine Drugs,2014,12(5):2937-2952.

[7] 杜德尧,陈永强,陈先晖,等.木蹄层孔菌石油醚组分的成分分析及抗肿瘤活性研究[J].药物分析杂志,2011,31(2):261-264.

[8] DE CARVALHO JUNIOR A R,GOMES G A,FERREIRA R O,et al. Constituintes químicos e atividade antioxidante de folhas e galhos deEugeniacopacabanensisKiaersk (Myrtaceae)[J].Quim Nova,2014,37(3):477-482.

[9] 孙伟.苦味叶下珠的化学成分研究[J].中草药,2011,43(1):23-26.

[10] 王辉,熊志勇,陈泽宇,等.滇南红厚壳叶中木栓内酯的分离、结构鉴定及诱导干细胞增殖作用[J].云南大学学报(自然科学版),2010,32(6):690-694.

[11] 徐丹丹,周洪波,房志坚.粗叶悬钩子的化学成分研究[J].广东药学院学报,2012,28(2):142-144.

[12] 路利芹,崔海燕,张立春,等.瑞香狼毒地上部分化学成分的研究[J].天然产物研究与开发,2014,26(1):53-55.

(责任编辑：陈翔)

Study on the chemical constituents of petroleum ether extract fraction fromDryopteriscrassirhizomaNakai

YUAN Lipeng1,DENG Guotong1,JIA Xiaozhou1,LIU Haiyan1,YANG Xionghui2,SHEN Zhibin1

(1.SchoolofTraditionalChineseMedicine,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006,China; 2.SinopharmGroupDezhongPharmaceuticalLimitedCompany,Foshan528000,China)

Abstract:Objective To study the chemical constituents of petroleum ether extract fraction from Dryopteris crassirhizoma Nakai. Methods The chemical constituents of petroleum ether extract fraction were isolated by silica gel column chromatography,Sephadex LH-20 column chromatography and semi-preparative chromatography. The structures of the compounds were identified on the basis of physiochemical properties and spectral analyses. Results Five compounds were isolated and identified as Cholesta-4-en-3-ol (1),Chalinasterol (2),Friedelan-3,4-lactona (3),β-sitosterol (4),Daphnoretin (5) respectively. Conclusion Compounds 1～3 and 5 were isolated from Dryopteris crassirhizoma Nakai for the first time.

Key words:Dryopteris crassirhizoma Nakai; chemical constituents; structural identification; steroids

DOI:10.16809/j.cnki.1006-8783.2015102501

中图分类号：R284.2

文献标志码：A

文章编号:1006-8783(2016)01-0019-03

作者简介：袁丽鹏(1990—)，男，2013级硕士研究生，Email：1315935853@qq.com；通信作者：沈志滨(1964—)，女，博士，教授，硕士生导师，主要从事中药药效物质基础和复方制剂质量控制的研究，Email：szb8113@126.com。

基金项目：广东省自然科学基金项目(2015A030313585)；国家中医药管理局行业专项(201507004)

收稿日期：2015-10-25

网络出版时间：2016-01-15 16:50网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160115.1650.004.html