流式细胞术在急性白血病微量残留测定中的应用分析

郭芳 王升 张琰 陈院朝

(河南省安阳地区医院 血液科 河南 濮阳 455000)

流式细胞术在急性白血病微量残留测定中的应用分析

郭芳 王升 张琰 陈院朝

(河南省安阳地区医院 血液科 河南 濮阳 455000)

目的 流分析式细胞术在急性白血病微量残留(MRD)检测中的应用价值。方法 选取2012年1月至2014年7月河南省安阳地区医院收治的86例急性白血病患者，其中急性髓细胞白血病54例、急性淋巴细胞白血病32例，自诱导缓解后每次化疗前行骨髓穿刺检查，标本经流式细胞仪分析，根据初次免疫分型结果行MRD测定，MRD≥0.1%为MRD阳性标准。结果 MRD阳性患者复发率高于MRD阴性者，差异有统计学意义(P<0.05)。自发现急性白血病MRD阳性至疾病复发的时间为1～12个月，多数病例在发现急性白血病MRD阳性4个月左右出现细胞形态学复发。结论 流式细胞术测定MRD能够预测疾病预后。

急性白血病；微量残留；流式细胞术

急性白血病是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病，在治疗过程中容易复发，复发后无论选择化疗还是骨髓移植的治愈率均明显下降，因此需要一些检测手段来预测疾病的预后，指导治疗方案的选择，提高治愈率[1]。白血病微量残留(minimal residual disease，MRD)检测是通过各种方法检测体内剩余白血病细胞数量。目前MRD检测主要有两种方法，一种是白血病基因检测，另一种是流式细胞术检测。白血病基因检测是检测引起白血病的特殊基因从而了解白血病细胞数量多少。目前因已知引起白血病的基因较少，这种检测手段受到限制。流式细胞术检测是通过检测细胞表面分子识别白血病细胞，从而了解体内白血病细胞数量多少的一种方法，这种方法几乎适合90%以上的白血病患者。本文就流式细胞术在急性白血病MRD检测中的应用价值进行分析，具体如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年1月至2014年7月河南省安阳地区医院收治的86例急性白血病患者(排除失访者及多次诱导化疗不缓解者)，其中急性髓细胞白血病54例，包括FAB分型的M0～M6各型，急性淋巴细胞白血病32例，包括T和B淋巴细胞白血病。患者年龄为3～73岁，中位年龄46岁。所有病例均符合FAB和WHO关于急性白血病的诊断和分类标准。

1.2 检测方法 所有患者在急性白血病诊断时均已行白血病免疫分型检查。自诱导缓解治疗1个疗程开始，每次化疗前于髂后上棘行骨髓穿刺，骨髓液经EDTA或肝素抗凝，溶血素溶解红细胞后在显微镜下计数有核细胞数。加入荧光素标记的抗体，充分混匀后室温避光孵育30 min，洗涤后应用五色流式细胞仪(Beckman公司)行白血病MRD检测，MRD≥0.1%为阳性，<0.1%为阴性。所有患者均观察至2016年7月或患者疾病细胞形态学复发(原幼细胞>5%)为止。

1.3 统计学方法 采用SPSS 19.0软件进行统计学分析及处理，定性资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

诱导缓解治疗达到完全缓解后，流式细胞术监测到MRD阳性病例共21例，其中11例白血病复发，复发率为52.38%；MRD阴性病例共59例，其中复发10例，复发率为16.95%。MRD阳性患者复发率高于MRD阴性者，差异有统计学意义(P<0.05)。自发现急性白血病MRD阳性至疾病复发的时间为1～12个月，多数病例在发现急性白血病MRD阳性4个月左右出现细胞形态学复发。

3 讨论

在急性白血病的治疗过程中迫切需要发现一种或几种能有效预测白血病转归的方法，指导临床治疗方法的选择。流式细胞术检测MRD病灶是上世纪90年代前后发展起来的，最初用于体外实验和动物实验，实验目的主要为了解药物等各种治疗方法的效果及疾病本身的性质[1-3]，随着实验的成功，逐渐应用于人类，用途也有所改变，开始应用其测量白血病微量残留病灶。

本文就流式细胞仪在急性白血病MRD检测中的应用价值进行研究。从研究对象上来说，本研究具有普遍性，主要表现在研究对象年龄分布从3岁至73岁，按照FAB分类有急性髓细胞白血病(M0～M6型)、急性淋巴细胞白血病T细胞系及B细胞系，实验结论基本适用于各类人群。既往关于流式细胞术测定MRD预测患者疾病转归的研究中往往选择几个测量点，如白血病完全缓解后、化疗第8、15、33天等时间点进行MRD测定[2]。本文是对患者进行全程MRD监测，可以看到，诱导缓解治疗达到完全缓解后，无论何时出现MRD阳性，均有可能出现疾病复发，而不仅限于选取的测量点，从研究数据上看，很多病例MRD值逐渐上升，如果能早期发现MRD值阳性，通过改变治疗方法可能避免疾病复发，而选点测量法可能漏掉最佳测量点。曾有文献报道诱导缓解治疗1个疗程后MRD即转为阴性的患者预后明显好于MRD阳性患者[3]。本研究经诱导缓解治疗1个疗程后，疾病的转归与MRD阴性与否无关，分析原因可能因本文病例数偏少所致，也可能诱导缓解治疗缓解深度确实与疾病最终转归无关，这仍需要进一步研究证实。本研究还观测到MRD阳性至白血病细胞形态学复发(原幼细胞数大于5%)间隔时间为1～12个月，多数复发在MRD阳性4个月左右，与既往报道的观测结果[4]基本一致，这个时间差就给一部分患者通过检测MRD值及时改变治疗策略争取了机会。

虽然流式细胞术在检测急性白血病微量残留，判断疾病预后中有一定作用，但是研究过程中我们也发现一些问题。理论上，流式细胞术检测MRD精确度可以达到0.01%，但各个实验室实际精确度却有所不同[5]，还需要统一的实验室规范，以利于交流及更好地进行数据分析。经过统计学分析发现，MRD阳性与白血病复发有相关性，理论上能够预测疾病的转归，研究中发现部分患者MRD阳性至观察终点，疾病仍处于细胞形态学完全缓解中，而另有一少部分患者MRD阴性疾病复发，这就可能出现一部分患者过度治疗而另一部分患者因未能及时调整治疗方案而影响治疗效果。研究表明MRD阳性至疾病复发多数在4～5个月，但间隔时间为1～23个月不等，少数患者即使频繁监测MRD持续阴性，但仍存在疾病突然复发等一系列问题，这些都需要进一步研究，使流式细胞术测定急性白血病MRD预测疾病转归更具有实用性。

[1] 吴韶清,廖灿,谢闺娥,等.多参数流式细胞术在儿童急性B淋巴细胞白血病微量残留病检测中的应用[J].实用医学杂志,2012,28(7):1184-1186.

[2] 陈军浩.流式细胞术在临床及科研中的应用[J].临床检验杂志,2012,30(10):861-864.

[3] 王亚哲,刘艳荣,主鸿鹄,等.多参数流式细胞术检测急性髓系白血病微量残留病的预后意义[J].中国实验血液学杂志,2009,17(3):551-556.

[4] 陈树辉,黎绍仕.流式细胞术在临床医学中的应用进展[J].中国实用医药,2008,3(24):187-189.

[5] 刘鑫,庞铁光.流式细胞术在白血病和淋巴瘤诊断中的应用[J].内蒙古民族大学学报(自然科学版),2010,25(3):347-350.

733.71

10.3969/j.issn.1004-437X.2016.12.113

2016-03-26)