肉鸡感染鸡传染性支气管炎病毒的诊断

陈云政 青海省门源县农牧和科技局 810300

肉鸡感染鸡传染性支气管炎病毒的诊断

陈云政 青海省门源县农牧和科技局 810300

2015年10月，青海省海北州某肉鸡饲养场饲养的肉仔鸡发生了以呼吸困难、食欲减退、饮欲增加、流泪、流鼻涕、咳嗽、打喷嚏、缩头闭目和虚弱嗜睡为主要特征的疫病，经临床和实验室诊断，确诊为由感染IBV所致的鸡传染性支气管炎。

传染性支气管炎；病毒；肉鸡；诊断

2015年10月，青海省海北州某肉鸡饲养场饲养的肉仔鸡爆发了以呼吸困难、食欲减退、饮欲增加、流泪、流鼻涕、咳嗽、打喷嚏、缩头闭目和虚弱嗜睡为主要特征的疫病，经临床初步诊断和实验室诊断，最后确诊为由感染IBV所致，现将整个诊断过程报道如下。

（1）材料与方法。病毒RNA提取试剂盒购自北京百泰克生物技术有限公司；一步法RT-PCR试剂盒购自宝生物工程（大连）有限公司

（2）临床诊断。调查鸡场的发病情况，观察临床症状和病理变化。

（3）实验室诊断。无菌采集病死鸡的气管和肾脏等组织病料，以1∶5的比例加入灭菌生理盐水后浆匀、碾磨，反复冻融3次，以10000r/分钟离心10分钟，吸取上清液，即得临床病料样品。将临床病料样品经0.45μm滤膜过滤后，以尿囊腔方式接种11日龄SPF鸡胚10枚，0.2mL/胚，同时用灭菌生理盐水接种10枚SPF鸡胚作为对照，37℃孵育120小时，弃去24小时内死亡鸡胚，24小时后死亡鸡胚随时取出，无菌收获尿囊液，观察死亡鸡胚的病变情况，传至3代。按照病毒RNA提取试剂盒说明书分别提取临床病料样品和第3代分离毒株的病毒基因组RNA。参照潘志刚等[5]的方法设计合成1对IBV特异性检测引物，以提取的临床病料样品和第3代分离毒株的基因组RNA为模板。参照潘志刚等[5]的方法分别进行临床病料样品和第3代分离毒株的RT-PCR扩增，RT-PCR扩增结束后经1％琼脂糖凝胶电泳检测。

2 结果与分析

（1）临床诊断结果。刚开始雏鸡经常拥挤在一起，随后雏鸡开始食量减少，饮水量增加，并开始排白色稀粪，此时采用土霉素进行药物治疗，病情未见好转。随着病情逐渐加重，已呈全鸡群发病，出现流鼻涕、流泪、咳嗽、打喷嚏、伸颈张口喘气、缩头闭目、垂翅和虚弱嗜睡等症状，鸡冠呈蓝紫色，死亡率不断增加，至临诊前死亡率已达到20％。剖检病死鸡可见主要病变在呼吸道和肾脏，鼻腔、气管和支气管内充血，并伴有淡黄色黏液性渗出物，气囊浑浊，肾肿大呈花斑状，肾小管内有尿酸盐沉积。

（2）实验室诊断结果。接种病料样品的SPF，鸡胚在接种36小时后出现死亡。死亡鸡胚可见胚体矮小、卷曲呈球形，羊膜水肿增厚，即呈现典型的“侏儒胚”病变特征。部分胚体具有尿酸盐沉积，剖检鸡胚可见肾脏肿大。传至第3代，鸡胚集中死亡时间在36～48小时，死亡鸡胚的病变特征更加明显。RT-PCR扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳检测显示，临床病料样品和第3代分离毒株的RT-PCR扩增产物在位于459bp左右处均具有特异性条带，其大小与潘志刚等[5]的报道一致，表明临床病料样品和分离毒株均为IBV阳性。

（3）综合诊断结果。根据发病情况、临床症状和病理变化观察，初步诊断为肾型鸡传染性支气管炎，经病毒分离与鸡胚病变观察和RT-PCR检测等实验室诊断，确诊该鸡场此次的疫病致病原为IBV。

3 讨论

IBV高度的基因突变率造成了IBV不同毒株抗原性的差异性和复杂的血清型，各血清型之间没有或者仅有部分的交叉免疫保护作用，而目前我国IBV商品化的疫苗绝大多数均为呼吸型IBV毒株，该类疫苗对呼吸型IBV具有良好的保护作用，但对肾型IBV的保护率较低，导致了近年来肾型IBV迅速成为我国的地方优势流行毒株。肾型IBV与其他型IBV的典型临床特征是排白色石灰样粪便，典型的病理变化是肾脏有大量尿酸盐沉积。此次病例的临床诊断中就是根据此典型特征初步诊断为疑似肾型IBV感染。本研究在对病死鸡病变脏器的采集与处理后，通过传代SPF鸡胚，使鸡胚产生缩小卷曲的特征完全符合IBV的生物学特性，同时进行了RT-PCR检测，RT-PCR检测结果再次证实了此次疫病为肾型IBV感染，综合多方面诊断后出具确诊结果，使本次病例诊断的准确性大大提高。

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