广西贵港市肝癌筛查及HBV基因型分布现况调查

陈启煌邓伟曹骥蔡政民葛莲英

作者单位：530021 南宁1广西医科大学附属肿瘤医院；2广西医科大学研究生院

流行病学调查

广西贵港市肝癌筛查及HBV基因型分布现况调查

陈启煌1，2邓伟1曹骥1蔡政民1葛莲英1

作者单位：530021 南宁1广西医科大学附属肿瘤医院；2广西医科大学研究生院

目的探讨广西贵港市防癌筛查对象的乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染状况及HBV基因型的分布特征。方法分析贵港市3个城区接受肝癌早诊早治筛查的30～59岁共67.75万居民的基本情况，根据HBsAg阳性筛查肝癌高危人群（HBsAg阳性人群），从中按地区以分层抽样的方法选取1 989例高危对象，进行HBV DNA定量检测，以选取HBV DNA病毒拷贝数大于检出限（1×103）的HBsAg携带者，采用PCR-RFLP进行HBV基因分型。结果筛查人群中HBsAg阳性率为11.99%，其中男性HBsAg阳性率高于女性（P＜0.01），不同年龄组HBsAg阳性率差异有统计学意义（P＜0.01），HBsAg阳性率随年龄的增长呈下降趋势。在肝癌高危人群中，HBV DNA病毒拷贝数≥1×103755例，其中HBV A基因型6例（0.79%）、B基因型337例（44.64%）、C基因型293例（38.81%）、D基因型18例（2.39%）、UT基因型101例（13.37%），B和C基因型在男女性中的分布差异无统计学意义（P＞0.05）；各年龄组间HBV基因型的分布差异亦无统计学意义（P＞0.05）。结论广西贵港市3个城区肝癌早诊早治筛查人群的HBV感染率较高，HBV基因型以B和C基因型为主，肝癌早诊率较低，需进一步完善肝癌早诊早治技术方案和管理模式，提高筛查和早诊早治效果。

肝肿瘤；乙型肝炎病毒；基因型；筛查

肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，广西肝癌的发病率位居全部肿瘤的第二位［1］，早发现、早诊断、早治疗的意义重大。乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是肝癌发生的危险因素之一，全球约有2.4亿HBV慢性感染者［2］，我国乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）携带率为7.18%［3］。HBV感染者疾病进展与HBV复制水平、HBV基因型等因素密切相关。为了解广西贵港市参加肝癌早诊早治筛查人群的HBV感染率、HBV复制水平及基因型分布情况，2014年本课题组展开相关调查，现将结果报道如下。

1 材料和方法

1.1 调查对象

按《中国癌症筛查及早诊早治技术方案》（肝癌部分）技术要求［4］，筛查人群来自广西贵港市3个城区（港南区、港北区、覃塘区）居民，年龄30～59岁。筛查对象均签署知情同意书，现场建立人口档案。根据HBsAg阳性筛查出肝癌高危人群（HBsAg阳性人群），从中按地区以分层抽样的方法选取1 989例高危对象，检测其血清HBV DNA复制水平。为保证PCR扩增效率，选取HBV DNA病毒拷贝数大于检出限（1×103）的HBsAg携带者，进一步进行HBV基因分型。

1.2 血清HBV DNA含量检测

采用PCR-荧光探针法（乙型肝炎病毒核酸定量测定试剂盒购自中山大学达安基因股份有限公司）检测HBV DNA含量，检测步骤参照试剂说明书。取200 μL血清样本，加入450 μL和4 μL的内标溶液，振荡混匀15 s，10 000 r/min离心5 s，100℃恒温处理10 min， 12 000 r/min离心5 min，最后进行PCR扩增。检测的下限值为100 IU/mL。

1.3 血清HBV DNA的提取、扩增和PCR-RFLP

取患者200 μL血清提取HBV DNA（QIAGEN公司QIAamp MinElute Virus Spin Kit），操作步骤按照试剂说明书进行。采用普通PCR扩增HBV前S区基因，引物：P1（5'-TCAC-CATATTCTTGGGAACAAGA-3'，nt 2823-2845）；P2（5'-TTCCTGAACTGGAGCCACCA-3'，nt 80-61）。反应条件：95℃5min；94℃60s，58℃45s，72℃60 s，40个循环；72℃10 min。用限制性内切酶Ava2和Dpn2（购自Thermo Scientific公司）对PCR扩增产物进行平行酶切，酶切后的产物经3.0%琼脂糖凝胶电泳后鉴定。具体步骤参见文献［5］。

1.4 统计学处理

采用SPSS 23.0统计学软件对数据进行分析。计数资料采用百分率表示，各组资料间两两比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 广西贵港市肝癌早诊早治筛查基本情况

贵港市港南区、港北区、覃塘区3个城区30～59岁户籍人口数为67.75万人，实际参加筛查的人数为150 124人，其中男性71 081人，占47.35%，平均年龄（44.49±8.20）岁；女性79 043人，占52.65%，平均年龄（45.38±7.97）岁，采血检测任务完成率为23.92%，筛查人群基本情况见表1。调查结果显示，共18 005例居民HBsAg阳性，即本次调查的肝癌高危人群，其中AFP阳性414例，阳性率为2.30%。筛查共发现58例肝癌患者，其中早期肝癌为13例，早期诊断率为22.41%。58例肝癌筛查患者中，56例接受了治疗，治疗率为96.55%，结果见表2。

表1 广西贵港市肝癌早诊早治筛查人群基本情况

2.2 HBsAg阳性率及其性别、年龄和地区分布

广西贵港市参加肝癌早诊早治筛查的150 124人中，HBsAg阳性者18 005人，阳性率为11.99%，其中男性阳性率为13.91%（9 888/71 081），女性阳性率为10.27%（8 117/79 045），两者差异有统计学意义（χ2=470.26，P＜0.01）。30～39岁、40～49岁和50～59岁年龄组HBsAg阳性率分别为15.72%、11.70%和9.13%，差异有统计学意义（χ2=939.14，P＜0.01）。港北区、港南区、覃塘区HBsAg阳性率分别为12.48%（4 659/37 338）、13.07%（4 136/31 642）和11.35%（9 210/ 81 144），差异亦有统计学意义（χ2=74.94，P＜0.01）。

2.3 HBV感染者DNA复制水平分析

18 005例肝癌高危人群中，随机抽取1 989份标本进行HBV DNA定量检测。其中男性1 063例（53.44%），女性926例（46.56%）；30～39岁、40～49岁、50～59岁年龄组分别为653例、791例、534例；HBVDNA病毒拷贝数＜1×1031 234例（62.04%），HBV DNA病毒拷贝数≥1×103755例（37.96%）。755例HBV DNA病毒拷贝数≥1×103的无临床症状HBsAg携带者中，男性427例（56.56%），女性328例（43.44%），差异有统计学意义（χ2=4.74，P＜0.05）；755例样本中30～39岁年龄组255例，40～49岁年龄组293例，50～59岁年龄组207例，差异无统计学意义（χ2=0.49，P＞0.05）。

2.4 HBV基因型分布的情况

755例HBV DNA病毒拷贝数≥1×103的HBsAg携带者中，HBV A基因型6例（0.79%）、B基因型337例（44.64%）、C基因型293例（38.81%）、D基因型18例（2.39%）、UT基因型101例（13.37%），提示贵港市基因型可能以B和C基因型为主。进一步分析HBV B和C基因型，发现男性B、C基因型分别有185例、152例，女性B、C基因型分别有174例、119例，二者比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。B基因型在30～39岁、40～49岁、50～59岁年龄组中分别有111例、133例、93例，C基因型分别有112例、106例、75例，各年龄组HBV基因型分布差异均无统计学意义（P＞0.05）。HBV各基因型的PCR产物经内切酶Ava2和Dpn2酶切后的电泳图谱见图1。

表2 广西贵港市肝癌早诊早治筛查人群基本情况

图1 HBV各基因型的电泳图谱

3 讨论

慢性乙型病毒性肝炎是严重危害人类健康的传染性疾病。据世界卫生组织报道，全球约20亿人曾感染HBV，其中2.4亿人为慢性HBV感染者［2］。HBV感染被公认为原发性肝癌的主要病因，全球约45%的肝癌由HBV引起［3］。2006年全国乙型肝炎血清流行病学调查结果显示，我国一般人群HBsAg携带率为7.18%［3］，其中广西为8.8%［6］。本调查结果显示，广西贵港市参加肝癌早诊早治筛查的150 124人中，HBsAg阳性者18 005人，阳性率为11.99%，显著高于上述报道的全国HBsAg阳性率结果。在各年龄段HBsAg阳性率分布方面，杨进业等［7］1992年调查结果显示，广西人群HBsAg阳性率在7～9岁人群中达到高峰。而本次调查结果显示，在30～59岁人群中，HBsAg阳性率随年龄增大而降低，30～39岁年龄段的阳性率最高。原因可能是1992年乙型肝炎疫苗纳入儿童计划免疫管理后，儿童的HBsAg阳性率明显下降［8］，但1992年前出生的人群由于没有或极少接种乙型肝炎疫苗，未建立有效的免疫屏障，导致感染乙型肝炎病毒的机会增大，所以成人人群的HBsAg阳性率仍维持在较高水平。

在不同性别HBsAg阳性率分布中，本次调查结果显示，男性阳性率为13.91%，女性为10.27%，男性比女性高，差异有统计学意义，与国内的其他报道一致［6］，与肝癌发病率男性比女性高的规律相符［9］。此外，本次调查中，港南区、港北区的HBsAg阳性率明显高于覃塘区，提示不同地区HBV感染的情况亦不同。

HBV DNA定量检测主要用于判断慢性HBV感染的病毒复制水平，以监测乙型肝炎病毒感染病情发展情况，亦可用于抗病毒治疗适应证的选择及其疗效判断［3］。本调查结果显示，HBV DNA病毒拷贝数≥1×103的人群占37.96%。根据最新的慢性乙型肝炎防治指南推荐，HBV DNA病毒拷贝数≥1×104的患者需接受抗病毒治疗，1×103≤病毒拷贝数＜1×104的人群应持续监测肝功能，并定期复查HBV DNA。

有研究显示早期确诊的小肝癌接受治疗后5年生存率明显高于中晚期肝癌［10］。本调查结果显示肝癌早诊率为22.41%，远低于启东地区（70.31%）［11］和中山市（66.7%）［12］。分析可能有以下原因：（1）本次调查诊断性筛查完成率相对较低，仅为23.92%；（2）筛查人群配合度较低，对健康筛查不够积极；（3）适龄人员大量外出。因此，在今后的筛查工作中要加大宣传力度，提高早诊率，加强对高危人群的筛查。

有研究表明，HBV感染患者的病程进展、预后和抗病毒治疗的疗效与HBV基因型有密切关系［13］。从1988年首次根据基因同源性的差异（≥8%）［14］对HBV进行基因分型以来，至今HBV已被分为A～H共8个基因型［13］，不同的HBV基因型株有相对明显的地域分布，我国基因型主要为B型和C型，其中北方地区以C基因型为主，南方地区以B基因型为主［15］。目前，多项研究表明D基因型较A、C、B基因型的肝脏炎症程度及纤维化程度更严重，同时C、D基因型也是慢性感染向肝硬化和肝癌进展的危险因素［16-17］。本调查结果发现贵港市HBV基因型主要有A、B、C、D基因型，其中以B和C基因型为主，A和D基因型少见。目前在广西尚未发现HBV E、HBV F、HBV G、HBV H基因型的流行。本次调查结果与李召发等［18］和郑丹等［19］报道广西扶绥地区的基因型及葛宪民等［20］报道桂林市基因型分布不同，可能与HBV基因型的地域分布、分型方法不同等因素有关。因此必须通过基于人群的HBV基因型检测及分布情况进行调查，以进一步了解广西HBV基因型的分布概况。本调查结果亦发现，HBV基因型在男性、女性间及各年龄组间的分布均无统计学意义，提示性别及年龄对广西贵港市HBV基因型的分布尚无明显影响。

总之，肝癌仍然是广西负担最重的疾病［21］，而接种乙肝疫苗是预防控制乙肝病毒感染传播和肝癌发生最经济有效的措施。从1992年国家将乙肝疫苗纳入计划免疫管理以来，广西新生儿乙肝表面抗原（HBsAg）携带率已降至1%以下，有效预防了乙肝、肝硬化和肝癌的发生［7］。但1992年前出生的人群，尤其是目前30～40岁的人群，应积极对其开展肝癌筛查，以发现肝癌高危人群，达到早期筛查、早期诊断和早期治疗。本次调查通过对贵港市常驻人群的筛查，对肝癌高危人群的HBsAg DNA含量及基因型进行检测，进一步了解该地区HBV复制水平和基因型分布，对相关疾病的防治提供了一定的依据。

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［2016-10-15收稿］［2016-11-18修回］［编辑 罗惠予］

Epidemiology of HBV infection and viral genotypes from liver cancer prevention screening in Guigang City，Guangxi Province

Chen Qihuang1，2，Deng Wei1，Cao Ji1，Cai Zhengmin1，Ge Lianying1（1Affiliated Tumor Hospital of Guangxi Medical University；2Graduate School of Guangxi Medical University，Nanning 530021，P.R.China）

Ge Lianying.E-mail：gelianying1996@126.com

ObjectiveTo analyze data on hepatitis B virus（HBV）infection and viral genotypes collected as part of liver cancer prevention screening in Guigang City，Guangxi Province.MethodsData were collected from residents of Guigang City who agreed toparticipate in liver cancer screening，and 1，989 residents at high risk of liver cancer were randomly selected for quantitative detection of HBV DNA.HBV carriers with an HBV load of≥1×103copies were subjected to analysis by PCR-RFLP to determine HBV genotypes.ResultThe average rate of HBsAg positivity in the study population was 11.99%，and the rate was significantly higher in males than in females（P＜0.01）.The rate differed significantly among different age groups（P＜0.01），declining gradually with increasing age.A total of 755 HBV carriers at high risk of liver cancer were identified to have at least 1×103HBV copies.Of these 755，6（0.79%）were infected with genotype A，337（44.64%）with genotype B，293（38.81%）with genotype C，and 18（2.39%）with genotype D.The genotype in 101 carriers（13.37%）was untypable.These two genotypes did not differ significantly between men and women or among the different age groups.ConclusionThe HBV infection rate is high in the three districts of Guigang City，with HBV genotypes B and C predominating.The rate of early detection of liver cancer is relatively low.Technology and program management should be improved to enhance the efficacy of cancer screening，early detection and treatment.

Liver neoplasms；Hepatitis B virus；Genotype；Screening

R735.7

A

1674-5671（2016）06-05

10.3969/j.issn.1674-5671.2016.06.10

广西科学研究与技术开发计划项目（桂科攻14124003-4）；广西高校科学技术研究项目（KY2015ZD0025）

葛莲英。E-mail：gelianying1996@126.com