中草药免疫增强剂提高蛋鸡免疫力的效果

任荣清， 黄 波*， 余 波， 赵 娟， 陈九甫， 王祥兴

(1.贵州省畜牧兽医研究所， 贵州 贵阳 550005； 2.贵州省石阡县本庄镇农技服务中心， 贵州 石阡 555709； 3.贵州省安龙县农牧科技局， 贵州 安龙 552400)

中草药免疫增强剂提高蛋鸡免疫力的效果

任荣清1， 黄 波1*， 余 波1， 赵 娟2， 陈九甫2， 王祥兴3

(1.贵州省畜牧兽医研究所， 贵州 贵阳 550005； 2.贵州省石阡县本庄镇农技服务中心， 贵州 石阡 555709； 3.贵州省安龙县农牧科技局， 贵州 安龙 552400)

为研制增强蛋鸡自身抵抗力及提高免疫应答的中草药免疫增强剂提供参考，选用20日龄罗曼蛋鸡800羽随机平分为对照组(饲喂基础日粮)，试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组分别在基础日粮中添加0.1%、0.2%和0.3%的中草药免疫增强剂，进行为期100 d饲养试验。结果表明：在基础日粮中添加0.1%～0.3%的免疫增强剂可极显著提高IgG值25.52%～32.43%、IgA值17.19%～24.71%、IgM值32.72%～41.62%，可提高新城疫免疫抗体平均滴度0.95～1.57，提高禽流感H5免疫抗体滴度0.56～0.87、禽流感H9免疫抗体滴度0.80～1.41。在基础日粮中添加免疫增强剂的量以0.2%～0.3%为佳。

中草药免疫增强剂； 蛋鸡； 新城疫； 禽流感； 免疫球蛋白

随着我国蛋鸡养殖规模的不断扩大，蛋鸡受到传染性疾病的威胁也越来越大。为了防控疾病和提高蛋鸡的生产性能，饲料生产企业、养殖企业大量使用以抗生素为主的饲料添加剂，在促进生长、预防疾病、提高畜禽成活率的同时，导致细菌产生耐药性和畜产品药物残留，从而影响人类健康。功能性饲料的开发利用，既能防病治病，又能提高生产性能，防止耐药性产生与药物残留，在健康养殖中日益受到人们的关注与重视。中草药由于毒副作用小、不产生抗药性或抗药性很小、无残留，作为添加剂使用由来已久，越来越得到国内外许多学者的高度重视[1]。现代医学已证明，许多中草药具有调节机体免疫功能、抗病原体作用、营养作用、激素样作用、抗应激作用及对机体物质代谢产生积极的影响，能替代部分抗生素使用，对生产性能没有影响[2]。为中草药在养鸡生产上的应用提供参考，笔者根据传统中医理论和现代医学对中草药药理及功效的研究结果[3]，于2013年11月28日至2014年2月20日在石阡县鸿宇畜禽生态养殖农民专业合作社养殖场进行了中草药影响蛋鸡免疫功能的试验。

1 材料与方法

1.1 蛋鸡及分组

供试蛋鸡为20日龄罗曼蛋鸡，800只，随机平分为4组：对照组，饲喂基础日粮；试验Ⅰ组，饲喂基础日粮+0.1%免疫增强剂；试验Ⅱ组，饲喂基础日粮+0.2%免疫增强剂；试验Ⅲ组，饲喂基础日粮+0.3%免疫增强剂。在同一鸡舍内相邻笼养，每组鸡1组笼舍，自由采食、自动饮水，光照时间一致。试验期100 d。

1.2 基础日粮

0～15 d选用怀化正大肉小鸡料饲喂；15～40 d、41～70 d和71～120 d选用长沙伟嘉饲料有限公司提供的3%生长蛋鸡预混料及玉米、麦麸、石粉、豆油等原料，参照厂商提供的配比标准组成不同营养水平的基础日粮。

1.3 免疫增强剂

中草药原料购自贵阳市中药材批发市场。炙黄芪22.2%、党参16.7%、白术16.7%、柴胡13.9%、升麻11.1%、金银花13.9%、鱼腥草11.1%和炙甘草8.3%，按比例混合后粉碎，过80目筛，混匀备用。

1.4 疫苗及检测试剂

鸡新城疫冻干苗、灭活油乳剂，购自天津瑞普生物技术股份公司；禽流感H5+H9疫苗，购自青岛易邦生物工程有限公司。禽流感H5、H9，新城疫标准抗原、阳性血清，购自青岛易邦生物工程有限公司。鸡免疫球蛋白酶联免疫分析试剂盒，由上海谷研实业有限公司提供并代为检测。

1.5 鸡免疫处理

试验鸡群按免疫程序进行疫苗接种，鸡新城疫冻干疫苗于5日龄、20日龄和50日龄接种，新城疫灭活油乳剂于20日龄和50日龄接种，禽流感(H5+H9)疫苗于30日龄和70日龄接种。

1.6 免疫效果及免疫力检测

1.6.1 样本采集 免疫后10 d首次采集鸡血0.5～1 mL，之后每隔10 d采集1次，共采集8次，每次采样10 只，并制备成血清保存备用。

1.6.2 血清免疫球蛋白测定 将采集的鸡血清样本保存于-20℃环境中，收集完所有血清样本后用双抗体夹心法按试剂盒说明书测定免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)，在450 nm波长下读取吸光度， 计算免疫球蛋白含量。

1.6.3 血清免疫抗体测定 制备新鲜1%无抗公鸡红细胞悬液，配制4单位抗原并加以验证，然后用红细胞凝集抑制试验测定鸡新城疫，禽流感H5、H9免疫抗体滴度。

1.7 数据处理

血清中IgG、IgA和IgM含量和抗体滴度用平均值±标准差表示，数据用SPSS19软件作单因素方差分析，用LSD法作多重比较。

2 结果与分析

2.1 血清免疫球蛋白含量

从表1看出，在70日龄或80日龄时，血清中免疫球蛋白的含量最高，后随日龄增加呈下降趋势。30～100日龄时对照组、试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组的IgG平均含量分别为41.26 μg/mL、51.79 μg/mL、52.88 μg/mL和54.64 μg/mL，试验Ⅰ～Ⅲ组分别比对照组极显著增加25.52%、28.16%和32.43%，试验Ⅲ组分别比试验Ⅰ组、Ⅱ组高5.50%和3.33%，但差异不显著；IgA平均含量分别为184.46 ng/mL、219.16 ng/mL、225.71 ng/mL和230.04 ng/mL，试验Ⅰ～Ⅲ组分别比对照组极显著增加17.19%、22.36%和24.71%，试验Ⅲ组比试验Ⅰ组、Ⅱ组高4.96%和1.92%，但差异不显著；IgM平均含量分别为164.41 ng/mL、218.20 ng/mL、224.39 ng/mL和232.84 ng/mL，试验Ⅰ～Ⅲ组分别比对照组极显著增加32.72%、36.48%和41.62%，试验Ⅲ组分别比试验Ⅰ组显著增加6.71%，比试验Ⅱ组高3.77%，但差异不显著。

表1 各组罗曼蛋鸡不同日龄的免疫球蛋白含量

注：相同指标同列大写字母不同表示差异极显著(P<0.01)，小写字母不同表示差异显著(P<0.05)(下同)。

Note: Different capital and lowercase letters in the same column indicate significance of difference atP<0.01andP<0.05 level respectively. The same below.

表2 各组罗曼蛋鸡不同日龄的免疫抗体滴度

2.2 新城疫、禽流感H5、H9血清免疫抗体滴度

从表2看出，在同一日龄时，试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组的新城疫、禽流感H5、H9免疫抗体的平均滴度均比对照组高，且离散度小，抗体维持时间较长。30～100日龄时对照组、试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组的平均鸡新城疫抗体滴度分别为8.1、9.35、9.67和9.05，试验Ⅰ～Ⅲ组分别比对照组高1.25、1.57和0.95个滴度；禽流感H5平均抗体滴度分别为4.82、5.38、5.69和5.39，试验Ⅰ～Ⅲ组分别比对照组高0.56、0.87和0.57个滴度；禽流感H9平均抗体滴度分别为6.69、7.49、8.1和7.98，试验Ⅰ～Ⅲ组分别比对照组高0.8、1.41和1.29个滴度。

3 结论与讨论

3.1 中草药免疫增强剂可提高蛋鸡的免疫力

IgG、IgA、IgM作为机体含量较高的免疫分子物质，在抗病毒、抗菌、抗外毒素及激活补体杀菌、溶菌、调理吞噬等多种免疫防御机制中起重要作用[4]，在体液中的含量越高，机体的抵抗力越强。本试验免疫增强剂由黄芪、党参、白术、柴胡、升麻、金银花、鱼腥草、甘草等组成，这些原料具有清热解毒，抗菌消炎、抗病毒，调节机体免疫功能，保肝，利尿等作用[3]。试验结果表明，在基础日粮中添加0.1%～0.3%的免疫增强剂饲喂罗曼蛋鸡，可极显著提高IgG值25.52%～32.43%，提高IgA值17.19%～24.71%，提高IgM值32.72%～41.62%。表明，添加免疫增强剂的功能饲料可显著提高生长蛋鸡的免疫力和抗病力。与薛掌林等[5]用复方中草药制剂喂养罗曼蛋鸡的结果一致。

3.2 中草药免疫增强剂能提高生长蛋鸡的免疫应答

试验结果表明，在基础日粮中添加0.1%～0.3%的免疫增强剂饲喂罗曼蛋鸡，可分别提高新城疫、禽流感H5、H9的免疫抗体平均滴度0.95～1.57、0.56～0.87和0.80～1.41。表明，在日粮中加入免疫增强剂可提高蛋鸡主要疫病的免疫应答效果。与罗安智等[6]用中草药制成汤剂喂养京白商品代雏鸡的结果一致。但免疫增加剂使用后血清中免疫球蛋白含量在70～80日龄达到最高值，随后下降，其原因有待进一步研究。

3.3 免疫增强剂的最佳用量

试验结果表明，添加0.3%免疫增强剂组的IgG、IgA和IgM含量最高，但与添加0.1%组、0.2%组间差异不显著。添加0.2%免疫增强剂组的新城疫、禽流感H5、H9抗体滴度高。因此，在基础日粮中添加免疫增强剂的量以0.2%～0.3%为好。但添加免疫增强剂的功能性饲料是否更能保护个体不受病原感染，有待进一步做攻毒保护试验。由于本试验在蛋鸡疫苗接种的高频期进行研究，蛋鸡处于未开产时期，因此对蛋鸡产蛋率的影响有待进一步研究。

[1] 陆文总，高玉鹏，李丽莉.鸡用中草药添加剂应用研究进展[J].中国畜牧兽医，2005，32(4)：16-18.

[2] 邱玉朗，万伶俐，王晓阳，等.中草药添加剂替代抗生素对肉仔鸡生产性能的影响[J].兽药与饲料添加剂，2005(4)：7-8.

[3] 刘钟杰，许剑琴.中兽医学[M].北京：中国农业出版社，2007.

[4] 崔治中，崔保安.兽医免疫学[M].北京：中国农业出版社，2004.

[5] 薛掌林，张述斌，王必慧，等.中草药复方免疫增强剂对蛋鸡免疫功能的影响[J].中国畜牧兽医文摘，2011(6)：201-203.

[6] 罗安智，齐长明，枉云峰，等.“免疫增益汤”对高母源抗体雏鸡接种ND疫苗的影响及机理研究[J].中国兽医学杂志，2004(2)：3-5.

(责任编辑： 冯 卫)

Effect of Chinese Herbal Medicine Immunopotentiator on Immunity of Laying Hens

REN Rongqing1, HUANG Bo1*, YU Bo1, ZHAO Jun2, CHEN Jiufu2, WANG Xiangxing3

(1.GuizhouInstituteofAnimalHusbandryandVeterinary,Guiyang,Guizhou550005; 2.BenzhuangCenterforAgriculturalTechnologyService,Shiqian,Guizhou555709; 3.AnlongTechnologyBureauofFarmingandStockbreeding,Anlong,Guizhou552400,China)

800 Rohman laying hens with 20 day-old were equally divided into 4 groups (CK, Group Ⅰ, Group Ⅱ and Group Ⅲ) randomly, and then Group Ⅰ, Group Ⅱ and Group Ⅲ were respectively fed with the basic ration plus 0.1%, 0.2% and 0.3% Chinese herbal medicine immunopotentiator for 100 d to study the effect of Chinese herbal medicine immunopotentiator on immune function of Rohman laying hen and to develop Chinese herbal medicine immunopotentiator for improving the autoimmunity of laying hens. Results: The IgG, IgA, IgM, average immune antibody titer of Newcastle disease, H5 immune antibody titer of bird flu and H9 immune antibody titer of bird flu of Roman laying hens fed with the basic ration plus 0.1%～0.3% Chinese herbal medicine immunopotentiator are increase by 25.52%～32.43%,17.19%～24.71%,32.72%～41.62%,0.95～1.57, 0.56～0.87 and 0.80～1.41 compared with CK respectively. In conclusion, the optimum addition percentage of Chinese herbal medicine immunopotentiator in the basic ration is 0.2%～0.3%.

Chinese herbal medicine immunopotentiator; laying hen; Newcastle disease; bird flu; immune globulin

2015-08-05； 2015-12-09修回

贵州省科技成果转化引导基金项目“花溪麦坪省级农业科技园区——蛋鸡健康养殖标准化示范基地建设项目”[黔科合成转字(2014)5086]；贵州省农业科学院专项“蛋鸡健康养殖关键技术集成与示范”[黔农科院院专项(2012)006]

任荣清(1968-)，男，副研究员，从事畜禽疫病研究。E-mail:rrqguizhou@aliyun.com

*通讯作者：黄 波(1969-)，女，副研究员，从事畜禽繁殖研究。E-mail: gzsks304371824@qq.com

1001-3601(2016)01-0029-0110-03

S853.74

A