西安市2 841例女性人乳头瘤病毒感染状况及基因型分析

杨瑞利，翟华丽，沈建军王飞霞

(长安医院检验科，陕西 西安 710016)

西安市2 841例女性人乳头瘤病毒感染状况及基因型分析

杨瑞利，翟华丽，沈建军王飞霞

(长安医院检验科，陕西 西安 710016)

目的 分析西安市女性宫颈上皮细胞人乳头瘤病毒(HPV)感染状况和基因亚型分布特点，以了解本地区HPV感染现状，为宫颈癌的防治提供参考依据。方法采用聚合酶链反应(PCR)-反向点杂交技术，对2013年1月至2014年12月来我院妇科就诊的2 841例女性患者的宫颈黏液进行HPV分型检测，分析HPV在女性人群中的感染率、基因型分布和年龄分布特点。结果2 841例样本中HPV阳性样本639例，总感染率为22.49%。检出的高危亚型中前3种型别依次为HPV52型、58型、16型；低危型感染以HPV6型最高，其次是HPV11型。感染者以≤20岁年龄组最高，不同年龄段的HPV感染率差异有统计学意义(χ2=61.87，P＜0.01)。结论该地区女性HPV感染常见亚型为HPV52型、58型、16型，年轻女性感染率最高，HPV基因的准确分型对宫颈癌的早期预防和诊断有重要意义。

西安；人乳头瘤病毒；基因型；分布

人乳头瘤病毒(HPV)是一种具有高度特异性的嗜上皮性病毒，属双链闭环的球形小DNA病毒，广泛存在于自然界，多数情况下HPV感染为一过性，然而高危型HPV的持续感染是引起宫颈癌发病的重要因素，低危型HPV持续感染主要与尖锐湿疣有关。目前宫颈癌是仅次于乳腺癌，严重危害女性健康的第二大恶性肿瘤，中国每年新发宫颈癌13万余人，占世界新发病例的28.8%，发病人群趋于年轻化[1]。研究表明，HPV基因型的分布具有明显的年龄和地区分布特征，因此，本研究对西安市女性宫颈上皮细胞HPV感染和基因分布情况进行分析，同时与其他地区文献报道的HPV感染状况进行比较，对今后本地区制定宫颈癌筛查方案以及研发应用HPV疫苗提供有价值的参考资料。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013年1月至2014年12月到本院妇科就诊并进行HPV分型筛查的2 841例患者，年龄16～80岁，平均48岁。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 均由专科医生使用阴道窥器暴露宫颈，用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物后，将宫颈刷置于宫颈口，顺时针旋转5周，将所有标本置于有细胞保存液的取样管中，密闭送检。

1.2.2 试剂及仪器 HPV分型检测试剂盒购自达安基因股份有限公司，可检测21个HPV亚型，包括高危型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、53、CP8304，低危型：6、11、42、43、44；仪器为达安DA7600 PCR扩增仪。

1.2.3 DNA提取 取含0.5 ml含宫颈细胞的保存液，按试剂说明书步骤操作，提取DNA模板。

1.2.4 PCR扩增 按照说明书加人DNA模板后瞬时离心，PCR反应条件为:93℃，3 min预变性，然后按93℃40 s、55℃40 s、72℃40 s扩增，40个循环，最后72℃延伸7 min。

1.2.5 杂交洗膜显色 严格按照试剂盒说明书进行膜条杂交、洗涤、显色，最后观察结果。

1.2.6 HPV基因分型杂交结果判定 检测结果阳性点为清晰可见的蓝色圆点，每个杂交膜上的生物素结合点及PC点必须显色，否则实验无效。除PC点外：(1)阴性质控品不应该出现蓝圆点；(2)阳性质控品应该出现蓝圆点；(3)依据膜条HPV分型分布图判断阳性点为何种HPV亚型；如观察到1个蓝色圆点为单重感染，出现2个及以上蓝圆点为多重感染。

1.3 统计学方法 应用SPSS 12.0统计软件进行数据分析，定性资料用率(百分比%)表示。不同年龄段人群HPV感染率比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 HPV检测结果分析 在2 841例筛查样本中，HPV检出感染病例639例，总感染率为22.49% (639/2 841)，其中单重感染者586例，占筛查人数的20.63%(586/2 841)，多重感染者53例，占筛查人数的1.87%(53/2 841)。

2.2 HPV感染的年龄分布 将2 841例患者按不同年龄分为≤20岁、21～25岁、26～30岁、31～35岁、36～40岁、41～45岁、46～50岁、＞50岁8个组，统计分析各组HPV感染情况，结果见表1。以≤20岁组HPV感染率最高，达46.91%(38/81)，21～25岁组次之，感染率为28.07%(172/659)，随着年龄的增加，感染率逐渐下降，而到46～50岁组又上升到24.11%(27/112)，50岁以后又开始下降，各年龄段感染率比较差异有统计学意义(χ2=61.87，P＜0.01)，见表1。

表1 2 841例筛查者中各年龄组女性HPV感染情况[例(%)]

2.3 HPV各基因亚型结果分析 HBV感染基因亚型分布情况见表2。由于检测标本存在单重和多重感染病例，故639例感染标本实际检出亚型频数为693，人群感染以高危型为主，共检出高危亚型频数为553，检出率为79.80%(553/693)；检出低危型频数为140，检出率为20.20%(140/693)。检出的高危亚型前三位依次为52型、58型、16型，感染率分别为15.44%、10.10%、8.80%，低危亚型分别为6型、11型、43型，感染率分别为10.53%、6.20%、3.90%。高危型别中单重感染频数最多的前三个型别为52型、58型和16型，二重以上感染频数较多的亚型分别为52型，16型和Cp3804型；低危型别中单重感染频数和二重及以上感染频数一致，分别为6型、11型、43型。

表2 639例HPV感染基因亚型分布情况[频次(%)]

3 讨 论

近年来，宫颈病变已经成为影响女性身心健康的主要疾病，也是女性常见的恶性疾病之一。高危型人乳头瘤病毒阳性是诱发宫颈病变尤其是宫颈上皮内瘤变的主要因素[2]，早期积极地预防与治疗高危型人乳头瘤病毒对减少宫颈病变、降低宫颈癌的发生率具有重要意义。研究证实，在世界范围内罹患宫颈癌的患者中，有93%以上能检测到HPV感染。

目前实验室已分离出110余种HPV DNA，其中30多种与宫颈感染和病变有关[3-5]。本研究结果显示：常见HPV感染及基因型分布存在地理差异:2841例筛查样本中，有639例感染者中检出19种HPV基因亚型，单重感染586例，占筛查人数的20.63%(586/2 841)，多重感染53例，占筛查人数的1.87%(53/28 41)。高危亚型频次为553(79.80%)，低危亚型频次为140(20.20%)，总体感染率为22.49%(639/2 841)，明显高于文献报道金华地区为13.6%，北京地区为17.0%[6-7]，但低于绍兴地区(54.75%)和武汉地区(64.5%)[8-9]，这可能与人群及地区差异有关。人群感染以高危型为主，其中前三位的高危亚型依次为HPV 52型、58型、16型，而全球范围内，前三位分别是HPV16型、18型、58型。廖京平[10]对北京大学第一医院报道门诊人群中HPV16型、58型和52型是这一人群中常见的型别。彭永排等[11]对广州市1 285例志愿者宫颈人乳头瘤病毒感染调查显示前三位的HPV亚型是52型、31型、16型。蒋卫平等[12]对浙江丽水地区288例HPV感染检出居前三位的依次是16型、58型、52型。本研究中52型感染率最高与彭永排等[11]报道的一致，其余均有差异，这可能与人群地域性和标本取材或研究对象都有一定关系。

本研究还表明，HPV感染年龄分布存在差异，HPV感染的高峰年龄为≤20岁，感染率达46.91%。其感染率随着年龄的增长而降低，而46～50岁感染率又上升到24.11%，50岁以上又开始下降，各年龄段感染率比较差异有统计学意义，≤20岁的女性HPV高危型感染率较21～50岁偏高，与席金瓯[13]报道的妇女生殖道HPV感染的高峰年龄是18～28岁基本一致，这可能是因为人在青少年期其免疫系统还未被致敏，导致初次性生活时极易感染HPV[14]。

综上所述，西安地区女性HPV感染检出率居前三位的亚型依次为HPV52型、58型、16型，以单重感染为主，≤20岁年龄组感染率最高，说明对年轻人普及健康知识教育很有必要；对筛查出高危型HPV感染的人群进行追踪检测和干预，能够有效减少宫颈病变，降低宫颈癌的发病率，因此，掌握本地区女性HPV感染状况和基因型分布特征不仅是流行病学调查的需要，而且对宫颈癌的早期诊断、治疗和特异性疫苗的研制具有重要的指导意义。

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[13]席金瓯.武汉地区女性宫颈人乳头瘤病毒感染筛查结果分析[J].国际检验医学杂志,2015,4(36):8-10.

[14]张晓静,袁瑞,代红莹.重庆永川地区妇科门诊人乳头瘤病毒亚型分布的研究[J].重庆医科大学学报,2010,35(9):1407-1410.

Infection status and genotype distributions of human papillomavirus infection in 2 841 women of Xi'an,Shaanxi, CHINA.

YANG Rui-li,ZHAI Hua-li,SHEN Jian-jun,WANG Fei-xia.Department of Clinical Laboratory,the Hospital of Chang'an,Xi'an 710016,Shaanxi,CHINA

ObjectiveTo analyze the infection status and gene distribution of human papillomavirus(HPV)infection in Xi’an,so as to provide data support for the prevention and control of cervical cancer and the clinical application of cervical cancer vaccine.MethodsHPV genotype of cervical mucus of 2 841 screening women in our hospital from January 2013 to November 2014 was detected by polymerase chain reaction(PCR)and reverse dot blot hybridization.The infection rate,genotype and age distribution in the females were analyzed.ResultsAmong the 2 841 women, 639 women were infected by HPV,and the total infection rate of HPV was 22.49%.The first three high-risk HPV subtypes were HPV52,58,16.The infection rate of HPV6 was highest in the low-risk genotypes,followed by HPV11.The infection rate of≤20-year-old group was significantly higher than that of the other groups.There was a significant difference in the infection rate among the various age groups(χ2=61.87,P＜0.01).ConclusionHPV52,HPV58 and HPV16 were the major subtypes in the women of Xi′an.The infection rate of young women was higher than that of the other age groups.The detection of HPV genotypes is very meaningful in early prevention and diagnosis of cervical cancer.

Xi′an;Human papillomavim;Genotype;Distribution

R711.7

A

1003—6350（2016）06—0885—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.06.009

2015-09-23)

沈建军。E-mail:172454089@qq.com